發佈日期：2023年 | 最後審閱日期：2026年5月

細胞培養解離技術

細胞培養的解離是維持細胞培養的關鍵步驟。此步驟旨在將細胞從生長表面剝離，以便進行傳代或收穫。本節概述兩種主要方法：使用無酶解離緩衝液，以及使用酶試劑。

使用無酶細胞解離緩衝液

此方法操作溫和，無需使用酵素即可維持細胞完整性：

1. 準備
   • 使用前請確保所有試劑均已預熱至 37°C，以避免對細胞造成熱衝擊。
2. 移除生長培養基：
   • 將培養容器中的舊培養基棄去。
3. 沖洗
   • 每只 T75 培養瓶或 100 mm 培養皿，以 5 ml 不含鈣與鎂的 PBS 沖洗細胞單層。
   • 於室溫下輕輕搖動培養容器 30 至 60 秒。
   • 吸出並棄置沖洗液。
   • 重複此沖洗步驟一次。
4. 細胞解離
   • 向容器中加入約 5 毫升不含酶的細胞解離緩衝液。
   • 在室溫下輕輕搖晃 1 至 2 分鐘，並在顯微鏡下檢查細胞是否已解離。
   • 如有必要，可將燒瓶或培養皿輕輕敲擊手掌，以使細胞脫落。
   • 如果細胞仍附著，請讓其於室溫下靜置 2 至 5 分鐘，必要時再次輕敲，並添加更多解離緩衝液。
   • 一旦細胞脫落，加入至少 5 毫升的完全培養基以中和分離緩衝液，並將細胞重新懸浮。
5. 存活率檢查
   • 在傳代過程中監測細胞存活率，確保其維持在 90% 以上。

使用其他試劑進行解離

此方法允許使用各種解離試劑：

1. 清除用過的培養基
   • 將培養容器中的舊培養液棄置。
2. 細胞洗滌
   • 使用不含鈣和鎂的平衡鹽溶液，或使用 EDTA 洗滌細胞。
   • 將洗滌液輕柔地加入與細胞相對的一側，搖動培養容器 1 至 2 分鐘後，再倒掉洗滌液。
3. 細胞解離
   • 每 25 平方公分生長表面加入 2 至 3 毫升所選的解離溶液，確保細胞片完全覆蓋。
   • 將培養皿置於 37°C 環境中培養，並輕輕搖晃。視細胞系而定，細胞通常會在 5 至 15 分鐘內脫附。
   • 對於難以分離的細胞，輕敲容器可加速此過程。
   • 請仔細觀察細胞，以避免過度暴露及潛在損傷。
4. 收集細胞
   • 一旦細胞完全脫落，將容器直立，讓細胞沉積在容器底部。
   • 加入完全培養基，然後用移液管在細胞層上方吸取，將細胞分散並收集起來。
   • 計數後進行傳代。

無論採用何種方法，透過實證觀察來確定各細胞系的最佳條件至關重要。此過程應維持細胞存活率，並應在傳代過程中定期檢查，確保其超過 90%。這些程序為研究人員提供了基礎，使其能根據各自細胞系的特定要求與特性進行調整。

貼壁細胞傳代技術概述

要有效進行貼壁細胞的傳代，必須先將其從培養容器中剝離。目前採用多種方法，每種方法適用於不同的細胞類型和條件。在選擇剝離方法時，務必考量該細胞系的特定需求以及實驗目標。 定期監測細胞存活率（目標是在傳代時維持高於 90%），對於維持培養系統的持續健康與生產力至關重要。以下是這些程序的概述：