Linha celular RAW 264.7 na pesquisa com macrófagos e imunologia
A linha celular RAW 264.7 serve como um modelo in vitro robusto para macrófagos murinos, fundamental no campo da pesquisa imunológica. Originadas de um camundongo BALB/c macho, essas células foram transformadas pelo vírus da leucemia murina de Abelson, resultando em uma linha celular semelhante a macrófagos. Devido à sua estabilidade funcional e à capacidade inerente de realizar tanto a fagocitose quanto a pinocitose, as células RAW 264.7 são essenciais para o estudo das interações hospedeiro-patógeno, tornando-as um pilar fundamental nos esforços de pesquisa imunológica [1,2].
- Meio de crescimento
- Consulte a página do produto
- Tempo de duplicação
- Consulte a página do produto
- Tipo de crescimento
- Adere
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende RAW 264.7
Características morfológicas e comportamento de crescimento
Após exame, as células RAW 264.7 apresentam crescimento semiaderente, com propensão a formar tanto células aderentes fusiformes quanto células viáveis esféricas flutuantes, com diâmetro celular variando de 10 a 20 µm. Essa natureza polimórfica e adaptabilidade às condições de cultura tornam as células RAW 264.7 uma ferramenta versátil para manipulação e observação experimentais.
Função imunológica e apresentação de antígenos
Como células apresentadoras de antígenos, as células RAW 264.7 desempenham um papel fundamental no sistema imunológico. Sua função vai além do simples reconhecimento de patógenos, abrangendo o processamento e a apresentação de antígenos às células T, orquestrando assim uma resposta imunológica abrangente. Essa dinâmica facilita uma compreensão mais profunda de como o sistema imunológico identifica e neutraliza entidades estranhas.
Polarização dos macrófagos: o paradigma M0, M1 e M2
As células RAW 264.7, em seu estado basal como macrófagos M0, possuem a notável capacidade de se polarizarem tanto para o fenótipo M1 pró-inflamatório quanto para o fenótipo M2 anti-inflamatório. Essa capacidade de polarização oferece aos pesquisadores um modelo para estudar as influências e os efeitos de várias citocinas e fatores ambientais sobre a função dos macrófagos e as respostas imunológicas [3,4].
Osteoclastogênese e remodelação óssea
Embora não sejam osteoclastos propriamente ditos, as células RAW 264.7 têm sido fundamentais no estudo da osteoclastogênese — o processo de formação dos osteoclastos. Essas células facilitam a investigação da expressão gênica osteoclástica e de sua responsividade à ativação de receptores. Essa pesquisa tem implicações profundas para a compreensão da fisiopatologia de condições como a osteoporose, na qual a remodelação óssea desregulada é uma característica marcante.
Informações sobre a cultura celular RAW 264.7
Antes de iniciar seus experimentos, é importante compreender algumas informações básicas sobre essa poderosa linhagem celular. Você sabe qual é o tempo de duplicação das células RAW 264.7? Qual é a densidade de semeadura dessas células, e elas são aderentes? Além disso, quais são as condições ideais de crescimento para a RAW 264.7? Continue lendo para descobrir todas as respostas de que você precisa para trabalhar com essa incrível linha celular!
Informações sobre cultura celular
Linha celular RAW 264.7
Tempo de duplicação populacional
11 a 30 horas
Adesivas ou em suspensão
Predominantemente aderente, com algumas populações de células em suspensão
Densidade de semeadura
4 x 10⁴ células/cm²
Meio de crescimento recomendado
RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino e L-glutamina (2,5 mM)
Condições ideais de crescimento
Incubadora umidificada com 5% de CO₂ e temperatura de 37 °C
Substituição do meio
2 a 3 vezes por semana
Armazenamento
Fase de vapor de nitrogênio líquido
CM-1 ou CM-ACF
Processo de congelamento
Congelamento lento
Processo de descongelamento
Agitação rápida em banho-maria a 37 °C
Nível de biossegurança
Recomenda-se laboratório de nível BSL-2
Macrófagos murinos RAW 264.7 em diferentes graus de confluência.
Vantagens e desvantagens das células RAW 264.7
Vantagens
- Fácil cultivo: A linhagem celular RAW 264.7 é fácil de cultivar e manter em laboratório, sem requisitos complicados.
- Bem caracterizada: A RAW 264.7 é uma linha celular bem caracterizada, o que significa que possui características fenotípicas e funcionais estáveis.
- Modelo in vitro de macrófagos: Como as células RAW 264.7 são macrófagos, elas exibem funções essenciais semelhantes às dos macrófagos, como fagocitose e pinocitose. Assim, são frequentemente utilizadas como modelo in vitro de macrófagos.
- Diferenciação em osteoclastos: As células RAW 264.7 podem ser diferenciadas em osteoclastos por meio de fatores moleculares específicos. Essas células diferenciadas são capazes de realizar a remodelação óssea, de forma semelhante aos osteoclastos.
Desvantagens
- Representação inadequada dos macrófagos primários: por ser uma linhagem celular transformada, a RAW 264.7 pode não representar com precisão as características dos macrófagos primários e pode apresentar algumas diferenças na expressão gênica, no fenótipo e na função.
- Limitações na triagem de medicamentos: as células RAW 264.7 podem não ser adequadas para todos os tipos de ensaios de triagem de medicamentos, e suas respostas a alguns medicamentos podem diferir das dos macrófagos primários.
- Forte adesão celular: as células RAW 264.7 aderem fortemente à superfície do frasco de cultura e, às vezes, podem ser difíceis de desprendê-las.
Aplicações das células RAW 264.7 na simulação de macrófagos e em estudos imunológicos
Modelagem de respostas imunológicas celulares
A linhagem celular RAW 264.7, que reflete as funcionalidades de macrófagos autênticos, é um modelo fundamental para a investigação das respostas celulares a patógenos e estímulos imunológicos. Um estudo que destacou esse aspecto avaliou os efeitos imunomoduladores e antioxidantes de bactérias do ácido lático inativadas pelo calor nessas células, fornecendo descobertas significativas sobre a regulação do sistema imunológico [5 ].
Complementando isso, uma pesquisa realizada em 2019 elucidou o impacto imunológico da exposição das células RAW 264.7 a polissacarídeos da planta Polygonatum sibiricum. O estudo concluiu que esses compostos desencadeiam uma resposta imunológica por meio da ativação das vias de sinalização NF-κB/MAPK, oferecendo uma compreensão molecular aprofundada [6].
Exploração da osteoclastogênese
Atuando como modelo para estudos de diferenciação de osteoclastos, as células RAW 264.7 contribuem para a elucidação do comportamento dos osteoclastos e das vias de diferenciação. Tais pesquisas ampliam nosso conhecimento sobre os mecanismos de reabsorção óssea e a patogênese da osteoporose. Técnicas avançadas de imagem são frequentemente utilizadas para monitorar alterações intracelulares e analisar o metabolismo do heme nessas células.
Obtenção de insights moleculares sobre a osteoclastogênese
Apesar de seu papel principal como modelo de macrófagos, as células RAW 264.7 também são empregadas em pesquisas de osteoclastogênese in vitro. Ao induzir características semelhantes às dos osteoclastos nessas células, os pesquisadores obtêm insights sobre o processo de diferenciação e o comportamento dos pré-osteoclastos, embora seja crucial considerar as características inerentes e a origem da linhagem celular nesses estudos.
Triagem de bioatividade de produtos naturais
A triagem de bioatividade em produtos naturais é outra aplicação na qual as células RAW 264.7 se destacam. Por exemplo, seu uso em um estudo coreano que investigou as propriedades imunoestimuladoras de uma mistura de ervas demonstrou a eficácia da linhagem celular na identificação de compostos bioativos em substâncias naturais [7 ].
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Publicações científicas que utilizam células RAW 264.7
Existem muitas publicações científicas disponíveis sobre a linhagem celular de macrófagos de camundongo RAW 264.7:
- Os polissacarídeos da Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induzem uma resposta imunológica na linhagem celular RAW 264.7 por meio da via NF-κB/MAPK: Este estudo propôs que os polissacarídeos obtidos da planta Polygonatum sibiricum podem desencadear uma resposta imunológica na linhagem celular de macrófagos de camundongo RAW 264.7 por meio da regulação da cascata de sinalização NF-κB/MAPK.
- Efeitos imunomoduladores do extrato de Tinospora crispa e de seus principais compostos nas funções imunológicas dos macrófagos RAW 264.7: Este artigo, publicado na revista International Immunopharmacology, descreve que o extrato da planta Tinospora crispa e seus principais constituintes exercem um efeito imunomodulador e imunoestimulador sobre a linhagem celular de macrófagos RAW 264.7.
- Bactérias do ácido lático inativadas pelo calor inibem a produção de óxido nítrico por meio da óxido nítrico sintase induzível e da ciclooxigenase-2 em células RAW 264.7: Este estudo propôs que as bactérias do ácido lático inativadas pelo calor podem ser potencialmente utilizadas na síntese de produtos probióticos, pois possuem propriedades imunomoduladoras e antioxidantes. Os pesquisadores utilizaram células RAW 264.7 para estudar essas atividades biológicas.
- Efeito de uma formulação à base de ervas no aumento da resposta imunológica em macrófagos RAW 264.7: Este estudo utilizou células RAW 264.7 para investigar o efeito imunoestimulador de uma formulação à base de ervas denominada KM1608. O estudo sugeriu a KM1608 como um potencial agente de aumento da resposta imunológica.
- Uma triagem de plantas utilizadas na medicina tradicional colombiana revelou o potencial anti-inflamatório dos cálices de Physalis angulata: este artigo, publicado no Saudi Journal of Biological Sciences, investigou o potencial anti-inflamatório de 10 plantas tradicionais colombianas comumente utilizadas, utilizando células RAW 264.7 estimuladas com LPS.
Células RAW 264.7: Recursos, protocolos, vídeos e muito mais
As células RAW 264.7 são frequentemente utilizadas em estudos de transfecção. Os recursos a seguir explicam diferentes métodos de transfecção utilizados para a linhagem celular RAW 264.7.
- Transfecção de células RAW 264.7: Este site fornece um protocolo para a transfecção de macrófagos RAW 264.7 utilizando um reagente de lipofectamina.
- Protocolo de transfecção: este artigo publicado descreve um protocolo detalhado para a transfecção de células RAW 264.7.
- Método eficiente de transfecção para células RAW 264.7: Este documento descreve outra abordagem prática de transfecção utilizando células RAW 264.7.
Vídeos relacionados à linhagem celular RAW 264.7
- Cultivo de células RAW 264.7: Este vídeo explica o protocolo de repico de células RAW 264.7.
- Método de transfecção: Este vídeo trata da transfecção de células RAW 264.7 com um gene repórter.
Perguntas frequentes essenciais sobre a linha celular RAW 264.7: insights sobre a mimetização de macrófagos e a pesquisa sobre osteoclastogênese
A linha celular RAW 264.7 foi derivada da ascite de um tumor induzido pelo vírus da leucemia murina de Abelson (A-MuLV) em um camundongo BALB/c macho.
As células RAW 264.7 são utilizadas como modelo para macrófagos devido à sua capacidade de desempenhar funções essenciais, como a fagocitose e a pinocitose, que são indicativas de respostas imunes inatas.
Sim, embora as células RAW 264.7 não sejam osteoclastos, elas podem ser utilizadas para estudar o processo de osteoclastogênese e a expressão gênica osteoclastogênica, o que contribui para nossa compreensão da saúde óssea e de doenças como a osteoporose.
As células RAW 264.7 respondem a estímulos microbianos imitando as respostas dos macrófagos, o que as torna ideais para o estudo das interações hospedeiro-patógeno e das respostas celulares a diversos sistemas biológicos.
A produção de citocinas nas células RAW 264.7 é fundamental para a compreensão do processo inflamatório e das vias de sinalização celular envolvidas nas respostas imunológicas, como as vias NF-κB/MAPK.
Não, as células RAW 264.7 não são células primárias; trata-se de uma linhagem celular imortalizada. Células primárias são aquelas retiradas diretamente de tecido vivo e que têm uma vida útil limitada em cultura.
As células RAW 264.7 são cultivadas em meios específicos que favorecem seu crescimento e são mantidas sob condições controladas de temperatura e atmosfera, a fim de garantir sua estabilidade funcional para uso experimental.
As células RAW 264.7, em seu estado basal (M0), podem ser polarizadas para apresentar propriedades pró-inflamatórias do tipo M1 ou anti-inflamatórias do tipo M2, dependendo dos estímulos aos quais são expostas na cultura.
Sim, as células RAW 264.7 são frequentemente utilizadas para avaliar a bioatividade de produtos naturais, incluindo compostos de origem vegetal, quanto aos seus possíveis efeitos imunomoduladores ou terapêuticos.
Entre os marcadores típicos estão o F4/80 e o CD11b, que são comumente utilizados para confirmar o fenótipo semelhante ao dos macrófagos das células RAW 264.7, juntamente com seus marcadores funcionais, como a fosfatase ácida resistente e a atividade fagocítica.
Referências
- Taciak, B., et al., Avaliação da estabilidade fenotípica e funcional da linhagem celular RAW 264.7 por meio de passagens em série. PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
- Wang, S., et al., Macrófagos inflamatórios interrompem a maturação e a mineralização dos osteócitos por meio da regulação da via de sinalização Notch. Molecular Medicine, 2022. 28(1): p. 102.
- Orekhov, A.N., et al., Diferenciação de monócitos e polarização de macrófagos. Vessel Plus, 2019. 3: p. 10.
- Khabipov, A., et al., Polarização de macrófagos RAW 264.7 por células de câncer pancreático – um modelo para o estudo de macrófagos promotores de tumor. Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
- Kang, C.-H., et al., Bactérias do ácido lático inativadas pelo calor inibem a produção de óxido nítrico por meio da óxido nítrico sintase induzível e da ciclooxigenase-2 em células RAW 264.7. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
- Zhang, J., et al., Os polissacarídeos de Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induzem uma resposta imunológica na linhagem celular RAW264.7 por meio da via NF-κB/MAPK. RSC Advances, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
- Trinh, T.A., et al., Efeito de uma formulação à base de ervas no aumento da resposta imunológica em macrófagos RAW 264.7. Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.