Células P19 – Pesquisa sobre carcinoma embrionário utilizando células P19
P19 é uma linhagem celular de carcinoma embrionário murino. É amplamente utilizada na pesquisa biomédica, principalmente para o estudo da biologia do desenvolvimento, da biologia das células-tronco, da diferenciação celular e da triagem de medicamentos. Como as células P19 possuem capacidade de diferenciação, elas podem ser úteis na investigação de processos biológicos complexos, como a formação de tecidos e o desenvolvimento embrionário inicial. Neste artigo, discutiremos os fundamentos das células P19 derivadas de camundongos.
- Meio de crescimento
- Meio DMEM/Ham’s F12 contendo 5% de soro fetal bovino, 3,1 g/L de glicose, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio, 15 mM de HEPES e 1,2 g/L de NaHCO₃ é utilizado para a cultura de células P19.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação relatado para a linha celular P19 é de aproximadamente 2 a 3 dias.
- Tipo de crescimento
- A linhagem celular de carcinoma embrionário P19 é aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomendar P19
- Características gerais e origem das células P19
- Informações sobre o cultivo das células P19
- Linha celular P19: vantagens e desvantagens
- Aplicações de pesquisa das células P19
- Adquira hoje mesmo sua linha celular P19
- Células P19: Publicações de pesquisa
- Recursos para a linha celular P19: protocolos, vídeos e muito mais
- Explorando a linha celular P19: perguntas frequentes
- Referências
- Perguntas frequentes
Características gerais e origem das células P19
É essencial conhecer as características gerais e a origem de uma linha celular antes de começar a trabalhar com ela. Esta seção abordará o seguinte: O que é a linha celular P19? Qual é o tamanho da célula P19? Qual é a origem das células P19?
- A P19 é um tipo de célula de carcinoma embrionário pluripotente, originalmente obtida a partir de um teratocarcinoma desenvolvido em um camundongo C3H/He. A linha celular foi estabelecida pela primeira vez em 1982 por McBurney e Rogers.
- As células P19 podem crescer continuamente em meios de cultura suplementados com soro. Elas podem ser diferenciadas em outros tipos de células quando expostas a drogas não tóxicas, como o ácido retinóico e o dimetilsulfóxido (DMSO) [1].
- Essas células de carcinoma de camundongo possuem uma morfologia semelhante à epitelial.
- A linhagem celular P19 apresenta um cariótipo masculino euploide (n=40; XY).
Informações sobre o cultivo de células P19
A linhagem celular P19 é amplamente cultivada em laboratórios de pesquisa devido às suas características únicas. Sua cultura é fácil e simples de manejar. Esta seção apresenta todas as informações essenciais necessárias para manter e proliferar a cultura de células P19. Vamos descobrir: Qual é o tempo de duplicação das células P19? Como se cultiva a linhagem celular P19? A P19 é uma linhagem celular aderente?
Pontos-chave para a cultura de células P19
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação relatado para a linha celular P19 é de aproximadamente 2 a 3 dias.
Adesiva ou em suspensão:
A linhagem celular de carcinoma embrionário P19 é aderente.
Proporção de subcultura:
As células P19 devem ser subcultivadas a cada 48 horas, e uma proporção de divisão de 1:10 deve ser mantida para essas células. As células aderentes são lavadas com solução salina tamponada com fosfato 1X e incubadas com Accutase até que se dissociem. As células são adicionadas ao meio de cultura e colhidas por centrifugação. As células coletadas são cuidadosamente ressuspensas e distribuídas em novos frascos.
Meio de crescimento:
Meio DMEM/Ham’s F12 contendo 5% de soro fetal bovino, 3,1 g/L de glicose, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio, 15 mM de HEPES e 1,2 g/L de NaHCO₃ é utilizado para a cultura de células P19.
Condições de crescimento:
Uma incubadora umidificada ajustada a 37 °C com suprimento de 5% de CO₂ é essencial para o crescimento e a cultura da linhagem celular de carcinoma embrionário P19.
Armazenamento:
Os frascos de células P19 congeladas devem ser armazenados a temperaturas inferiores a -150 °C em um freezer ou na fase de vapor de nitrogênio líquido para manter a viabilidade das células a longo prazo.
Processo de congelamento e meio:
Os meios CM-1 ou CM-ACF podem ser utilizados para congelar as células P19 por meio de um método de congelamento lento que protege as células contra qualquer choque e preserva sua viabilidade.
Processo de descongelamento:
As células P19 congeladas podem ser descongeladas em banho-maria a 37 °C, agitando-se rapidamente o frasco por 40 a 60 segundos. As células são adicionadas a meio fresco e centrifugadas para remover os elementos do meio de congelamento. O sedimento celular é novamente ressuspenso, e as células são transferidas para um novo frasco para crescimento.
Nível de biossegurança:
São necessárias instalações laboratoriais com nível de biossegurança 1 para a linhagem celular P19.
Linha celular P19: vantagens e desvantagens
Esta seção abordará as vantagens e desvantagens da linha celular P19.
Vantagens
- Potencial de diferenciação: as células P19 podem se diferenciar em vários tipos celulares, incluindo cardiomiócitos, neurônios e células microgliais. Elas requerem substâncias não tóxicas para a diferenciação, como o ácido retinóico e o dimetilsulfóxido (DMSO). O ácido retinóico induz o desenvolvimento de neurônios, microglia e astrócitos, enquanto o DMSO inicia o desenvolvimento de cardiomiócitos com batimentos e células do músculo liso. Assim, as células P19 são úteis no estudo da diferenciação celular e dos processos de desenvolvimento.
- Sistema modelo: A linhagem celular pluripotente de carcinoma embrionário P19 é um modelo valioso para o estudo do desenvolvimento embrionário inicial. Pesquisadores utilizam as células P19 para elucidar as vias de sinalização celular e os mecanismos celulares e moleculares envolvidos nesses processos.
Desvantagens
- Origem murina: A P19 é uma linhagem celular de carcinoma embrionário murino. Consequentemente, os resultados de estudos que utilizam essas células podem não ser totalmente aplicáveis à biologia e aos processos humanos.
Aplicações de pesquisa das células P19
As células P19 têm diversas aplicações em pesquisa devido à sua capacidade de diferenciação e à sua relevância para a biologia do desenvolvimento e a pesquisa com células-tronco. Algumas das principais aplicações das células de carcinoma embrionário P19 incluem:
- Estudos de diferenciação celular: Como sabemos, as células P19 podem se diferenciar em neurônios, células microgliais, células musculares lisas e cardiomiócitos; por isso, são amplamente utilizadas para estudar processos de diferenciação celular. Além disso, auxiliam na investigação do desenvolvimento neural e cardíaco e dos mecanismos subjacentes. Um estudo realizado em 2018 descobriu que as espécies reativas de oxigênio (ROS) direcionam a diferenciação das células P19 em tipos celulares específicos e impedem a indução de outros [3]. Outro estudo explorou o processo de diferenciação neural mediado pelo ácido retinóico e constatou o envolvimento da via de sinalização PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia do desenvolvimento: as células P19 são um modelo inestimável para o estudo do desenvolvimento embrionário inicial. Elas ajudam os pesquisadores a compreender processos biológicos complexos, como a formação de tecidos durante o desenvolvimento embrionário. A pesquisa utilizou células P19 e estudou os fatores moleculares que contribuem para a formação da comunicação interventricular (VSD). Os resultados revelaram que um RNA não codificante longo, o SNHG6, contribui para a DIV ao regular negativamente o miRNA-101 e ativar a via Wnt/β-catenina [5].
- Testes de medicamentos: a linhagem celular de carcinoma embrionário de camundongo P19 também é utilizada para a triagem de potenciais candidatos a medicamentos. Um estudo utilizou neurônios diferenciados a partir de células P19 e investigou os efeitos neuroprotetores inibidores da acetilcolinesterase da L-Dopa sintética e do extrato aquoso de sementes de Mucuna pruriens. Os resultados mostraram que o extrato vegetal apresentou resultados promissores em comparação com a L-Dopa [6].
Adquira hoje mesmo sua linha celular P19
Células P19: Publicações científicas
Esta seção do artigo abordará algumas publicações de pesquisa interessantes que tratam das células P19.
Este artigo foi publicado na revista Oncology Reports em 2017. O estudo propôs que os hormônios sexuais hipofisários impulsionam a adesão, a proliferação e a migração de linhagens celulares de teratocarcinoma, incluindo as células P19.
Esta publicação na revista Experimental & Molecular Medicine (2018) utilizou células P19 e estudou a função do RNA não codificante longo uc.4. Os resultados revelaram que o uc.4 afeta a diferenciação celular por meio da modulação da via de sinalização do TGF-beta.
Este artigo de pesquisa foi publicado em 2018 no Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. O estudo constatou que o extrato de tecido cerebral natural e a cultura celular 3D podem acelerar a diferenciação das células de carcinoma embrionário P19 em células neurais.
Este estudo foi publicado no Journal of Ethnopharmacology em 2020. O estudo propôs que o extrato de folhas de Cichorium intybus L. pode induzir a diferenciação de células de carcinoma embrionário P19 em células β pancreáticas produtoras de insulina.
Esta pesquisa foi publicada na revista *Molecules* (2022). O estudo explorou os efeitos neuroprotetores e inibidores da acetilcolinesterase do extrato de sementes de *Mucuna pruriens* em neurônios da linha celular P19.
Recursos para a linhagem celular P19: protocolos, vídeos e muito mais
A seguir, apresentamos alguns recursos sobre as células P19.
- Protocolo de diferenciação neuronal das células P19: este artigo contém o protocolo de diferenciação neuronal das células P19 e outras informações úteis sobre a diferenciação dessas células.
- Transfecção de células P19: este link ajudará você a conhecer o protocolo de transfecção das células P19.
O link a seguir contém o protocolo de cultura das células P19.
- Células P19: Este site contém todas as informações úteis sobre a linha celular P19, incluindo suas condições de cultura, meios de cultura para células P19, divisão celular e muito mais.
A diferenciação cardíaca nas células P19 refere-se à sua capacidade de se desenvolverem em células semelhantes aos cardiomiócitos sob condições específicas, como a presença de dimetilsulfóxido (DMSO). Essa propriedade as torna úteis para o estudo da diferenciação dos cardiomiócitos e do desenvolvimento das células do músculo cardíaco.
As células P19 indiferenciadas podem ser induzidas a se diferenciar em vários tipos de células, incluindo células neuronais e cardíacas. Essa transição é influenciada pelas condições de cultura e pela aplicação de agentes de diferenciação, como o ácido retinóico para os neurônios e o DMSO para as células do músculo cardíaco.
Os marcadores de diferenciação neuronal nas células P19 incluem genes associados à neurogênese, como aqueles que codificam neurotransmissores e genes marcadores neuronais específicos. Esses marcadores ajudam a identificar e caracterizar o fenótipo neuronal.
A expressão dos canais iônicos nas células P19 pode ser estudada por meio da análise da expressão do mRNA dos genes dos canais iônicos e de ensaios funcionais para avaliar a atividade desses canais. Isso é fundamental para compreender como os canais iônicos contribuem para as funções celulares e para a neurogênese.
As células P19 expressam genes do relógio biológico, que regulam os ritmos circadianos que afetam diversas funções celulares. A pesquisa sobre esses genes ajuda a compreender a interação entre o relógio circadiano e processos celulares, como a regulação do ciclo celular e o metabolismo.
Sim, sob certas condições, as células P19 podem se diferenciar em células gliais, ampliando seu uso em estudos sobre neurogênese e o papel das células gliais no sistema nervoso central.
A caracterização do fenótipo neurotransmissor nas células P19 envolve a identificação dos neurotransmissores específicos que elas produzem, o que é essencial para estudos sobre neurotransmissão e função neural.
Agregados de células P19 são utilizados para modelar estruturas tridimensionais mais complexas que imitam mais fielmente os tecidos, aprimorando os estudos sobre interações celulares e desenvolvimento tecidual.
As células multipotentes P19cl6 são um subclone das células P19, capazes de se diferenciar em diversos tipos de células, incluindo células neuronais e cardíacas. Sua multipotência as torna valiosas para diversas aplicações de pesquisa.
O efeito de fatores externos nas células P19 pode ser estudado por meio de diversos ensaios, incluindo ensaios de colônias para caracterizar o crescimento e a diferenciação, bem como avaliações eletrofisiológicas para compreender as alterações na função celular.
Referências
- McBurney, M.W., Células de carcinoma embrionário P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., Linha celular de carcinoma embrionário P19: um modelo para o estudo das interações gene-ambiente. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey e G. Rödel, As ROS mitocondriais direcionam a diferenciação das células P19 pluripotentes murinas. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., O ácido retinóico todo-trans induz a diferenciação das células P19 em neurônios envolvidos na via de sinalização PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., O RNA não codificante longo SNHG6 contribui para a formação do defeito do septo ventricular por meio da regulação negativa do miR-101 e da ativação da via Wnt/β-catenina. Die Pharmazie — Revista Internacional de Ciências Farmacêuticas, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., O extrato aquoso de sementes de Mucuna pruriens apresentou melhores efeitos neuroprotetores e inibidores da acetilcolinesterase em comparação com a L-dopa sintética. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.