Células Hep3B: Pesquisa e descobertas sobre o carcinoma hepatocelular
A HEP3B é uma linhagem celular imortalizada derivada de hepatócitos humanos com carcinoma. É amplamente utilizada em pesquisas sobre hepatotoxicidade e metabolismo de medicamentos. A eficiência de transfecção da HEP3B é considerável; portanto, essas células são comumente empregadas para estudar o desenvolvimento, a progressão e as intervenções terapêuticas do câncer de fígado. Este artigo aborda todas as informações necessárias sobre a linhagem celular HEP3B para auxiliá-lo no trabalho com ela. Principalmente, ele incluirá:
- Meio de crescimento
- Para a cultura das células HEP3B, utiliza-se o meio EMEM contendo 10% de FBS, 2,2 g/L de NaHCO₃, 2 mM de L-glutamina e a Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS).
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células HEP3B é de aproximadamente 36 horas.
- Tipo de crescimento
- Essa linhagem celular de hepatoma é aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende HEP3B
- Características gerais e origem das células HEP3B
- Informações sobre o cultivo da linhagem celular HEP3B
- Linha celular HEP3B: vantagens e limitações
- Aplicações das células HEP3B na pesquisa
- Publicações sobre a linhagem celular HEP3B
- Recursos para a linhagem celular HEP3B: protocolos, vídeos e muito mais
- Características gerais e origem das células HEP3B
- Informações sobre o cultivo da linhagem celular HEP3B
- Linha celular HEP3B: vantagens e limitações
- Aplicações das células HEP3B na pesquisa
- 5. Publicações sobre a linhagem celular HEP3B
- Recursos para a linhagem celular HEP3B: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Características gerais e origem das células HEP3B
As principais informações necessárias sobre uma linhagem celular são sua origem e características gerais. Elas podem ajudá-lo a decidir sobre seu uso em sua pesquisa e a lidar com ela. Esta seção do artigo aborda todas as informações essenciais sobre a origem e as características das células HEP3B. Aqui você aprenderá: O que são as linhas celulares HEP3B? Qual é a origem das células HEP3B? Qual é a morfologia das células HEP3B?
- A HEP3B, uma linhagem celular contínua de hepatoma humano, teve origem no tecido hepático de um menino africano de 8 anos com carcinoma hepatocelular (CHC). Ela foi estabelecida por Aden e colegas em 1979 no laboratório de Barbara B. Knowles, no Instituto Wistar, na Filadélfia, EUA [1].
- As células HEP3B apresentam integração do genoma do vírus da hepatite B (VHB) em seu cromossomo.
- Essas células de carcinoma hepatocelular apresentam morfologia epitelial.
- As células HEP3B apresentam um número modal de cromossomos de 60. Ao contrário das células HepG2, elas não possuem um cromossomo 1 rearranjado.
Qual é a diferença entre HepG2 e HEP3B?
As células HepG2 e HEP3B diferem no número de cromossomos por célula. As células HEP3B contêm 60 cromossomos, enquanto as células HepG2 têm, em média, 55 cromossomos. Além disso, as células HepG2 são não tumorigênicas e negativas para hepatite B, ao passo que as células HEP3B são tumorigênicas e positivas para HBV.
Informações sobre o cultivo da linhagem celular HEP3B
Conhecer as informações sobre o cultivo de uma linha celular pode facilitar muito o seu trabalho. Esta seção aborda todos os pontos-chave para o cultivo da linha celular HEP3B do HBV, incluindo: Qual é o tempo de duplicação das células HEP3B? Quais são as condições de cultivo das células HEP3B? Como se cultiva as células HEP3B do HCC?
Pontos-chave para a cultura de células HEP3B
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células HEP3B é de aproximadamente 36 horas.
Adesivas ou em suspensão:
Essa linhagem celular de hepatoma é aderente.
Proporção de subcultura:
As células HEP3B são subcultivadas na proporção de 1:2 a 1:4. As células HEP3B aderentes são lavadas com PBS 1x e, em seguida, incubadas com a solução de dissociação Accutase. Após 8 a 10 minutos, adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas. As células colhidas são então cuidadosamente ressuspensas e transferidas para frascos contendo meio de cultura na proporção de divisão recomendada.
Meio de crescimento:
Utiliza-se meio EMEM contendo 10% de FBS, 2,2 g/L de NaHCO₃, 2 mM de L-glutamina e Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) para a cultura de células HEP3B.
Condições de crescimento:
As células HEP3B são cultivadas em uma incubadora umidificada a 37 °C com suprimento contínuo de 5% de CO₂.
Armazenamento:
As células HEP3B congeladas são armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C em um freezer elétrico ou na fase de vapor de nitrogênio líquido.
Processo de congelamento e meio:
O meio de congelamento recomendado para as células HEP3B é o CM-1 ou o CM-ACF. As células são congeladas por meio de um processo de congelamento lento, que permite apenas uma redução de 1 °C na temperatura por minuto, a fim de proteger a viabilidade celular.
Processo de descongelamento:
As células congeladas são descongeladas em banho-maria pré-ajustado a 37 °C por 40 a 60 segundos. Posteriormente, essas células são adicionadas ao meio de crescimento fresco e centrifugadas para remover os elementos do meio de congelamento. As células coletadas são ressuspensas e distribuídas em novos frascos para crescimento.
Nível de biossegurança:
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para o cultivo de células HEP3B.
Linha celular HEP3B: vantagens e limitações
A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular amplamente utilizada. Esta seção abordará algumas das principais vantagens e limitações dessas células de hepatoma.
Vantagens
As principais vantagens das células HEP3B são:
Fácil de cultivar
As células HEP3B não apresentam requisitos complexos de cultura celular, o que as torna fáceis de manusear e manter em um laboratório de pesquisa. Isso simplifica os procedimentos experimentais.
Alta eficiência de transfecção
As células HEP3B apresentam notável eficiência de transfecção, o que as torna amplamente utilizadas em estudos relacionados à manipulação genética e à expressão gênica.
Tumorigenicidade
A HEP3B é uma linhagem celular de carcinoma hepatocelular tumorigênica, capaz de formar tumores quando injetada em um camundongo imunocomprometido. Isso auxilia no estudo da progressão e do desenvolvimento do câncer por meio de modelos de xenoenxertos com HEP3B.
Status do P53 nas células HEP3B
As células HEP3B possuem uma mutação no gene P53 semelhante à observada no carcinoma hepatocelular (CHC) e em outros tipos de câncer, o que as torna relevantes para o estudo dos efeitos da mutação no P53 sobre o crescimento, o desenvolvimento e a progressão do câncer.
Limitações
A limitação associada à linhagem celular HEP3B é:
Modelo celular in vitro
A linhagem celular HEP3B serve como um modelo in vitro de células de carcinoma hepatocelular (CHC). No entanto, ela pode não representar totalmente a complexidade do CHC tal como encontrado em organismos vivos. Consequentemente, os resultados experimentais in vitro podem diferir daqueles observados in vivo.
Aplicações das células HEP3B na pesquisa
A linhagem celular HEP3B oferece diversas aplicações na pesquisa biomédica. Algumas das principais aplicações das células HEP3B incluem:
- Biologia do câncer: a HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular humano. Trata-se de um modelo celular inestimável para investigar os mecanismos celulares e moleculares subjacentes ao desenvolvimento e à progressão do HCC. Pesquisadores utilizam essas células para estudar mutações genéticas, processos celulares e vias de sinalização celular associadas ao câncer de fígado. Por exemplo, um estudo utilizou células HEP3B e descobriu que o microRNA-223-3p regula os componentes do inflamassoma NLRP3, inibe a proliferação e aumenta a apoptose das células de hepatocarcinoma HEP3B [2].
- Triagem e desenvolvimento de medicamentos: a linhagem celular HEP3B também é utilizada para testar, selecionar e desenvolver novas terapêuticas contra o carcinoma hepático. Além disso, é utilizada para avaliar a toxicidade e a eficácia de diferentes medicamentos e tratamentos anticâncer. Pesquisadores também utilizaram essas células de hepatoma para estudar o metabolismo de medicamentos. Eles utilizaram células HEP3B e avaliaram o potencial citotóxico do extrato da planta Cotinus coggygria em células de carcinoma hepatocitário HEP3B [3].
- Infecções virais: A HEP3B é uma linhagem celular positiva para o vírus da hepatite B; portanto, é empregada para estudar infecções virais que podem levar ao desenvolvimento de câncer de fígado, ou seja, o VHB e o VHC. Isso pode ajudar a compreender melhor as infecções virais e a desenvolver possíveis tratamentos antivirais. Por exemplo, um estudo utilizou células cancerosas de hepatócitos HEP3B e investigou a importância da ubiquitinação para a propagação do vírus da hepatite C. Os resultados sugeriram que a protease 15 específica para ubiquitina (USP15) está envolvida na propagação do HCV por meio da regulação de funções específicas dos hepatócitos, incluindo a formação de gotículas lipídicas e a tradução do RNA do HCV [4].
5. Publicações sobre a linhagem celular HEP3B
Esta seção do artigo abordará algumas publicações de pesquisa interessantes sobre as células HEP3B.
Regulação da apoptose e da autofagia pela luteolina em células Hep3B de câncer hepatocelular humano
Esta publicação na revista *Biochemical and Biophysical Research Communications* (2019) propôs que o estresse do retículo endoplasmático induzido pelo composto luteolina pode exercer efeitos antitumorais em células HEP3B sem P53, de maneira independente do P53.
Possível ação do lupeol, isolado da Avicennia marina, contra células de câncer de fígado HEP3B
Este estudo publicado na revista *Archiv der Pharmazie* (2021) propôs um triterpenóide pentacíclico, o lupeol, como um potencial agente anticâncer contra as células HEP3B.
Este artigo foi publicado na revista Molecular Medicine Reports (2017). Os resultados do estudo indicam que o extrato etanólico de Cnidium monnieri (L.) Cusson induz a morte celular (apoptose) e a parada do ciclo celular nas células de hepatocarcinoma HepG2 e HEP3B por meio da regulação das vias de sinalização p53 e Akt/GSK-3β.
Esta pesquisa, publicada na revista *Biomolecules and Therapeutics* (2020), propôs que a auranofina exibe atividade sinérgica e promove a apoptose mediada pelo sulforafano nas células HEP3B por meio da ativação da via PI3K/AKT.
Este artigo de pesquisa publicado na revista *BioFactors* (2023) propôs que o RNA circular-0072309 exerce efeitos antitumorais nas células de carcinoma hepatocelular HEP3B ao ter como alvo o miRNA-665.
Recursos para a linhagem celular HEP3B: protocolos, vídeos e muito mais
A seguir, apresentamos alguns recursos disponíveis sobre as células HEP3B:
- Transfecção de HEP3B: este vídeo explica o protocolo de transfecção para células HEP3B.
- Eficiência da transfecção de HEP3B: este link ajudará você a conhecer a composição do meio DMEM para HEP3B, a repicagem de células e o protocolo de transfecção para células HEP3B. Além disso, fornece informações para otimizar o uso do reagente Lipofectamine 3000 em seu protocolo de transfecção.
O link a seguir contém o protocolo de cultura de células HEP3B:
- Condições de cultura de HEP3B: Este link ajudará você a conhecer o protocolo para manuseio e manutenção de culturas de Huh7 e HEP3B.
- Células HEP3B: Este site contém muitas informações sobre as células HEP3B, incluindo meios de cultura para HEP3B, o protocolo para divisão celular, descongelamento e manuseio de culturas proliferativas e criopreservadas.
Referências
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origem e propriedades de linhagens celulares de carcinoma hepatocelular. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., O miRNA-223-3p regula o NLRP3 para promover a apoptose e inibir a proliferação das células Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. e S. Selen-Isbilir, Efeito citotóxico do extrato de Cotinus coggygria na linhagem celular cancerosa Hep3B. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., A USP15 participa da propagação do vírus da hepatite C por meio da regulação da tradução do RNA viral e da formação de gotículas lipídicas. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi.01708-18.