Linha celular HT22
A HT22 é uma linha celular neuronal murina comumente utilizada em pesquisas na área de neurociência. É valiosa para o estudo de doenças neurodegenerativas e para o teste de possíveis terapias ou tratamentos neuroprotetores. Além disso, as células HT22 são sensíveis ao glutamato e, por isso, são utilizadas para investigar a toxicidade induzida pelo glutamato ou danos neuronais.
- Meio de crescimento
- O meio DMEM é utilizado para o cultivo das células HT22. Ele é suplementado com 10% de FBS, 4,5 g/L de glicose, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃ e 1,0 mM de piruvato de sódio para garantir o crescimento celular ideal.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células HT22 é de aproximadamente 15 horas.
- Tipo de crescimento
- As células HT22 são aderentes.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende HT22
Este artigo destaca os aspectos essenciais das células HT22 que podem auxiliá-lo em seu trabalho de pesquisa. Ele abordará principalmente:
- Atributos gerais e origem das células HT22
- Informações sobre o cultivo da linhagem celular HT22
- Vantagens e desvantagens da linhagem celular HT22
- Aplicações de pesquisa da linhagem celular HT22
- Publicações científicas que abordam as células HT22
- Recursos para as células HT22: protocolos, vídeos e muito mais
Características gerais e origem das células HT22
Esta seção do artigo esclarecerá a origem e as características gerais das células HT22. É necessário conhecer essas informações sobre uma linhagem celular antes de iniciar o trabalho com ela. Aqui, você aprenderá: O que são as células HT22? Qual é a morfologia das células hipocampais HT22? Qual é o tamanho das células HT22?
A HT22 é uma linhagem celular contínua derivada da região do hipocampo do cérebro de camundongo. Trata-se de um subclone da linhagem celular parental HT-4, desenvolvida por meio da imortalização de tecidos neuronais murinos utilizando o antígeno T do poliomavírus sensível à temperatura, o vírus símio 40 (SV40).
Essas células diferem das células hipocampais maduras, pois não possuem receptores de glutamato e colinérgicos, como os neurônios maduros de origem hipocampal. Portanto, elas não são adequadas para estudos de pesquisa relacionados à memória [1].
As células HT22 apresentam uma aparência semelhante à das células epiteliais.
Informações sobre o cultivo da linhagem celular HT22
As células HT22 são utilizadas em laboratórios de pesquisa em neurociência. Antes de cultivar essas células, os pesquisadores buscam informações essenciais sobre o cultivo celular que tornem seu trabalho mais fácil e eficiente. Esta seção aborda todos os pontos-chave para o cultivo de células HT22. Você aprenderá: Qual é o tempo de duplicação das células HT22? Como se cultiva células HT22? Qual é o protocolo de cultura das células HT22? Qual é o meio de cultura das células HT22?
Pontos-chave para a cultura de células HT22
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células HT22 é de aproximadamente 15 horas.
Adesivas ou em suspensão:
As células HT22 são aderentes.
Proporção de subcultivo:
A proporção de subcultivo para as células hipocampais HT22 é de 1:3 a 1:6. Resumidamente, o meio de cultura é removido e as células aderentes são enxaguadas com PBS 1x. A solução dissociadora Accutase é adicionada ao frasco, e as células são incubadas por 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, é adicionado meio de cultura fresco, e as células são coletadas em um frasco para centrifugação. O sedimento celular obtido é cuidadosamente ressuspenso, e as células são transferidas para um frasco de cultura para crescimento.
Meio de crescimento:
O meio DMEM é utilizado para a cultura de células HT22. Ele é suplementado com 10% de FBS, 4,5 g/L de glicose, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃ e 1,0 mM de piruvato de sódio para o crescimento celular ideal.
Condições de crescimento:
As culturas de células HT22 são mantidas em uma incubadora umidificada (temperatura de 37 °C) com um suprimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
As células HT22 congeladas podem ser armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C, seja na fase de vapor do nitrogênio líquido, seja em um freezer elétrico de temperatura ultrabaixa, para armazenamento de longo prazo.
Processo de congelamento e meio:
As células HT22 podem ser congeladas nos meios CM-1 ou CM-ACF utilizando um método de congelamento lento. Esse processo permite apenas uma redução de 1 °C na temperatura da amostra por minuto, protege as células contra choques térmicos e ajuda a manter sua viabilidade.
Processo de descongelamento:
As células são descongeladas em banho-maria a 37 °C por 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. Em seguida, o meio de cultura é adicionado às células, que são centrifugadas para eliminar os componentes do meio de congelamento. O sedimento celular é ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco contendo meio de cultura. Em seguida, as células são incubadas a 37 °C em uma incubadora por pelo menos 24 horas.
Nível de biossegurança:
É obrigatório utilizar laboratórios com nível de biossegurança 1 para a cultura de células HT22.
Vantagens e desvantagens da linhagem celular HT22
As células hipocampais HT22 apresentam alguns prós e contras que as diferenciam de outras linhagens celulares neuronais. Algumas vantagens e desvantagens notáveis dessa linhagem celular são mencionadas a seguir.
Vantagens
As vantagens da linha celular neuronal murina HT22 são:
-
Rápida taxa de crescimento
As células HT22 têm um tempo de duplicação de 15 horas, o que permite a realização de experimentos rápidos e eficientes e contribui para resultados de pesquisa em tempo hábil.
-
Imortalização
A HT22 é uma linhagem celular imortalizada, garantindo crescimento contínuo por longos períodos. Isso proporciona disponibilidade consistente de células, reduz tempo e custos e facilita experimentos de longo prazo com resultados consistentes.
Desvantagens
As desvantagens das células HT22 são:
-
Origem murina
A linhagem celular HT22 foi derivada de tecido do hipocampo do cérebro de camundongo, o que pode não representar totalmente a complexidade da fisiologia e do comportamento das células neuronais humanas, limitando sua relevância translacional.
4. Aplicações de pesquisa da linhagem celular HT22
As células HT22 são amplamente utilizadas em pesquisas de neurobiologia. Algumas aplicações promissoras dessa linha celular são discutidas nesta seção do artigo:
- Pesquisa em neurociência: as células HT22 são amplamente empregadas na pesquisa de doenças neurodegenerativas, como a doença de Alzheimer e a doença de Parkinson. Elas são consideradas uma valiosa ferramenta de pesquisa para o estudo da neurotoxicidade e dos mecanismos de estresse oxidativo relacionados a essas doenças. Uma pesquisa realizada em 2020 descobriu que a via PI3K/AKT/CREB está envolvida na toxicidade neural induzida pela hiperglicemia nas células HT22 [2]. Da mesma forma, um estudo recente propôs que a via Nrf2/HO-1 e o eixo de sinalização NF-κB desempenham papéis significativos na toxicidade da beta-amilóide nas células HT22 [3].
- Triagem de medicamentos: as células HT22 são amplamente utilizadas para testes e triagem de medicamentos. Elas ajudam os pesquisadores a identificar potenciais agentes terapêuticos que exibam efeitos neuroprotetores no combate às doenças neurodegenerativas. Um estudo realizado em 2019 explorou o potencial neuroprotetor do composto tetrahidrocurcumina em células hipocampais HT22 tratadas com glutamato. Nesse estudo, o glutamato induz estresse oxidativo nas células HT22 e causa morte celular por meio da ativação de proteínas quinases ativadas por mitógenos [4].
5. Publicações científicas que utilizam as células HT22
Aqui estão alguns artigos científicos interessantes que abordam a linhagem celular HT22:
Este estudo publicado no International Journal of Molecular Medicine (2019) propôs o potencial neuroprotetor da crocina, um composto isolado do Crocus sativus L., nas células HT22 danificadas pelo L-glutamato.
Esta publicação na revista *Neuropharmacology* (2018) relatou que os derivados de oxindol protegem contra a morte celular das células HT22 induzida pelo estresse oxidativo.
Este artigo científico foi publicado na revista Journal of Ginseng Research em 2019. Este estudo explorou os efeitos neuroprotetores de um produto natural, o ginsenosídeo Rb2, utilizando a linhagem celular HT22. O estudo constatou que o ginsenosídeo Rb2 reduziu de forma eficiente o estresse oxidativo induzido pelo glutamato e a morte celular nas células HT22 do hipocampo murino.
Este estudo publicado na revista Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) avaliou o potencial citotóxico das nanopartículas de prata na linhagem celular HT22.
A ferrostatina-1 protege as células HT-22 da toxicidade oxidativa
Este artigo de pesquisa foi publicado em 2020 na revista *Neural Regeneration Research*. Ele propôs que a ferrostatina-1, um inibidor da ferroptose, previne a toxicidade oxidativa nas células hipocampais HT22.
Recursos para células HT22: protocolos, vídeos e muito mais
Alguns recursos online sobre as células HT22 explicam seus protocolos de transfecção, diferenciação e cultura celular:
- Transfecção de HT-22: Este documento contém um protocolo otimizado para a transfecção de HT-22 em placas de cultura celular de 24 e 96 poços.
- Diferenciação das células HT22: este artigo oferece um guia completo sobre o protocolo de diferenciação das células HT22.
O link a seguir contém o protocolo de cultura celular das células HT22:
- Subcultura de células HT22: este link ajudará você a aprender o protocolo de subcultura para a linhagem celular HT22. Além disso, ele o auxiliará a aprender o protocolo para induzir neurotoxicidade nas células.
- Células hipocampais HT22: Este site contém muitas informações úteis sobre o tempo de duplicação das células HT22, meios de cultura e protocolos de cultura celular.
Referências
- He, M., et al., A diferenciação torna os neurônios HT22 suscetíveis à excitotoxicidade. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., A fisetina previne a neurotoxicidade induzida por altos níveis de glicose nas células HT22 por meio da via de sinalização PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Efeitos protetores da berberina contra a neurotoxicidade induzida pelo β-amilóide em células HT22 por meio da via Nrf2/HO-1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Efeitos neuroprotetores da tetrahidrocurcumina contra o estresse oxidativo induzido pelo glutamato em células HT22 do hipocampo. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.