Linha celular HT-29
A HT-29 é uma linha celular de câncer colorretal humano com ampla gama de aplicações em pesquisas sobre câncer e toxicologia. Por exemplo, essas células são sensíveis aos tratamentos quimioterápicos padrão contra o câncer colorretal. Além disso, a linha celular HT-29 é um modelo in vitro bem caracterizado para investigar a resposta do epitélio intestinal à infecção bacteriana. As células HT-29 imitam as características das células intestinais maduras, ou seja, os enterócitos, e, portanto, são adequadas para estudos de adesão e mecanísticos.
- Meio de crescimento
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- Tempo de duplicação
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- Tipo de crescimento
- Adere
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende HT-29
- Células HT-29: Origem e informações gerais
- Informações sobre a cultura celular da linhagem HT-29
- Células HT-29: vantagens e limitações
- Células HT-29: Aplicações
- 5. Publicações científicas sobre as células HT-29
- Recursos sobre as células HT-29: protocolos, vídeos e muito mais
- Referências
- Perguntas frequentes
Células HT-29: Origem e informações gerais
Antes de utilizar qualquer linhagem celular, é importante conhecer suas características gerais e sua origem. Esta seção ajudará você a entender: O que são as células HT-29? A HT-29 é uma linhagem celular de câncer colorretal? Qual é a morfologia das células HT-29?
O que é a linha celular HT-29? A HT-29 é uma linha celular de adenocarcinoma colorretal estabelecida em 1964 por Trempe e Fogh. As células foram originalmente derivadas do tumor primário de uma mulher caucasiana (44 anos) com adenocarcinoma colorretal [1]. Desde sua criação, essa linha celular tem sido utilizada para estudar a biologia dos cânceres.
Morfologia das células HT-29: a linhagem celular HT-29 geralmente apresenta morfologia de tipo epitelial. As células diferenciadas crescem em monocamadas, formam junções célula-célula estreitas e possuem uma borda em escova apical. Se essas células forem cultivadas em meio com deficiência de glicose ou receberem indutores como butirato ou ácido, elas exibem características semelhantes às dos enterócitos.
Tamanho celular: O diâmetro das células da linhagem HT-29 de câncer colorretal é de 11 μm.
Genoma e ploidia: O número modal de cromossomos da linhagem celular HT-29 é 71. Ele pode variar de 68 a 72. Além disso, o número simplificado de cromossomos das células HT-29 é hipertriploide, com o componente 2S ocorrendo na proporção de 2,4 %.
O que é a HT29 MTX? A HT29 MTX é uma linhagem celular resistente ao metotrexato, isolada da linhagem celular original HT-29 de câncer de cólon humano por adaptação a 10 µM de metotrexato. Essas células apresentam características de células caliciformes maduras secretoras de muco.
Informações sobre o cultivo da linha celular HT-29
Conhecer os requisitos básicos de cultura de uma linhagem celular pode facilitar seu trabalho com ela. Você deve saber: qual é o tempo de duplicação da linhagem celular HT-29? Qual é a densidade de semeadura das células HT-29? Quais meios de cultura são adequados para as células HT-29?
Tempo de duplicação
O tempo médio de duplicação da linha celular HT-29 é de 24 horas.
Aderente/em suspensão
A HT-29 é uma linha celular aderente.
Densidade de semeadura
A densidade de semeadura recomendada para as células HT-29 é de 3 x 10⁴ células/cm². As células cultivadas são lavadas com PBS 1X e desprendidas após incubação com Accutase por 8 a 10 minutos. Adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas. O sedimento celular é ressuspenso e as células são distribuídas em novos frascos na densidade celular recomendada.
Meio de crescimento
O Meio Essencial Mínimo de Eagle (EMEM), suplementado com 2,5 mM de L-glutamina e 10% de FBS, é utilizado para o cultivo ideal das células HT-29. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento
As células HT-29 requerem uma incubadora com umidade controlada, temperatura de 37 °C e suprimento de 5 % de CO₂ para o crescimento.
Armazenamento
Essas células são armazenadas na fase de vapor de nitrogênio líquido a temperaturas inferiores a -195 °C.
Meio e processo de congelamento
O meio de congelamento utilizado para a linhagem celular HT-29 é o CM-1 ou o CM-ACF. As células são congeladas por meio de um processo de congelamento lento que provoca uma queda de 1 °C na temperatura e protege de forma eficiente a viabilidade das células.
Processo de descongelamento
As células HT-29 congeladas são descongeladas em banho-maria a 37 °C. Essas células podem ser ressuspensas e dispensadas diretamente no frasco com meio de crescimento fresco. Por outro lado, as células descongeladas podem ser centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento, ressuspensas em meio fresco e cultivadas em frascos.
Nível de biossegurança
O nível de biossegurança 1 é utilizado para o manuseio e manutenção da linhagem celular HT-29.
Células HT-29: Vantagens e limitações
Cada linhagem celular possui prós e contras únicos que a distinguem de outras linhagens celulares. Esta seção abordará as principais vantagens e limitações associadas às células HT-29.
Vantagens
As principais vantagens das células HT-29 são:
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Fácil de cultivar
A linhagem celular HT-29 é fácil de manusear e manter, sem requisitos complexos para o cultivo. É amplamente cultivada em laboratórios de pesquisa.
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Modelo in vitro de células intestinais
As células HT-29 podem se diferenciar em células intestinais maduras (entrocitos e células produtoras de muco) sob condições específicas de cultura. Elas são utilizadas como modelo celular para estudar a digestão dos alimentos e a biodisponibilidade.
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Alta eficiência de transfecção
As células de câncer de cólon HT-29 oferecem alta eficiência de transfecção, tornando-as adequadas para estudos de expressão e regulação gênica. Experimentos de transfecção tanto transitória quanto estável podem ser realizados utilizando vários métodos.
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Sensibilidade a medicamentos
As células HT-29 são sensíveis a medicamentos quimioterápicos, como o fluorouracil e a oxaliplatina, comumente utilizados no tratamento do câncer de cólon. Elas são utilizadas para estudar a resistência a medicamentos e selecionar potenciais agentes terapêuticos para o carcinoma colorretal.
Limitações
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Heterogeneidade
As células HT-29, assim como outras linhagens de células cancerosas, apresentam heterogeneidade e podem não formar uma população celular uniforme. Isso pode afetar a reprodutibilidade dos resultados em determinados ensaios e levar a pequenas variações nos resultados experimentais.
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Diferenciação limitada
As células HT-29 têm potencial de diferenciação limitado. Elas não se diferenciam totalmente em células intestinais ou do cólon, mas apresentam apenas algumas características específicas. Essa limitação pode restringir seu uso no estudo de processos biológicos mais complexos.
Células HT-29: Aplicações
A linhagem celular HT-29 é amplamente cultivada em laboratórios de pesquisa devido à sua ampla gama de aplicações. Esta seção abordará apenas algumas aplicações significativas das células HT-29.
Pesquisa sobre câncer: a HT-29 é uma linhagem celular de adenocarcinoma colorretal, por isso é utilizada para estudar a progressão, o desenvolvimento e os mecanismos moleculares subjacentes do câncer. Um estudo realizado em 2018 utilizou a linhagem celular HT-29 para investigar as moléculas celulares responsáveis pela metástase. Esse estudo observou que os genes da vimentina e do CXCR4 regulam a metástase celular. Por outro lado, a transfecção do mimético do microRNA-193a-5p pode reduzir os níveis de mRNA desses genes e diminuir com sucesso a metástase das células cancerosas [2].
Pesquisa toxicológica: A linhagem celular HT-29 é amplamente utilizada em pesquisas toxicológicas. Essas células de carcinoma colorretal são utilizadas para avaliar a toxicidade de diferentes candidatos a medicamentos por meio de diversos ensaios. Por exemplo, um estudo explorou o potencial de toxicidade de um extrato etanólico da planta Syzygium cumini na linhagem celular HT-29. Os resultados mostraram uma supressão significativa do crescimento das células HT-29, indicando as promissoras propriedades anticâncer do extrato [3].
Microbiologia: As células HT-29 podem ser utilizadas como sistema de células-hospedeiras para investigar a patogênese de microrganismos potenciais, ou seja, bactérias e vírus. Os pesquisadores podem infectar células HT-29 com microrganismos para investigar sua virulência e a resposta do hospedeiro. Um estudo desse tipo utilizou células HT-29 para explorar as propriedades probióticas das bactérias do ácido lático [4]. Outro estudo utilizou células HT-29 para avaliar a eficácia e a segurança de tratamentos com bacteriófagos [5].
5. Publicações científicas sobre as células HT-29
Esta seção apresentará algumas publicações importantes sobre as células HT-29 que o ajudarão a elaborar seu estudo de pesquisa.
Este estudo propôs o extrato etanólico de Syzygium cumini como um potencial agente anticâncer contra a linhagem celular colorretal HT-29. O extrato inibiu significativamente o crescimento das células cancerosas.
Esta publicação na revista Bioscience Reports testou a atividade anticâncer de um composto, a tetrandrina, nas células HT-29. Os resultados revelaram que a tetrandrina inibe a proliferação e o crescimento das células cancerosas por meio da regulação das vias de sinalização celular.
Este estudo propôs que o miRNA-193a-5p pode potencialmente regular a metástase das células HT-29 por meio da regulação de genes relacionados à metástase.
Este artigo foi publicado na revista *Nature Scientific Reports* em 2018. Este estudo utilizou a linhagem celular tumorigênica HT-29 como modelo celular intestinal para avaliar a eficácia do tratamento proposto com bacteriófagos.
Neste estudo, os pesquisadores utilizaram células HT-29 para investigar as atividades probióticas das bactérias do ácido lático. Curiosamente, o estudo indicou que as bactérias lactobacilos impedem a adesão de bactérias patogênicas às células do cólon.
Células HT-29 – Recursos: protocolos, vídeos e mais
Esta seção abordará alguns recursos online disponíveis sobre as células HT-29 que ajudarão a aprender seus protocolos de manutenção, cultura e transfecção.
Protocolos de cultura celular
Os recursos a seguir irão orientá-lo sobre a subcultura de células HT-29.
- Cultivo de células HT-29: este link fornecerá conhecimentos básicos sobre o meio de crescimento, o descongelamento e a subcultura de células HT-29.
- Manutenção de culturas de HT-29: este artigo contém todas as informações úteis sobre o cultivo e a manutenção das células HT-29.
Protocolos de transfecção
A linhagem celular HT-29 apresenta grande eficiência de transfecção e é frequentemente utilizada em estudos de expressão gênica. Os recursos a seguir descrevem os possíveis protocolos de transfecção para essas células.
- Transfecção de HT-29: Este link contém o protocolo detalhado para a transfecção de células HT-29.
- Transfecção da linhagem celular HT-29: Este documento descreve o protocolo de transfecção da linhagem celular HT-29 com DNA plasmídico.
Vídeos relacionados à linha celular HT-29
Aqui estão alguns vídeos sobre o cultivo e a manutenção dessa linhagem celular tumorigênica.
- Passagem de células: Este vídeo mostra o protocolo de passagem de células para linhagens celulares aderentes.
- Transfecção de células HT-29: Este vídeo irá orientá-lo sobre o método de transfecção utilizado para células HT-29.
Esperamos que as informações contidas neste artigo sejam úteis e suficientes para que você possa lidar com o manuseio e a manutenção da linha celular HT-29. Se você planeja utilizar células HT-29 em seu estudo, faça seu pedido conosco.
Referências
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles e I. Recio, Linha celular HT29. O impacto dos bioativos alimentares na saúde: modelos in vitro e ex vivo, 2015: p. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., o microRNA-193a-5p inibe a migração de células de câncer de cólon HT-29 humanas por meio da supressão da via de metástase. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean e R. Safaralizadeh, Avaliação do efeito anticâncer do extrato etanólico de Syzygium cumini na linhagem celular colorretal HT-29. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Propriedades probióticas dos lactobacilos e sua capacidade de inibir a adesão de bactérias enteropatógenas às células Caco-2 e HT-29. Probióticos e proteínas antimicrobianas, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J., et al., Os bacteriófagos são mais virulentos contra bactérias presentes em células humanas do que em cultura bacteriana; insights a partir das células HT-29. Relatórios Científicos, 2018. 8(1): p. 5091.