Células HK-2 – Análise da função e da patologia renal com células HK-2 na pesquisa renal
A HK-2 é uma linhagem celular epitelial renal humana imortalizada, comumente utilizada em pesquisas toxicológicas. Os pesquisadores avaliam os efeitos de toxinas ambientais nessas células renais. Além disso, também utilizam as células HK-2 para investigar doenças renais e seus mecanismos subjacentes.
- Meio de crescimento
- O meio ideal para as células HK-2 é um meio para linhagem de queratinócitos contendo 10% de soro fetal bovino, 0,05 mg/ml de extrato hipofisário bovino (BPE) e 5 ng/ml de fator de crescimento epidérmico (EGF). O meio deve ser trocado a cada 2 a 3 dias, uma vez por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células HK-2 varia entre 47,3 h e 61,7 h.
- Tipo de crescimento
- A linhagem celular epitelial renal HK-2 é aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-2
- Disponível na
- Cytion — Encomende HK-2
- Células HK-2: Origem e características gerais
- Linha celular HK-2: Informações sobre cultura
- Vantagens e limitações das células HK-2
- Aplicações da linha celular HK-2 na pesquisa
- 5. Células HK-2: Publicações científicas
- Recursos para a linhagem celular HK-2: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Células HK-2: Origem e características gerais
É fundamental conhecer a origem e as características gerais de uma linha celular para seu manuseio, manutenção e uso adequados. Esta seção do artigo abordará o seguinte: O que são as células HK-2 do rim humano 2? Qual é o papel das células HK-2? O que são as células HK-2? Qual é a origem da linha celular HK-2? Quais são o tamanho e a morfologia das células HK-2?
- As células do rim humano 2 (HK-2) são um tipo de células tubulares proximais originárias do tecido renal normal de um adulto europeu. A linha celular HK-2 foi estabelecida por meio da transfecção de células renais com um retrovírus recombinante que compreende os genes E6/E7 do papilomavírus humano 16. Esse experimento resultou na imortalização e no estabelecimento de uma linha celular epitelial renal HK-2 em crescimento contínuo.
- As células HK-2 apresentam morfologia epitelial.
- O tamanho das células HK-2 varia entre 17,4 e 18,6 µm de diâmetro. O diâmetro médio é de 18,2 µm [1].
Linha celular HK-2: Informações sobre o cultivo
As informações sobre a cultura da linha celular renal humana 2 podem ser de grande ajuda antes de você começar a trabalhar com ela. As informações essenciais sobre a cultura de células HK-2 são mencionadas nesta seção do artigo. Você ficará sabendo: As células HK-2 são aderentes? Qual é o tempo de duplicação das células HK-2? Qual meio é utilizado para cultivar células HK-2?
Pontos-chave para a cultura de células HK-2
Tempo de duplicação populacional:
O tempo de duplicação das células HK-2 varia entre 47,3 h e 61,7 h.
Adesivas ou em suspensão:
A linhagem de células epiteliais renais HK-2 é aderente.
Proporção de subcultivo:
As células HK-2 são subcultivadas na proporção de 1:2 a 1:4. As células HK-2 aderentes são lavadas com PBS 1x e incubadas à temperatura ambiente por 8 a 10 minutos após a adição da solução de Accutase. O meio de cultura é adicionado às células dissociadas e centrifugado. As células coletadas são cuidadosamente ressuspensas e transferidas para novos frascos para cultura.
Meio de crescimento:
O meio ideal para as células HK-2 é um meio para linhagem de queratinócitos contendo 10% de soro fetal bovino, 0,05 mg/ml de extrato hipofisário bovino (BPE) e 5 ng/ml de fator de crescimento epidérmico (EGF). O meio deve ser trocado a cada 2 a 3 dias por semana.
Condições de crescimento:
As culturas da linhagem celular renal humana 2 são mantidas em uma incubadora umidificada com um suprimento de 5% de CO₂ a 37 °C.
Armazenamento:
As células congeladas são armazenadas na fase de vapor de nitrogênio líquido ou a uma temperatura inferior a -150 °C em um freezer de temperatura ultrabaixa.
Processo de congelamento e meio:
Os meios de congelamento CM-1 ou CM-ACF são ideais para o congelamento das células HK-2. Resumidamente, opta-se por um método de congelamento lento, permitindo uma queda de temperatura de apenas 1 grau Celsius por minuto e protegendo as células contra qualquer choque.
Processo de descongelamento:
As células congeladas são descongeladas em um banho-maria ajustado a 37 graus Celsius. Essas células recebem meio de cultura fresco e são ressuspensas. Em seguida, as células são transferidas para um novo frasco contendo meio de crescimento. Após 24 horas, o meio é substituído para remover os componentes do meio de congelamento.
Nível de biossegurança:
As culturas de células HK-2 são mantidas em laboratórios de nível de biossegurança 1.
Vantagens e limitações das células HK-2
A HK-2 é uma linhagem celular epitelial do túbulo proximal humano amplamente utilizada. Assim como outras linhagens celulares, ela também apresenta algumas vantagens e limitações. Esta seção discutirá alguns dos principais prós e contras da linhagem celular renal humana 2.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular HK-2 incluem:
Bem caracterizada
A linha celular HK-2 foi amplamente caracterizada em termos de morfologia, tamanho e genoma. Inúmeros estudos de pesquisa foram realizados com essas células renais normais.
Imortalizada
A HK-2 é uma linha celular contínua com vida útil prolongada, o que permite sua propagação por meio de várias passagens. Essa característica garante um suprimento contínuo de células para experimentos laboratoriais.
Características epiteliais do túbulo proximal
As células HK-2 apresentam um fenótipo bem diferenciado, característico das células do túbulo proximal (PTCs) encontradas no rim humano. Essa característica única torna as células HK-2 um valioso modelo in vitro para o estudo da fisiologia renal, dos processos celulares e das respostas a diversos estímulos.
Limitações
A seguir, apresentamos algumas limitações da linhagem celular HK-2:
Modelo in vitro
A HK-2 serve como um modelo in vitro de células renais normais, exibindo particularmente características das células epiteliais do túbulo proximal. No entanto, ela pode não reproduzir totalmente a complexidade do tecido renal humano e do microambiente encontrado in vivo.
Aplicações da linhagem celular HK-2 na pesquisa
A linha celular HK-2 possui inúmeras aplicações na pesquisa toxicológica. Aqui, discutimos alguns usos específicos e significativos dessa linha celular do túbulo proximal humano na pesquisa.
- Fisiologia renal: as células HK-2 são comumente utilizadas para estudar a fisiologia e as funções renais normais. Os pesquisadores empregam essas células epiteliais do túbulo proximal para investigar canais iônicos, processos de transporte e outros mecanismos celulares que regulam a homeostase renal. Por exemplo, pesquisadores estudaram o papel dos canais do Potencial Transitório do Receptor 6 (TRPC6) na morte celular induzida pelo (+)-Conocarpan (CNCP), um neolignano, em células epiteliais renais HK-2 [2].
- Doenças renais: A linhagem celular renal humana HK-2 é utilizada para investigar diferentes doenças renais, como lesão renal aguda e nefropatia diabética, bem como seus mecanismos celulares e moleculares subjacentes. Por exemplo, pesquisas descobriram que os níveis de metilação da proteína Klotho estão associados a danos renais. A redução da metilação do promotor do gene Klotho pode aumentar sua expressão e atenuar o dano renal induzido em modelos de camundongos diabéticos db/db e em células HK-2 tratadas com altas concentrações de glicose [3].
- Estudos toxicológicos: As células HK-2 são uma excelente ferramenta de pesquisa para avaliar os efeitos potenciais de diversos medicamentos, produtos químicos e poluentes ambientais. Esses estudos podem ajudar os pesquisadores a avaliar a segurança dos medicamentos e seus efeitos colaterais nas células renais. Por exemplo, um estudo publicado em 2022 avaliou os efeitos potenciais dos polissacarídeos e do extrato aquoso da erva natural Polygonatum kingianum (PK) sobre a nefrotoxicidade induzida pelo urânio em células HK-2. Os autores constataram que o PK exerce efeitos protetores e previne o envenenamento por urânio nas células renais [4].
5. Células HK-2: Publicações científicas
A seguir, apresentamos algumas publicações de pesquisa interessantes que abordam as células epiteliais renais HK-2.
Este estudo publicado na revista *Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity* (2022) propôs que o RNA circular HIPK3 pode diminuir a inibição da proliferação das células HK-2 causada pela toxicidade da hiperglicemia. Além disso, ele pode inibir a morte celular por meio da regulação da cascata miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Esta publicação de pesquisa na revista *Nanomedicine* (2020) avaliou diferentes mecanismos de toxicidade das nanopartículas de ouro (AuNPs) em células cancerosas 786-0 e em células epiteliais do túbulo proximal HK-2.
Este artigo foi publicado na revista Renal Failure (2022). Os resultados indicam que o microRNA-320c pode reduzir a toxicidade induzida por níveis elevados de glicose em células renais (HK-2) ao atuar sobre o PTEN e inibir a via de sinalização PI3K/AKT.
Este estudo publicado na revista Tissue Engineering Part A (2022) propôs que os exossomos derivados de células-tronco mesenquimais impedem a transição epitelial-mesenquimal das células renais HK-2.
O artigo publicado no Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) afirma que o lncRNA TapSAKI intensifica a resposta inflamatória e a morte celular das células HK-2 ao regular a via de sinalização microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
Recursos para a linhagem celular HK-2: protocolos, vídeos e muito mais
A HK-2 é uma linha celular famosa. Aqui estão alguns recursos que descrevem o protocolo de cultura celular da HK-2.
- Cultura de células HK-2: este site contém muitas informações sobre a cultura de células HK-2. Por exemplo, ele fornece a receita do meio de cultura para HK-2, o protocolo de repico e o protocolo para manuseio e manutenção de culturas proliferativas e criopreservadas.
- Passagem de células: Este vídeo ajudará você a aprender um protocolo geral de divisão ou passagem para linhagens celulares aderentes.
Referências
- Handl, J., et al., O efeito de passagens repetidas na suscetibilidade das células HK-2 do túbulo proximal humano a compostos tóxicos. Physiological Research, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., A ativação dos canais TRPC6 contribui para a morte celular apoptótica induzida pelo (+)-conocarpan em células HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., O EGCG atenua o dano renal por meio da reversão da hipermetilação do klotho em camundongos diabéticos db/db e em células HK-2. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Efeitos protetores dos polissacarídeos e do extrato aquoso de Polygonatum kingianum sobre a toxicidade induzida pelo urânio em células renais humanas (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.