Células BV2 – Pesquisa sobre o Sistema Nervoso Central explicada com as células microgliais BV2

A BV2 é uma linhagem celular de microglia derivada de camundongo amplamente utilizada na pesquisa em neurociência. Essa linhagem celular imortalizada pode servir como modelo in vitro para o estudo de doenças neurodegenerativas e das condições e processos celulares associados, como a neuroinflamação. Além disso, as células BV2 são consideradas um sistema modelo alternativo para a microglia primária.

Origem e características gerais das células BV2

Esta seção do artigo explica a origem da linha celular BV2 e as características gerais que a distinguem de outras linhas celulares microgliais. Aqui, você aprenderá: O que são as células BV2? De onde vêm as células BV2? Qual é o tamanho de uma célula BV2?

• A linhagem celular microglial BV2 foi obtida a partir da microglia de ratos C57/BL6 neonatais (recém-nascidos). A linhagem celular foi imortalizada por meio da infecção das células com o retrovírus J2 portador dos oncogenes v-raf/v-myc [1].
• As células BV2 não estimuladas apresentam morfologia hipertrofiada, semelhante à de uma ameba. Essa morfologia indica um estado altamente ativado e inflamatório das células BV2 em comparação com a microglia primária [2].
• O diâmetro relatado para a linhagem celular BV-2 varia entre 10 e 15 μm.

Linha celular BV2 vs. ECO 2

Ambas são linhagens celulares de microglia de camundongo, mas distintas uma da outra. A principal diferença é que a BV2 foi imortalizada por manipulação genética, enquanto a ECO 2 foi imortalizada espontaneamente. Além disso, a ECO 2 possui as mesmas características gerais da BV2, mas requer suplementação com fator estimulador de colônias 1 (CSF-1) para seu cultivo.

Linha celular BV2: Informações sobre o cultivo

Antes de manusear e manter uma cultura de linha celular, é fundamental conhecer as informações sobre o cultivo celular. Esta seção do artigo ajudará você a conhecer todos os pontos-chave para o cultivo de linhas celulares BV2. Em particular, abordaremos os seguintes pontos: Qual é o tempo de duplicação das células BV2? Quais meios são utilizados para cultivar células BV2? A linha celular BV2 é aderente ou em suspensão? Como descongelar células BV2?

Pontos-chave para a cultura de células BV2

Tempo de duplicação:

As células microgliais BV2 crescem muito rapidamente, com um tempo de duplicação médio de 34,5 horas.

Adesiva ou em suspensão:

A BV2 é uma linhagem celular aderente.

Proporção de divisão:

Essa linhagem de células microgliais aderentes é subcultivada em uma proporção de divisão de 1:2 a 1:4. As células são lavadas com PBS e incubadas com Accutase (solução de dissociação). Após 10 minutos, são centrifugadas e colhidas. Em seguida, essas células são adicionadas a frascos com meio de crescimento fresco, de acordo com a proporção de divisão recomendada.

Meio de crescimento:

O meio RPMI 1640 é utilizado para cultivar a linha celular BV2. O RPMI para BV2 é suplementado com 10% de FBS, 2,0 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃ para garantir o crescimento celular ideal. O meio é renovado de 2 a 3 vezes por semana.

Condições de crescimento:

As culturas de BV2 são mantidas em uma incubadora umidificada a 37 °C com fornecimento contínuo de 5% de CO₂.

Armazenamento:

Os frascos de células BV2 congeladas são mantidos a temperaturas inferiores a -150 °C, seja na fase de vapor de nitrogênio líquido, seja em um freezer elétrico.

Processo de congelamento e meio:

Recomenda-se o uso dos meios de congelamento CM-1 ou CM-ACF para as linhagens celulares BV2. As células são congeladas por meio de um processo de congelamento lento, que permite apenas uma queda de temperatura de 1 °C por minuto, a fim de manter a viabilidade celular.

Processo de descongelamento:

O frasco com células BV2 congeladas é agitado rapidamente em banho-maria (37 °C) por 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. As células descongeladas são adicionadas a meio de crescimento fresco e centrifugadas para eliminar os componentes do meio de congelamento. As células coletadas são novamente ressuspensas e transferidas para um frasco de cultura para crescimento.

Nível de biossegurança:

Recomenda-se o nível de biossegurança 1 para o cultivo da linhagem celular BV2.

Vantagens e limitações das células BV2

Assim como outras linhagens celulares, as células BV2 também apresentam algumas vantagens e limitações. Algumas delas são mencionadas a seguir.

Vantagens

As vantagens da linha celular BV2 incluem:

Características semelhantes às da microglia primária

As células BV2 possuem algumas características semelhantes às da microglia primária e são utilizadas como um modelo alternativo para estudar as funções e respostas da microglia. Elas expressam F4/80, CD11b e Iba1, que são biomarcadores essenciais da microglia primária.

Imortalização

As células BV2 são imortalizadas, o que lhes permite crescer continuamente. Essa característica as torna ideais para experimentos de cultura celular de longo prazo.

Limitações

As limitações associadas às células BV2 são:

Linha celular de origem murina

A linhagem celular BV2 é derivada da microglia de camundongo. Os resultados de pesquisas que utilizam células BV2 podem ter aplicabilidade limitada a doenças e pesquisas específicas do ser humano.

Modelo in vitro

As células BV2 servem como um modelo in vitro para o estudo das funções da microglia. No entanto, é importante observar que elas podem não reproduzir totalmente as características e a complexidade das células da microglia no cérebro in vivo.

Aplicações da linhagem celular BV2 na pesquisa

A linha celular BV2 oferece diversas aplicações na pesquisa em neurociência. Algumas utilizações comuns das células BV2 na pesquisa são mencionadas nesta seção.

Pesquisa em doenças neurodegenerativas: A linhagem de células microgliais murinas BV2 é uma valiosa ferramenta de pesquisa para o estudo de doenças neurodegenerativas, como a doença de Parkinson, a doença de Alzheimer e a esclerose múltipla. Pesquisadores têm estudado a neurotoxicidade e a patologia das doenças, além de avaliar agentes terapêuticos utilizando linhagens de células BV2. Por exemplo, um estudo realizado em 2020 avaliou o efeito anti-inflamatório e neuroprotetor de um hidroxistilbeno natural, a raponticina, presente na planta Rheum rhaponticum, utilizando células BV2 ativadas por lipopolissacarídeo como modelo da doença de Parkinson. O composto atenua a ativação das células BV2 mediada pelo lipopolissacarídeo (LPS), inibindo a óxido nítrico sintase e reduzindo as espécies reativas de oxigênio e os mediadores pró-inflamatórios. Resumidamente, a raponticina exerce efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores no modelo microglial induzido por LPS (BV2) [3]. Da mesma forma, um estudo investigou o envolvimento de vias de sinalização na neuroinflamação. Os pesquisadores desenvolveram um modelo de inflamação por meio da ativação de células BV2 mediada por lipopolissacarídeo. Eles descobriram que o eixo de sinalização AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB está envolvido na neuroinflamação. Além disso, também avaliaram a beta-naftoflavona (BNF), um flavonóide natural, quanto aos seus efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores utilizando esse modelo. O composto exerceu esses efeitos terapêuticos ao inibir a ativação da BV2 [4]. Da mesma forma, a pesquisa utilizou células BV2 e estudou o efeito benéfico do medicamento zonisamida na disfunção mitocondrial em células microgliais. Os resultados desse estudo apoiam o uso clínico da zonisamida no tratamento da doença de Parkinson [5].

5. Células BV2: Publicações científicas

A seguir, apresentamos alguns estudos de pesquisa interessantes e mais citados que abordam as células BV2.

Lisados mitocondriais induzem inflamação e alterações relevantes para a doença de Alzheimer em células microgliais e neuronais

Esta pesquisa foi publicada no Journal of Alzheimer’s Disease (2015). O estudo propôs que a molécula de mtDNA DAMP (padrão molecular associado a dano), derivada de danos mitocondriais, pode causar alterações inflamatórias em células microgliais (BV2). Assim, elas também podem contribuir para a neuroinflamação da doença de Alzheimer.

O efeito terapêutico da decocção de huanglian jiedu na doença de Alzheimer por meio da regulação da fagocitose induzida por Aβ em células microgliais BV-2

Este artigo, publicado na revista FARMACIA (2021), utilizou células BV2 e determinou o efeito terapêutico da decocção de Huanglian Jiedu (HLJDD) na doença de Alzheimer. O estudo constatou que a HLJDD promove a fagocitose da beta-amilóide pelas células BV2 ao aumentar a expressão da proteína Trm2, conforme validado por meio da análise de western blot em células BV2.

A alfa-sinucleína ativa as microglia BV2 dependendo de seu estado de agregação

Este artigo de pesquisa publicado na revista Biochemical and Biophysical Research Communications (2016) propôs que a alfa-sinucleína, uma proteína solúvel no sistema nervoso central adulto, pode ativar as células BV2 dependendo de seu estado de agregação.

Exossomos de células BV-2 induzidos pela alfa-sinucleína: importante mediador da neurodegeneração na DP

Esta pesquisa foi publicada na revista *Neuroscience Letters* em 2013. O estudo afirma que os exossomos secretados pelas células microgliais BV2 ativadas pela alfa-sinucleína podem ser mediadores essenciais da neurodegeneração na doença de Parkinson.

A idebenona alivia a neuroinflamação e modula a polarização microglial em células BV2 estimuladas por LPS e em camundongos com doença de Parkinson induzida por MPTP

Este estudo foi publicado na revista *Frontiers Cellular Neuroscience* (2019). Ele propôs que a idebenona, um antioxidante, modula a polarização microglial e reduz a inflamação em células BV2 ativadas por lipopolissacarídeo e no modelo de camundongos com doença de Parkinson induzida por 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP).

Recursos para a linhagem celular BV2: protocolos, vídeos e muito mais

Os recursos online disponíveis sobre a linha celular BV2 são limitados. Aqui estão alguns deles.

• Subcultura da linhagem celular BV2: este link do site apresenta um breve protocolo para a subcultura de linhagens celulares BV2.
• Descongelamento de células congeladas: este vídeo ajuda você a aprender o protocolo básico para descongelar e cultivar células congeladas.

O protocolo de cultura celular para as células BV2 é mencionado aqui.

• Cultura de células BV2: este link para o site contém o protocolo de cultura de células BV2. Além disso, ele também fornece as composições dos meios de cultura celular e dos meios de congelamento para a linha celular BV2.

Referências

1. Wang, Y., Y. Peng e H. Yan, Comentário: Modelos de cultura celular in vitro neuroinflamatórios e suas possíveis aplicações para distúrbios neurológicos. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
2. Sarkar, S., et al., Caracterização e análise comparativa de um novo modelo de células microgliais de camundongo para o estudo de mecanismos neuroinflamatórios durante agressões neurotóxicas. Neurotoxicology, 2018. 67: p. 129-140.
3. Zhao, F., et al., Efeito neuroprotetor da raponticina contra a doença de Parkinson: insights do modelo in vitro BV-2 e do modelo in vivo em camundongos induzido por MPTP. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, 2021. 35(1): p. e22631.
4. Gao, X., et al., A beta-naftoflavona inibe a inflamação induzida por LPS em células BV-2 por meio do eixo de sinalização AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB. Immunobiology, 2020. 225(4): p. 151965.
5. Tada, S., et al., A zonisamida ameniza a mitocondriopatia microglial em modelos da doença de Parkinson. Brain Sciences, 2022. 12(2): p. 268.