Células ARPE-19 – Análise especializada da pesquisa sobre células do epitélio pigmentar da retina com ARPE-19
As células ARPE-19 são células epiteliais pigmentares da retina de origem humana, surgidas espontaneamente. Elas são utilizadas para estudar diversos aspectos da biologia da retina, condições patológicas e intervenções terapêuticas (farmacologia). Este artigo tem como objetivo fornecer uma visão abrangente sobre as células imortalizadas ARPE-19. Serão discutidas, principalmente, as características gerais, as condições de cultura e as diversas aplicações de pesquisa dessa linhagem celular. Assim, ao ler este artigo, você obterá uma compreensão completa sobre:
- Meio de crescimento
- O meio DMEM ou Ham’s F12 é utilizado para cultivar a linha celular ARPE-19. O meio ARPE-19 é suplementado com 5% de FBS, 3,1 g/L de glicose, 15 mM de HEPES, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio e 1,2 g/L de NaHCO₃. O meio é substituído de 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células ARPE-19 é de aproximadamente 55 a 65 horas. Elas podem passar por até 48 duplicações populacionais.
- Tipo de crescimento
- A ARPE-19 é uma linhagem celular aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende ARPE-19
- Células ARPE-19: Origem e características gerais
- Linha celular ARPE-19: Informações sobre cultura
- Vantagens e limitações das células ARPE-19
- Aplicações da linha celular ARPE-19 na pesquisa
- Células ARPE-19: Publicações científicas
- Recursos para a linhagem celular ARPE-19: protocolos, vídeos e muito mais
- Células ARPE-19: Origem e características gerais
- Linha celular ARPE-19: Informações sobre cultura
- Vantagens e limitações das células ARPE-19
- Aplicações da linha celular ARPE-19 na pesquisa
- 5. Células ARPE-19: Publicações científicas
- Recursos para a linhagem celular ARPE-19: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Células ARPE-19: Origem e características gerais
Conhecer a origem e as características gerais de uma linha celular é fundamental para seu uso eficaz na pesquisa. Esta seção do artigo abordará todas as informações sobre a linha celular ARPE. Por exemplo: O que é a linha celular ARPE-19? Por que usar células ARPE-19? O que é a linha celular ARPE-19/HPV-16? As células ARPE-19 são imortais? Qual é a morfologia e o tamanho das células ARPE-19?
- A linha de células epiteliais pigmentares da retina imortalizadas, ARPE-19, foi derivada dos olhos de um homem de 19 anos que faleceu em consequência de um traumatismo craniano sofrido em um acidente. Ela foi estabelecida por Amy Aotaki-Keen em 1986.
- Essas células expressam marcadores de células epiteliais pigmentares da retina, ou seja, CRALBP e RPE-65, sugerindo que podem formar monocamadas estáveis caracterizadas por polaridade morfológica e funcional.
- As células ARPE-19 possuem uma morfologia semelhante à das células epiteliais.
- As células ARPE-19 apresentam, em sua maioria, um cariótipo normal, exceto por uma deleção e uma adição no braço longo dos cromossomos 9 e 19, respectivamente. Além disso, também são observadas algumas aneuploidias [1].
Linha celular ARPE-19: Informações sobre o cultivo
Informações básicas sobre cultura celular são essenciais para o manuseio e a manutenção adequados de uma linha celular. Esta seção ajudará você a conhecer os pontos-chave para a cultura da linha celular ARPE-19. Você aprenderá: qual é o tempo de duplicação da ARPE-19? Qual é a densidade de semeadura da ARPE-19? Qual é a densidade celular da ARPE-19? Qual é o meio de congelamento da ARPE-19? Como se cultiva a linha celular ARPE-19?
Pontos-chave para a cultura de células ARPE-19
Tempo de duplicação populacional:
O tempo de duplicação da ARPE-19 é de aproximadamente 55 a 65 horas. As células podem passar por até 48 duplicações populacionais.
Adesivas ou em suspensão:
A ARPE-19 é uma linhagem celular aderente.
Proporção de subcultivo:
A proporção de subcultivo da ARPE-19 é de 1:3 a 1:5. As células aderentes são lavadas com PBS 1x e incubadas com solução de dissociação, Accutase, por 8 a 10 minutos. As células desprendidas são adicionadas a meio fresco e centrifugadas. O sedimento celular foi novamente ressuspenso e transferido para um frasco de cultura contendo meio fresco.
Meio de crescimento:
Utiliza-se o meio DMEM ou Ham’s F12 para cultivar a linhagem celular ARPE-19. O meio ARPE-19 é suplementado com 5% de FBS, 3,1 g/L de glicose, 15 mM de HEPES, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio e 1,2 g/L de NaHCO₃. O meio é substituído de 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As células ARPE-19 são mantidas em uma incubadora umidificada a 37 °C com um suprimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
A linhagem celular pode ser armazenada na fase de vapor de nitrogênio líquido ou a temperaturas inferiores a -150 °C para preservar a viabilidade das células a longo prazo.
Processo de congelamento e meio:
Utilizam-se CM-1 ou CM-ACF como meios de congelamento para as células ARPE-19. Resumidamente, as células são congeladas por meio de um método de congelamento lento que permite uma redução de temperatura de apenas 1 °C por minuto e protege as células contra o choque térmico.
Processo de descongelamento:
As células são descongeladas em banho-maria pré-ajustado a 37 °C. Após restar um pequeno pedaço de gelo, as células são adicionadas a meio de cultura fresco e centrifugadas. Isso remove os elementos do meio de congelamento. Em seguida, o sedimento celular é ressuspenso e as células são transferidas para um frasco para cultura.
Nível de biossegurança:
As células ARPE-19 são manuseadas em laboratórios de biossegurança nível 1.
Vantagens e limitações das células ARPE-19
As células ARPE-19 são amplamente utilizadas em estudos de biologia celular da retina. Assim como outras células, elas também apresentam algumas vantagens e limitações. Algumas delas estão listadas nesta seção:
Vantagens
As principais vantagens da linhagem celular ARPE-19 incluem:
Modelo de célula retiniana
As células ARPE-19 se assemelham muito às células do epitélio pigmentar da retina humana, tornando-as ideais para o estudo de doenças da retina e testes de medicamentos.
Taxa de crescimento estável
Essas células apresentam crescimento estável e podem ser mantidas por longos períodos, facilitando experimentos de longo prazo.
Adequação à transfecção
A linhagem celular ARPE-19 é um excelente hospedeiro para transfecção, amplamente utilizada em estudos de expressão tanto transitória quanto estável.
Limitações
A seguir, apresentamos algumas limitações associadas à linha celular ARPE-19:
Diferenciação limitada
A diferenciação das células ARPE-19 é limitada em comparação com as células retinianas primárias. Isso pode afetar certos estudos relacionados à diferenciação.
Aplicações da linha celular ARPE-19 na pesquisa
A linha celular ARPE-19 possui inúmeras aplicações na pesquisa da retina. Aqui, abordamos alguns usos específicos e significativos dessa linha celular do epitélio pigmentar da retina na pesquisa.
- Pesquisa sobre doenças da retina: as células ARPE-19 oferecem insights valiosos sobre a patogênese da retina. Pesquisadores utilizam essas células para investigar os mecanismos das doenças e possíveis tratamentos. Um estudo realizado em 2020 descobriu que o RNA circular hsa_circ_0041795 interage com o miRNA-646 e o VEGFC para facilitar a lesão induzida por níveis elevados de glicose nas células do epitélio pigmentar da retina humana ARPE-19. Portanto, o estudo propõe esse RNA circular como um alvo terapêutico e diagnóstico eficaz para combater a retinopatia diabética [2]. Da mesma forma, Jing Yang e colegas utilizaram células ARPE-19 e forneceram insights sobre a patogênese da retinopatia diabética. Eles observaram que a inibição do lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) pode suprimir a resposta inflamatória e a transição epitelial para mesenquimal em células ARPE-19 tratadas com altos níveis de glicose [3].
- Testes de medicamentos: as células ARPE-19 são utilizadas para avaliar a eficácia e a segurança de medicamentos e compostos, auxiliando no desenvolvimento de tratamentos ou terapias para doenças da retina. Por exemplo, um estudo realizado em 2019 constatou os efeitos protetores dos bioativos de Syzygium malaccense contra o estresse induzido pelo peróxido de hidrogênio em células epiteliais pigmentares da retina humana, ARPE-19 [4]. Posteriormente, um estudo identificou o papel terapêutico do extrato de Prunella vulgaris var. L contra lesões induzidas pela luz azul em células ARPE-19 e em modelo murino [5].
5. Células ARPE-19: Publicações científicas
A seguir, apresentamos algumas publicações de pesquisa interessantes que abordam as células do epitélio pigmentar da retina ARPE-19.
Avaliação das respostas de microRNA em células ARPE-19 ao estresse oxidativo
Este artigo científico foi publicado em 2018 na revista *Cutaneous and Ocular Toxicology*. Este estudo avaliou a expressão de miRNA em resposta ao estresse oxidativo induzido em células epiteliais pigmentares da retina humana ARPE-19 por meio do tratamento com peróxido de hidrogênio.
Esta publicação no *World Journal of Stem Cells* (2021) propôs que o meio condicionado de células ARPE-19 contém fatores de crescimento que estimulam a diferenciação neural de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo.
Este estudo foi publicado no International Journal of Molecular Sciences (2019). Ele afirma que a quercetina protege contra a liberação de quimiocinas estimulada pela IL-1β nas células ARPE-19, impedindo a ativação das cascatas de MAPK e NF-κB para melhorar a resposta inflamatória.
Este artigo de pesquisa foi publicado no International Journal of Molecular Sciences (2018). Este estudo avaliou os possíveis efeitos do estresse oxidativo e da inflamação nas funções da SIRT1 (sirtuína 1) e das DNMTs (metiltransferases de DNA), bem como na metilação do LINE-1 (elemento nuclear intercalado longo-1) em células ARPE-19.
Este artigo publicado na revista *Antioxidants* (2022) constatou que os extratos da flor de *Chrysanthemum boreale* exercem efeitos protetores contra os danos retinianos induzidos pela N-retinilideno-N-retiniletanolamina (A2E) em células ARPE-19.
Recursos para a linhagem celular ARPE-19: protocolos, vídeos e muito mais
A ARPE-19 é uma linhagem celular epitelial da retina amplamente utilizada. Os recursos disponíveis sobre protocolos de cultura e transfecção de células ARPE-19 estão listados aqui:
- Transfecção de ARPE-19: Este vídeo é um guia passo a passo para aprender o protocolo de transfecção da linha celular ARPE-19.
Aqui estão alguns recursos que descrevem o protocolo de cultura celular da ARPE-19:
- Protocolo de cultura celular da ARPE-19: Este link contém informações sobre a cultura e a manutenção das células ARPE-19. Inclui informações sobre o meio de cultura da ARPE-19, condições de cultura, protocolos para subcultura e manuseio de culturas proliferativas e criopreservadas.
Referências
- Schnichels, S., et al., Retina em placa de cultura: Culturas celulares, explantes retinianos e modelos animais para doenças comuns da retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. e X. Kang, o hsa_circ_0041795 contribui para a lesão das células epiteliais pigmentares da retina humana (ARPE 19) induzida por altos níveis de glicose por meio da captação do miR-646 e da ativação do VEGFC. Gene, 2020. 747: p. 144654.
- Yang, J., et al., O silenciamento do SNHG1 inibiu a transição epitelial-mesenquimal e a resposta inflamatória das células ARPE-19 induzidas por níveis elevados de glicose. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Efeito protetor dos derivados da miricetina de Syzygium malaccense contra o estresse induzido pelo peróxido de hidrogênio em células ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
- Kim, J., K. Cho e S.-Y. Choung, Efeito protetor do extrato de Prunella vulgaris var. L contra danos induzidos pela luz azul em células ARPE-19 e na retina de camundongos. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: p. 622-631.