Células NCH612

Name: CLS Cell Lines Service GmbH
Address: Dr.-Eckener-Straße 8, Eppelheim, 69214, DE
Telephone: +496221405780
Price range: €€€

US$ 800,00*

Os produtos são enviados congelados em gelo seco, em criotubos. Cada criotubo contém, normalmente, 3 × 10^⁶ células para linhagens aderentes ou 5 × 10^⁶ células para linhagens em suspensão (consulte o Certificado de Análise [CoA] do lote para obter mais detalhes).

Preços sem impostos, mais custos de envio

cryovial

Número do produto: 300121

Ficha de dados de segurança

Ficha técnica do produto

Descrição	A NCH612 é uma linhagem celular oligodendrocítica derivada de paciente, originária de tecido cerebral humano, que serve como um modelo de pesquisa relevante para o oligodendroglioma anaplásico (grau III da OMS). Essa linhagem celular apresenta a mutação IDH1 R132H, uma alteração genética característica frequentemente associada aos oligodendrogliomas. A mutação leva a modificações epigenéticas, incluindo o fenótipo metilador das ilhas CpG do glioma (G-CIMP), que contribui para o desenvolvimento e a progressão do tumor. Notavelmente, a NCH612 apresenta uma deleção parcial dos braços cromossômicos 1p e 19q, uma característica genética comumente encontrada em oligodendrogliomas e associada a melhor prognóstico e resposta a certas terapias. Estudos demonstraram que o NCH612 é particularmente sensível ao inibidor da metiltransferase de DNA decitabina (DAC). O tratamento com DAC resulta na redução da proliferação celular e da formação de colônias, principalmente por meio da regulação negativa da TERT (transcriptase reversa da telomerase) e da regulação positiva da p21, um inibidor de quinase dependente de ciclina envolvido na resposta a danos no DNA. Curiosamente, essa sensibilidade parece estar ligada à presença tanto da mutação no IDH1 quanto da codeleção 1p/19q, já que outras linhagens celulares de glioma com mutação no IDH1, mas sem essa deleção — como a NCH1681 —, apresentam resistência à DAC. Essas descobertas sugerem que terapias epigenéticas como o DAC poderiam ser particularmente eficazes em oligodendrogliomas anaplásicos com mutação no IDH1 e codeleção 1p/19q. Investigações moleculares adicionais revelam que o tratamento com DAC em células NCH612 leva ao enriquecimento de vias relacionadas à replicação do DNA, à regulação do ciclo celular e à função lisossomal, esclarecendo o mecanismo de ação do medicamento. A repressão do TERT pelo DAC é mediada pelo p21, enfatizando o papel crítico dessa via na resposta à terapia epigenética. Dado seu perfil genético e epigenético bem definido, o NCH612 representa um valioso modelo in vitro para o estudo da biologia dos oligodendrogliomas anaplásicos e para o desenvolvimento de terapias direcionadas a tumores com mutação no IDH1 e codeleção 1p/19q.
Organismo	Humano
Tecido	Cérebro
Doença	Oligodendroglioma anaplásico, grau III da OMS, com mutação no gene IDH1 (R132H)

Idade	39 anos
Gênero	Masculino
Etnia	caucasiano
Propriedades de crescimento	Cultura de esferóides

Referência	NCH612 (número de catálogo da Cytion 300121)
Nível de biossegurança	1
NCBI_TaxID	9606
Número de acesso do Cellosaurus	CVCL_x913

Meio de cultura	DMEM:Ham's F12 (1:1), p/v: 3,1 g/L de glicose, p/v: 2,5 mM de L-glutamina, p/v: 15 mM de HEPES, peso: 0,5 mM de piruvato de sódio, peso: 1,2 g/L de NaHCO₃ (número de artigo da Cytion 820400a)
Suplementos	Adicione ao meio 5 mg/L de heparina, 20 ng/mL de bFGF, 20 microgramas/L de EGF, 5 mg/L de insulina, 100 mg/L de transferrina, 5,2 microgramas/L de selenito de sódio, 6,3 microgramas/L de progesterona, 161,1 microgramas/L de putrescina e 50 mg/L de hidrocortisona
Subcultura	Para a subcultura de esferóides, comece dissociando-os mecanicamente por meio de pipetagem para cima e para baixo de 5 a 10 vezes, utilizando uma pipeta Eppendorf com pontas filtradas de 1000 μl. Em seguida, centrifugue a mistura a 300 g por 5 minutos à temperatura ambiente para precipitar as células. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o sedimento celular em meio de cultura fresco. Por fim, transfira as células ressuspensas para novos recipientes de cultura, a fim de promover a formação de novos esferóides. Essa abordagem garante a dissociação eficiente dos esferóides e os prepara para o crescimento contínuo em um novo ambiente.
Densidade de semeadura	1 x 10⁵ células/mL
Renovação de fluidos	É preciso adicionar meio fresco a cada 2 a 3 dias (2 a 5 ml, dependendo do tamanho do frasco de cultura celular).
Recuperação pós-degelo	Devagar. Após o descongelamento, deixe as células se recuperarem do processo de congelamento por pelo menos 48 horas.
Meio de congelamento	Como meio de criopreservação, utilizamos 50% de meio basal + 40% de FBS + 10% de DMSO, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
Descongelamento e cultura de células	Verifique se o frasco permanece profundamente congelado no momento da entrega, pois as células são enviadas em gelo seco para manter as temperaturas ideais durante o transporte. Após o recebimento, armazene o criovial imediatamente a temperaturas abaixo de -150 °C para garantir a preservação da integridade celular ou prossiga para a etapa 3, caso seja necessária a cultura imediata. Para cultura imediata, descongele rapidamente o frasco imergindo-o em um banho-maria a 37 °C com água limpa e um agente antimicrobiano, agitando suavemente por 40 a 60 segundos até que reste apenas um pequeno pedaço de gelo. Realize todas as etapas subsequentes em condições estéreis em uma cabine de fluxo, desinfetando o criovial com etanol a 70% antes de abri-lo. Abra cuidadosamente o frasco desinfetado e transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga de 15 ml contendo 8 ml de meio de cultura à temperatura ambiente, misturando delicadamente. Centrifugue a mistura a 300 x g por 3 minutos para separar as células e descarte cuidadosamente o sobrenadante contendo o meio de congelamento residual. Ressuspender suavemente o sedimento celular em 10 ml de meio de cultura fresco. Para células aderentes, dividir a suspensão entre dois frascos de cultura T25; para culturas em suspensão, transferir todo o meio para um frasco T25 a fim de promover a interação e o crescimento celular eficazes. Siga os protocolos de subcultura estabelecidos para o crescimento contínuo e a manutenção da linhagem celular, garantindo resultados experimentais confiáveis.
Atmosfera de incubação	37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
Condições de envio	As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
Condições de armazenamento	Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

Esterilidade	A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência. Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Células NCH612

Informações gerais

Características

Dados regulatórios

Dados biomoleculares

Manuseio

Controle de Qualidade e Análise Molecular