Células K7M2 wt-Luc
Informações gerais
| Descrição | A K7M2 wt-Luc é um derivado bioluminescente da linhagem celular murina de osteossarcoma K7M2, modificada geneticamente para expressar de forma estável um gene repórter de luciferase de vaga-lume. A linhagem celular parental K7M2 foi estabelecida a partir da ascite de um osteossarcoma espontâneo em um camundongo BALB/c e é caracterizada pela morfologia osteoblástica e alto potencial metastático, particularmente para os pulmões. O K7M2 é um dos poucos modelos singênicos de osteossarcoma disponíveis na linhagem BALB/c, o que o torna uma ferramenta valiosa para o estudo da biologia do osteossarcoma, das interações tumor-imunológicas e da avaliação de estratégias de imunoterapia em um hospedeiro imunocompetente. A integração estável da luciferase na linha K7M2 wt-Luc permite a imagem por bioluminescência (BLI) sensível e não invasiva do crescimento do tumor primário e da disseminação metastática pulmonar em camundongos BALB/c singênicos. Após a administração do substrato luciferina, o sinal emitido se correlaciona com o número de células tumorais viáveis, possibilitando o monitoramento longitudinal do enxerto tumoral, da colonização metastática e da resposta terapêutica sem a necessidade de procedimentos invasivos em cada momento de avaliação. Isso torna o K7M2 wt-Luc particularmente adequado para estudos pré-clínicos que avaliam agentes antitumorais e antimetastáticos, inibidores de pontos de controle e estratégias de tratamento combinado no osteossarcoma. O K7M2 wt-Luc mantém as propriedades biológicas e imunológicas da linhagem parental K7M2, incluindo a expressão do componente C3 do complemento e do receptor Fc gama I (FcgRI), características que podem influenciar as interações com o compartimento imunológico inato. O repórter de luciferase aumenta substancialmente a flexibilidade experimental e a sensibilidade para o acompanhamento em tempo real da progressão tumoral. Os pesquisadores devem validar a atividade da luciferase, a cinética de crescimento e o comportamento metastático sob suas condições experimentais específicas antes do uso in vivo em larga escala. |
|---|---|
| Organismo | Mouse |
| Tecido | Ascite |
| Doença | Osteossarcoma em camundongos |
| Local da metástase | Pulmão |
| Aplicações | Pesquisa sobre osteossarcoma; modelo tumoral singênico BALB/c; imagem de metástases pulmonares por bioluminescência; avaliação de medicamentos antitumorais e antimetastáticos; testes com inibidores de pontos de controle; estudos de interação do sistema imunológico inato (C3, FcgRI); imunoterapia para câncer ósseo pediátrico |
| Sinônimos | K7M2-WT, K7M2 |
Características
| Raça/Subespécie | BALB/c |
|---|---|
| Idade | 895 dias |
| Gênero | Mulher |
| Tipo de célula | Osteoblasto |
| Propriedades de crescimento | Aderente |
Dados regulatórios
| Referência | K7M2 wt-Luc (número de catálogo da Cytion 305684) |
|---|---|
| Nível de biossegurança | 1 |
| NCBI_TaxID | 10090 |
| Número de acesso do Cellosaurus | Não atribuído (derivado do repórter K7M2 wt-Luc; osteossarcoma BALB/c singênico K7M2 parental) |
| Situação em relação aos OGMs | GMO-S1: Esta linhagem celular contém uma cassete repórter de luciferase de vaga-lume (Luc2, com códons otimizados) integrada de forma estável, introduzida por meio de transdução lentiviral incompetente para replicação. A população celular policlonal resultante foi mantida sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). É necessário o nível de contenção S1. Essa classificação se aplica apenas na Alemanha e pode diferir em outros países. |
Dados biomoleculares
| Receptores expressos | Complemento (C3), expresso; receptor Fc; IgG; I de alta afinidade (Fcgr1), expresso |
|---|---|
| Expressão de antígenos | Luc2 (firefly, com otimização de códons) |
| Tumorigênico | Sim |
Manuseio
| Meio de cultura | DMEM |
|---|---|
| Suplementos | Adicione 10% de FBS ao meio |
| Reagente de dissociação | Accutase |
| Subcultura | Remova o meio antigo das células aderentes e lave-as com PBS sem cálcio nem magnésio. Para frascos T25, use 3 a 5 ml de PBS; para frascos T75, use 5 a 10 ml. Em seguida, cubra as células completamente com Accutase, utilizando 1 a 2 ml para frascos T25 e 2,5 ml para frascos T75. Deixe as células incubarem à temperatura ambiente por 8 a 10 minutos para que se desprendam. Após a incubação, misture delicadamente as células com 10 ml de meio para ressuspender, depois centrifugue a 300xg por 3 minutos. Descarte o sobrenadante, ressuspenda as células em meio fresco e transfira-as para novos frascos que já contenham meio fresco. |
| Proporção de divisão | 1 a 3 |
| Densidade de semeadura | 1 a 3 × 10⁴ células/cm² |
| Renovação de fluidos | 2 a 3 vezes por semana |
| Meio de congelamento | Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo + 10% de DMSO para garantir uma viabilidade adequada após o descongelamento. |
| Descongelamento e cultura de células |
|
| Atmosfera de incubação | 37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada. |
| Condições de envio | As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado. |
| Condições de armazenamento | Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido. |
Controle de Qualidade e Análise Molecular
| Local da metástase: | Pulmão |
|---|