Células A549-RFP

A549-RFP é um derivado marcado com fluorescência da linhagem celular humana A549 de adenocarcinoma pulmonar, modificada geneticamente para expressar constitutivamente a proteína fluorescente vermelha (RFP) para visualização e rastreamento em tempo real. A linhagem parental A549 foi estabelecida a partir de um adenocarcinoma pulmonar derivado de um doador adulto e apresenta morfologia epitelial com características de crescimento aderente. As células A549 mantêm características das células epiteliais alveolares do tipo II, incluindo a expressão de citoqueratinas e a capacidade de produzir proteínas associadas ao surfactante. A introdução de uma cassete de expressão estável de RFP permite fluorescência contínua sem alterar significativamente as propriedades proliferativas e metabólicas intrínsecas da linhagem parental, tornando a A549-RFP adequada para estudos de imagem longitudinais.

A caracterização funcional das células A549 em amplos painéis de células cancerosas demonstrou que o tamanho celular, o conteúdo proteico e a taxa de síntese proteica estão positivamente correlacionados com o volume celular, e que células maiores tendem a proliferar mais lentamente. Em análises comparativas, as células A549 situam-se entre as linhagens de células epiteliais cancerosas relativamente menores e de proliferação mais rápida, em contraste com células maiores e de caráter mais mesenquimal, que apresentam maior expressão de vimentina e níveis mais baixos de E-caderina. Essas distinções metabólicas e fenotípicas são relevantes para a interpretação experimental, uma vez que as taxas de síntese proteica e os fluxos metabólicos variam de acordo com o tamanho celular e influenciam a sensibilidade a agentes que têm como alvo a proliferação ou as vias anabólicas reguladas pelo mTOR. A modificação com RFP preserva a adequação das células A549 para tais investigações metabólicas e farmacológicas, ao mesmo tempo em que permite a visualização direta.

A549-RFP é amplamente utilizada em sistemas de cocultura, modelos de xenoenxertos ortotópicos e ectópicos e ensaios de invasão ou metástase, nos quais a marcação fluorescente facilita a distinção entre células tumorais e componentes estromais ou do hospedeiro. A fluorescência vermelha estável permite aplicações que incluem imagens de células vivas, triagem de alto conteúdo, quantificação baseada em citometria de fluxo e imagens ópticas in vivo. Como variante rastreável de um modelo bem caracterizado de adenocarcinoma de pulmão, o A549-RFP oferece uma plataforma robusta para o estudo da proliferação de células tumorais, da transição epitelial-mesenquimal, da resposta a medicamentos e das interações entre o tumor e o microambiente, tanto em condições in vitro quanto in vivo.

Modificação genética: Modificado de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, a fim de expressar um repórter de proteína fluorescente vermelha (RFP); mantido como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Contenção S1/BSL-1.