A375-GFP

Name: CLS Cell Lines Service GmbH
Address: Dr.-Eckener-Straße 8, Eppelheim, 69214, DE
Telephone: +496221405780
Price range: €€€

US$ 800,00*

Os produtos são enviados congelados em gelo seco, em criotubos. Cada criotubo contém, normalmente, 3 × 10^⁶ células para linhagens aderentes ou 5 × 10^⁶ células para linhagens em suspensão (consulte o Certificado de Análise [CoA] do lote para obter mais detalhes).

Preços sem impostos, mais custos de envio

cryovial

Número do produto: 305665

Ficha de dados de segurança

Ficha técnica do produto

Certificado de Análise (CoA)

Descrição	A375-GFP é uma variante geneticamente modificada da linhagem celular A375 de melanoma maligno humano, que expressa de forma estável a proteína fluorescente verde aprimorada (eGFP). A linhagem celular parental A375 é derivada de um tumor de melanoma cutâneo em um paciente adulto e é amplamente utilizada como modelo para o melanoma cutâneo, particularmente para estudos envolvendo a sinalização oncogênica do BRAF, uma vez que abriga a mutação BRAF V600E. Essa mutação leva à ativação constitutiva da via MAPK/ERK, promovendo a proliferação e a sobrevivência, e tornando as células A375 altamente relevantes para a investigação de terapias direcionadas, como inibidores de BRAF e MEK. A variante que expressa GFP mantém essas características moleculares e fenotípicas, ao mesmo tempo em que possibilita aplicações baseadas em fluorescência. A incorporação estável do repórter eGFP permite a visualização em tempo real das células A375-GFP tanto em sistemas in vitro quanto in vivo. A imagem por fluorescência facilita o monitoramento da proliferação, migração, invasão e alterações morfológicas das células, bem como o acompanhamento do crescimento tumoral e da disseminação metastática em modelos de xenoenxertos. A variante aprimorada da GFP oferece maior brilho e estabilidade em comparação com construções anteriores de GFP, permitindo detecção sensível mesmo com baixos números de células. Isso torna a A375-GFP particularmente útil em experimentos de cocultura, plataformas de imagem de alto conteúdo e estudos que exigem resolução espacial precisa do comportamento das células tumorais. A375-GFP mantém o fenótipo agressivo e proliferativo da linhagem parental de melanoma, incluindo a responsividade a inibidores da via MAPK e a capacidade de invasão e metástase em modelos experimentais. A adição da GFP amplia sua utilidade para triagem de medicamentos, imagem de células vivas e estudos de interação entre o tumor e o microambiente. Assim como em outras linhagens celulares marcadas com repórter, recomenda-se a validação da estabilidade e consistência da fluorescência ao longo das passagens para aplicações experimentais específicas. Modificação genética: Modificada de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, a fim de expressar o repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1; mantida como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Contenção S1/BSL-1.
Organismo	Humano
Tecido	Perna, pele
Doença	Melanoma amelanótico

Idade	54 anos
Gênero	Mulher
Etnia	caucasiano
Propriedades de crescimento	Aderente

Referência	A375-GFP (número de catálogo da Cytion 305665)
Nível de biossegurança	1
NCBI_TaxID	9606
Número de acesso do Cellosaurus	CVCL_QZ67
Situação em relação aos OGMs	GMO-S1: Esta linhagem celular contém um repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1 integrado de forma estável, introduzido por meio de transdução lentiviral incompetente para replicação. A população celular policlonal resultante foi mantida sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). É necessário o nível de contenção S1. Essa classificação se aplica apenas na Alemanha e pode diferir em outros países.

Expressão de antígenos	ZsGreen1 (proteína fluorescente verde)
Perfil mutacional	Mutação: BRAF, simples, p.Val600Glu (c.1799T>A), homozigótica (proveniente da linhagem celular parental).Mutação, CDKN2A, simples, p.Glu61Ter (c.181G>T) (p.Gly75Val, c.224G>T), homozigótica (proveniente da linhagem celular parental).Mutação, CDKN2A, simples, p.Glu69Ter (c.205G>T) (p.Gly83Val, c.248G>T), homozigótica (proveniente da linhagem celular parental).Mutação, TERT, Simples, c.1-146C>T (c.250C>T) (C250T), Não especificada, Observação = No promotor (proveniente da linhagem celular parental).

Meio de cultura	DMEM, p/v: 4,5 g/L de glicose, p/v: 4 mM de L-glutamina, p/v: 3,7 g/L de NaHCO₃, p/v: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo da Cytion 820300a)
Suplementos	Adicione 10% de FBS ao meio
Reagente de dissociação	Accutase
Subcultura	Remova o meio antigo das células aderentes e lave-as com PBS sem cálcio nem magnésio. Para frascos T25, use 3 a 5 ml de PBS; para frascos T75, use 5 a 10 ml. Em seguida, cubra as células completamente com Accutase, utilizando 1 a 2 ml para frascos T25 e 2,5 ml para frascos T75. Deixe as células incubarem à temperatura ambiente por 8 a 10 minutos para que se desprendam. Após a incubação, misture delicadamente as células com 10 ml de meio para ressuspender, depois centrifugue a 300xg por 3 minutos. Descarte o sobrenadante, ressuspenda as células em meio fresco e transfira-as para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de semeadura	1 a 3 × 10^⁴ ^células/cm^²
Renovação de fluidos	2 a 3 vezes por semana
Meio de congelamento	Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo + 10% de DMSO para garantir uma viabilidade adequada após o descongelamento.
Descongelamento e cultura de células	Verifique se o frasco permanece profundamente congelado no momento da entrega, pois as células são enviadas em gelo seco para manter as temperaturas ideais durante o transporte. Após o recebimento, armazene o criovial imediatamente a temperaturas abaixo de -150 °C para garantir a preservação da integridade celular ou prossiga para a etapa 3, caso seja necessária a cultura imediata. Para cultura imediata, descongele rapidamente o frasco imergindo-o em um banho-maria a 37 °C com água limpa e um agente antimicrobiano, agitando suavemente por 40 a 60 segundos até que reste apenas um pequeno pedaço de gelo. Realize todas as etapas subsequentes em condições estéreis em uma cabine de fluxo, desinfetando o criovial com etanol a 70% antes de abri-lo. Abra cuidadosamente o frasco desinfetado e transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga de 15 ml contendo 8 ml de meio de cultura à temperatura ambiente, misturando suavemente. Centrifugue a mistura a 200 x g por 5 minutos e descarte cuidadosamente o sobrenadante contendo o meio de congelamento. Siga o procedimento descrito na seção “Recuperação pós-descongelamento”
Atmosfera de incubação	37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
Condições de envio	As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
Condições de armazenamento	Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

Número do lote	Tipo de certificado	Data	Número de catálogo
305665-200426	Certificado de Análise	24. Jun. 2026	305665

A375-GFP

Informações gerais

Características

Dados regulatórios

Dados biomoleculares

Manuseio

Controle de Qualidade e Análise Molecular

Certificado de Análise (CoA)