SiHa-celler – belyser forskningen om livmoderhalscancer
SiHa-celler är livmoderhalscancerceller som används i stor utsträckning inom biomedicinsk forskning. De är utmärkta transfektionsvärdar och lämpar sig därför väl för studier av genuttryck. Eftersom de har mänskligt ursprung och är relevanta för livmoderhalscancer används dessa celler främst inom cancerbiologi, virologi och läkemedelsutveckling.
- Odlingsmedium
- Eagle's minimum essential medium (EMEM) innehållande 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 och Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) används för optimal tillväxt av SiHa-celler. Mediet byts ut 2 till 3 gånger per vecka.
- Fördubblingstid
- Fördubblingstiden för SiHa-celler är cirka 17 timmar.
- Tillväxtform
- SiHa är en vidhäftande cellinje.
- Biosäkerhetsnivå
- BSL-1
- Finns hos
- Cytion — Beställ SiHa
Allmänna egenskaper och ursprung för SiHa-celler
Det är avgörande att förstå en cellinjes ursprung och allmänna egenskaper, eftersom detta påverkar dess användning i din forskning. I detta avsnitt av artikeln får du lära dig mer om SiHa-cellinjes ursprung, utmärkande egenskaper och mycket mer: Vad är SiHa-cancercellinjen? Vad är SiHa-celler och HPV? Vad är cellinjen SiHa:s ursprung? Hur ser SiHa:s morfologi ut?
- SiHa, cellinjen för livmoderhalscancer, härstammar från fragment av en primär livmoderbiopsi från en asiatisk kvinna (55 år) med skivepitelcancer [1].
- SiHa-cellinjen uppvisar en hypertriploid karyotyp. De flesta cellerna har ett genomsnittligt kromosomantal mellan 69 och 72. Cirka 24 % av cellerna har dock ett modalt kromosomantal på 71.
- SiHa-cellerna är positiva för humant papillomvirus 16. De uppvisar en integration av cirka 1 till 2 kopior av HPV-genomet per cell [2].
- Dessa livmoderhalscancerceller uppvisar en epitelial morfologi.
SiHa-cellinjen: Information om odling
Det är inte lätt att upprätthålla en cellinjekultur förrän man känner till alla viktiga punkter för odlingen. Du bör veta: Vad är fördubblingstiden för SiHa? Vad är odlingsmedium för SiHa-celler? Hur odlar man SiHa-cellinjen?
Viktiga punkter för odling av SiHa-celler
Fördubblingstid:
Fördubblingstiden för SiHa-celler är cirka 17 timmar.
Adherenta eller i suspension:
SiHa är en vidhäftande cellinje.
Subkultiveringsförhållande:
Subkultiveringsförhållandet för SiHa-celler är 1:2 till 1:4. Vid passering sköljs de adherenta cellerna med 1x PBS. Accutase-lösning tillsätts och cellerna inkuberas i 8 till 10 minuter vid rumstemperatur. Därefter tillsätts odlingsmedium och cellerna centrifugeras. Cellpelleten resuspenderas och cellerna hälls över i en ny kolv för odling.
Odlingsmedium:
Eagle's minimum essential medium (EMEM) innehållande 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 och Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) används för optimal tillväxt av SiHa-celler. Mediet byts ut 2 till 3 gånger per vecka.
Odlingsförhållanden:
SiHa-cellerna hålls i en fuktad inkubator vid 37 °C med en CO₂-tillförsel på 5 %.
Förvaring:
De frysta ampullerna med SiHa-cellinjen för livmoderhalscancer förvaras vid en temperatur under -150 °C i en elektrisk frys eller i flytande kväves ångfas för längre tids förvaring.
Frysningsprocess och medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysmedel används för frysning av SiHa-celler. Cellerna fryses med en långsam frysmetod som endast tillåter en temperatursänkning på 1 °C per minut för att skydda cellernas livskraft.
Upptining:
Frysta celler hålls i 40 till 60 sekunder i ett vattenbad vid 37 °C tills endast en liten isklump återstår. Därefter tillsätts färskt odlingsmedium och cellerna centrifugeras för att avlägsna komponenterna i frysmediet. Cellpelleten resuspenderas och cellerna överförs till en odlingskolv för odling.
Biosäkerhetsnivå:
Ett laboratorium med biosäkerhetsnivå 1 krävs för hantering och underhåll av SiHa-cellkulturer.
Fördelar och nackdelar med SiHa-cellinjen
Precis som andra humana karcinomcellinjer har även SiHa vissa utmärkande egenskaper som är förknippade med vissa fördelar och nackdelar. Här har vi diskuterat några av de viktigaste.
Fördelar med cellinjen SiHa för livmoderhalscancer
- Modell för livmoderhalscancer
- Härrör från skivepitelcancer i livmoderhalsen.
- Används för att studera mekanismerna, tillväxten och utvecklingen av livmoderhalscancer.
- Uttrycker generna p53+ och pRB+, som är relaterade till DNA-reparation, reglering av cellcykeln och tumörsuppression.
- Tumörbildande potential
- SiHa-celler är tumörbildande och kan framkalla dåligt differentierade epidermoida tumörer av grad III hos nakenmöss.
- Används för cancerforskning in vivo och för att testa cancerbehandlingar.
Nackdelar med SiHa-celler
- Proliferationshastighet
- SiHa-celler förökar sig snabbt, vilket leder till överväxt.
- Kräver frekvent passering, vilket ökar risken för genetisk instabilitet, vilket kan påverka cellernas beteende över tid.
Forskningsmässiga tillämpningar av SiHa-celler
SiHa-cellinjen används i stor utsträckning inom forskningen om livmoderhalscancer. Här diskuteras några specifika tillämpningar av denna cellinje.
- Studier relaterade till humant papillomvirus (HPV): SiHa-celler är HPV 16-positiva och utgör därför värdefulla modeller för att studera humant papillomvirusinfektion, dess molekylära mekanismer och dess roll i utvecklingen och progressionen av livmoderhalscancer. Forskare använder även dessa celler för att undersöka viral replikation, integration och dess inverkan på värdcellens processer. I en studie som genomfördes 2020 användes SiHa-cellinjen för att undersöka vilken roll HPV-onkoproteinerna E6/E7 spelar i utvecklingen av livmoderhalscancer genom att inrikta sig på dem med CRISPR-teknik. Resultaten visade att nedregleringen av E6/E7-generna ledde till hämmad tillväxt och apoptos hos SiHa-cellerna. Dessa virusgener kan därför fungera som viktiga läkemedelsmål för utveckling av behandlingar mot HPV-associerad livmoderhalscancer [3].
- Cancerbiologi: SiHa-celler utgör en ovärderlig modell för att studera livmoderhalscancerbiologi, inklusive cancerutveckling, progression, metastasering och invasion. Forskare använder dessa celler för att undersöka de genetiska mutationer och underliggande molekylära signalvägar som bidrar till utvecklingen och tillväxten av livmoderhalscancer; i en studie användes exempelvis SiHa-celler och man fann att uppreglerat SEC61G (SEC61-translokonens gamma-subenhet) främjar livmoderhalscancercellernas proliferation genom aktivering av MAPK-kaskaden [4].
- Läkemedelsscreening och -testning: SiHa är en allmänt använd livmoderhalscancercellinje för att utvärdera effekten av potentiella läkemedel mot cancer som är specifika för HPV-associerad livmoderhalscancer. Forskare undersöker läkemedlens antiproliferativa, apoptotiska och antimetastatiska potential med hjälp av dessa celler. Ett exempel är en studie som genomfördes 2019 och som undersökte den cytotoxiska potentialen hos fruktextrakt från Vatica diospyroides Symington Type SS på SiHa-cellinjen för livmoderhalscancer [5].
SiHa-celler till din forskning!
Forskningspublikationer som behandlar SiHa-celler
Några betydelsefulla och ofta citerade forskningspublikationer handlar om cellinjen SiHa för skivepitelcancer i livmoderhalsen.
Denna publikation i OncoTargets and Therapy (2019) föreslog att den naturliga föreningen aloe-emodin utövar apoptotiska effekter associerade med HPV E6/E7 och glukosmetabolismen i SiHa-celler från livmoderhalscancer.
Denna artikel publicerades i Future Journal of Pharmaceutical Sciences år 2022. Studien undersökte de antitumöra effekterna av bladextrakt från växten Excoecaria agallocha (L.) på SiHa-cellinjen för livmoderhalscancer.
Denna studie, publicerad i Journal of Sol-Gel Science and Technology (2022), föreslog att 1,10-fenantrolinmolekylen, vid koppling till zinksulfat-nanopartiklar, utövar betydande antiproliferativa effekter i SiHa-celler.
Denna forskning publicerades i Oncology Reports 2019. Studien visade att Astragalosid IV, en naturprodukt, hämmar migrationen och invasionen av SiHa-celler genom att modulera de TGF-β1-medierade PI3K- och MAPK-signalvägarna.
Denna studie i tidskriften *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) visade att IFI16 (interferon-gamma inducible protein 16) reglerar PD-L1-genen genom att aktivera STING-TBK1-NF-kB-signalvägen för att främja tillväxten av SiHa-celler vid livmoderhalscancer.
Resurser för SiHa-cellinjen: protokoll, videor och mer
Här är några online-resurser om SiHa-cellerna.
- Transfektion av SiHa-celler: Denna forskningsartikel innehåller ett protokoll för odling av SiHa-celler från livmoderhalscancer samt för transfektion av SiHa-celler.
Följande länk innehåller information om cellodling av SiHa-celler.
- SiHa-cellinjen: Denna webbplats innehåller mycket värdefull information om SiHa-cellinjen. Detta inkluderar information om odlingsmedier, odlingsförhållanden, protokoll för subkultivering av SiHa-celler samt hantering av dess proliferativa och kryokonserverade odlingar.
Vanliga frågor om SiHa-celler från livmoderhalscancer
Referenser
- Melzer, C., J. von der Ohe och R. Hass, Kortfattad översikt: interaktion mellan mesenkymala stroma-/stamcellsliknande celler och cancerceller erbjuder terapeutisk potential. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951–968.
- Ostrowska, K.M. m.fl., Undersökning av hur högrisk-humant papillomvirus påverkar den biokemiska sammansättningen hos livmoderhalscancerceller med hjälp av vibrationsspektroskopi. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087–3093.
- Chen, Y., m.fl., Hämning av tillväxten av humana livmoderhalscancerceller in vitro och in vivo genom klyvning av humant papillomvirus E6/E7-mRNA med hjälp av CRISPR/Cas13a-systemet. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G främjar spridningen av livmoderhalscancer genom att aktivera MAPK-signalvägen. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Anticancerpotential hos fruktextrakt från Vatica diospyroides symington typ SS och deras effekt på programmerad celldöd hos livmoderhalscancercellinjer. The Scientific World Journal, 2019. 2019.