Walker-256 (LLC-WRC 256) Células

O Freeze Medium CM-1 da Cytion é um meio de criopreservação de última geração concebido para garantir o mais alto nível de viabilidade e funcionalidade celular após o descongelamento. Este meio versátil é adequado para um amplo espetro de tipos de células, incluindo células humanas e animais, tornando-o uma ferramenta essencial para diversas aplicações de investigação. Formulado com uma combinação meticulosamente equilibrada de crioprotectores e nutrientes essenciais, o Freeze Medium CM-1 minimiza a formação de cristais de gelo e o stress celular durante o processo de congelação, preservando assim a integridade celular.
As principais caraterísticas do Freeze Medium CM-1 incluem:

Ampla compatibilidade: Eficaz para uma vasta gama de tipos de células, incluindo células primárias, células estaminais e linhas celulares estabelecidas.
Alta Viabilidade: Optimizado para maximizar a recuperação e a viabilidade das células pós-descongelamento, garantindo resultados experimentais fiáveis.
Pronto a utilizar: Convenientemente preparado e esterilizado para aplicação imediata, reduzindo o tempo de preparação e o risco de contaminação.
Estabilidade melhorada: Mantém um desempenho consistente sob condições padrão de criopreservação, garantindo resultados reprodutíveis.
Longo prazo de validade: O CM-1 é um meio de criopreservação pronto a utilizar que contém soro e que pode ser armazenado no frigorífico até um ano.


Utilização do CM-1 para congelação de células

Para utilizar o CM-1 para congelar células aderentes e em suspensão, siga estes passos

Para células aderentes, lavar e dissociar as células do substrato de cultura. No caso das células em suspensão, avançar diretamente para o passo seguinte.
Contar as células para garantir que estão na concentração correta.
Centrifugar as células para as pelletar e, em seguida, ressuspender em meio de congelação CM-1.
Transferir as células ressuspensas para frascos criogénicos.
Utilize um método de congelação lenta antes de transferir as células para armazenamento a longo prazo





Método
Descrição
Passos





❄️
Congelação manual

Um método passo a passo que envolve a redução gradual da temperatura para garantir a viabilidade das células

1️⃣ Colocar as células em meio de congelação num congelador a 4°C durante 40 minutos.
2️⃣ Transferir para um congelador a -80°C durante 24 horas.
3️⃣ Armazenar as células em azoto líquido para preservação a longo prazo



❄️
Utilização do Mr. Frosty

Um dispositivo conveniente que permite taxas de congelação controladas sem energia eléctrica

1️⃣ Preparar as células em frascos criogénicos com meio de congelação.
2️⃣ Colocar os frascos criogénicos no recipiente Mr. Frosty.
3️⃣ Armazenar a -80°C durante 24 horas antes de transferir para azoto líquido



❄️
Congelador de velocidade controlada

Um congelador de alta precisão da Thermo Fisher ou de outros fabricantes, concebido para a redução controlada da temperatura

1️⃣ Programar o dispositivo para diminuir gradualmente a temperatura.
2️⃣ Colocar as células preparadas no congelador.
3️⃣ Após o ciclo de congelação, transferir as células para azoto líquido









Armazenar os frascos criogénicos a temperaturas inferiores a -130°C ou em azoto líquido para preservação a longo prazo.


Ingredientes

Contém FBS, DMSO, Glucose, Sais
Capacidade tampão: pH = 7,2 a 7,6


O Freeze Medium CM-1 da Cytion oferece uma solução fiável para a criopreservação, garantindo uma elevada viabilidade celular e funcionalidade pós-descongelamento para uma vasta gama de aplicações de investigação.

O meio RPMI 1640, também conhecido como meio RPMI, é um meio de cultura de células altamente versátil, amplamente utilizado na investigação biológica para cultivar várias células de mamíferos. Desenvolvido por George E. Moore, Robert E. Gerner e H. Addison Franklin em 1966 no famoso Roswell Park Comprehensive Cancer Center, este meio derivou o seu nome da sua origem no Roswell Park Memorial Institute (RPMI).
Inicialmente concebido para suportar o crescimento de células leucémicas humanas em culturas em suspensão e em monocamada, o meio RPMI 1640 evoluiu através de modificações efectuadas por investigadores e fornecedores comerciais para se tornar adequado a uma gama diversificada de células de mamíferos. É excecionalmente compatível com linhas celulares como HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrócitos e carcinomas.
O meio RPMI 1640 distingue-se de outros meios de cultura de células devido à sua composição única. Contém uma quantidade substancial de fosfato, aminoácidos e vitaminas. Nomeadamente, inclui biotina, vitamina B12 e PABA, ausentes no Eagle's Minimal Essential Medium ou no Dulbecco's Modified Eagle Medium. Além disso, o meio RPMI 1640 apresenta concentrações significativamente elevadas de vitaminas inositol e colina. No entanto, não contém proteínas, lípidos ou factores de crescimento. Consequentemente, a suplementação com 10% de Soro Fetal Bovino (FBS) é normalmente necessária para proporcionar condições óptimas para o crescimento celular.
O sistema tampão do meio RPMI 1640 baseia-se no bicarbonato de sódio e necessita de um ambiente com 5-10% de CO2 para manter um pH fisiologicamente adequado. A inclusão do agente redutor glutatião distingue ainda mais este meio dos outros.
Controlo de qualidade

Estéril-filtrado


Armazenamento e prazo de validade

Armazenar entre +2°C e +8°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a 4°C e utilizar no prazo de 6-8 semanas.


Condições de transporte

Temperatura ambiente


Manutenção

Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar a congelação e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.



Composição




Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)


Aminoácidos
Glicina
10.00



L-Alanil-L-Glutamina
434.40



L-Arginina
200.00



L-Asparagina H2O
56.82



Ácido L-aspártico
20.00



L-Cistina 2HCl
65.20



Ácido L-Glutâmico
20.00



L-Histidina HCl H2O
20.27



L-hidroxi-L-prolina
20.00



L-Isoleucina
50.00



L-Leucina
50.00



L-Lisina HCl
40.00



L-Metionina
15.00



L-fenilalanina
15.00



L-Prolina
20.00



L-Serina
30.00



L-Treonina
20.00



L-Triptofano
5.00



L-tirosina 2Na 2H2O
28.83



L-Valina
20.00


Vitaminas
ácido p-amino-benzoico
1.00



D-Biotina
0.20



Cloreto de colina
3.00



D-pantotenato de cálcio
0.25



Ácido fólico
1.00



myo-Inositol
35.00



Nicotinamida
1.00



Piridoxina HCl
1.00



Riboflavina
0.20



Tiamina HCl
1.00



Vitamina B12
0.005


Sais inorgânicos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Outros componentes
D-Glucose
2000.00



L-Glutatião reduzido
1.00



Sal de sódio de vermelho de fenol
5.30

Solução de desprendimento celular Accutase com EDTA e vermelho de fenol – 100 ml

Accutase é uma solução de desprendimento celular pronta a usar e filtrada esterilizada, concebida como uma alternativa suave à tripsina/EDTA para a dissociação de células de mamíferos aderentes de material plástico padrão para cultura de tecidos e superfícies revestidas para adesão. Combina atividade enzimática proteolítica e colagenolítica numa solução salina equilibrada para proporcionar uma dissociação eficaz, mas controlada, preservando as proteínas da superfície celular e favorecendo uma elevada viabilidade pós-passagem e uma rápida readesão.

A formulação do Accutase baseia-se na solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS) com EDTA e vermelho de fenol como indicador visual de pH. As enzimas são de origem não mamífera e não bacteriana, tornando o Accutase particularmente adequado para a investigação com células estaminais, fluxos de trabalho de vacinas e qualquer aplicação em que seja necessário minimizar os contaminantes de origem animal ou microbiana. A solução autoinibe-se a 37 °C, pelo que não é necessário qualquer reagente neutralizante ou meio contendo soro após a dissociação – as células podem ser transferidas diretamente para um meio fresco.

Características principais

Líquido 1x pronto a usar e filtrado esterilizado – não requer diluição nem reconstituição
Atividade enzimática proteolítica e colagenolítica combinada para uma dissociação suave
Cada lote padronizado para uma atividade de dissociação definida, garantindo a consistência entre lotes
Enzimas de origem não mamífera e não bacteriana
Autoinibe-se a 37 °C – não é necessária solução neutralizante
Formulado em PBS de Dulbecco com EDTA
Fenol vermelho incluído como indicador visual de pH
pH 6,8 – 7,8


Aplicações típicas
O Accutase dissocia suavemente uma ampla variedade de tipos de células aderentes e sensíveis, incluindo células estaminais embrionárias humanas (hESCs), células estaminais pluripotentes induzidas humanas (iPSCs), células estaminais neurais, neurónios primários e linhas aderentes cultivadas rotineiramente, tais como HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 e A549. Casos de utilização típicos incluem:

Subcultura e passagem de rotina de células mamíferas aderentes
Dissociação suave de células individuais de hESCs, iPSCs e outras linhas sensíveis
Preparação de amostras para citometria de fluxo e análise FACS
Análise de marcadores da superfície celular em que a integridade do epítopo é importante
Ensaios de migração, proliferação e apoptose celular
Ensaios de quiescência por privação de soro e estudos de transfecção de oncogenes
Ensaios de migração de células tumorais e de crista neural
Aumento da escala de produção em fluxos de trabalho com biorreatores

Para trabalhos de rotina, aplique aproximadamente 10 ml de Accutase por 75 cm² de superfície de cultura e incube durante 5–10 minutos à temperatura ambiente. O tempo de incubação ideal deve ser determinado para cada linha celular e não deve exceder uma hora. Antes da adição, lave a camada celular com uma solução salina isenta de Ca²⁺/Mg²⁺, como DPBS sem cálcio e magnésio, para remover soro residual e catiões divalentes.

Manuseamento e armazenamento
Armazene o frasco fechado congelado a -15 °C ou abaixo. Descongele à temperatura ambiente ou durante a noite a +2 °C a +8 °C. Não descongele o Accutase num banho-maria a 37 °C, uma vez que as temperaturas elevadas reduzem a atividade enzimática. Após a descongelação, a solução pode ser armazenada por um período de até 2 meses a +2 °C a +8 °C; não armazene à temperatura ambiente. Não pré-aqueça o reagente a 37 °C antes da aplicação – adicione-o diretamente às células lavadas à temperatura ambiente. Para uma vida útil prolongada, recomenda-se a divisão em alíquotas de uso único para evitar ciclos de descongelação repetidos. Trabalhe sempre em condições assépticas.

Qualidade
Fabricado sob rigorosos padrões de qualidade. Cada lote de Accutase é filtrado em estéril e testado quanto à esterilidade, pH, aspeto e atividade de dissociação para garantir um desempenho consistente e reprodutível de lote para lote.

Especificações do produto



Especificação
Detalhe



Tipo de produtoReagente de desprendimento/dissociação celular
FormatoLíquido filtrado esterilizado, pronto a usar
Volume100 ml
Concentração de trabalho1x (pronto a usar)
Atividade enzimáticaProteolítica e colagenolítica combinadas
Origem enzimáticaNão mamífera e não bacteriana
Sistema tampãoPBS de Dulbecco com EDTA
Indicador de pHVermelho de fenol
Intervalo de pH6,8 – 7,8
AspectoSolução límpida, de cor vermelho-pálido a laranja
Temperatura de armazenamento-15 °C ou inferior
Estabilidade após descongelaçãoAté 2 meses a +2 °C a +8 °C
Volume de utilização recomendado~10 ml por 75 cm² de superfície de cultura
Tempo de incubação típico5 – 10 minutos à temperatura ambiente
Condições de envioCongelado em gelo seco
Utilização previstaApenas para uso em investigação e fabrico posterior



Formulação (Composição por litro)



Componente
Concentração (mg/L)




Sais inorgânicos

Cloreto de sódio (NaCl)8000,00
Hidrogenofosfato dissódico (Na₂HPO₄)1150,00
Cloreto de potássio (KCl)200,00
Dihidrogenofosfato de potássio (KH₂PO₄)200,00

Outros componentes

EDTA · 4Na (EDTA tetrassódico)220,00
Vermelho de fenol3,00
Mistura enzimática patenteada (atividade proteolítica e colagenolítica)1x



Accutase é uma marca registada da Innovative Cell Technologies, Inc.

Visão geral do produto
Volume: 100 ml Armazenamento: ≤-15°C Esterilidade: Estéril-filtrado
A Solução Antibiótica/Antimicótica (100x) é um concentrado estéril, pronto a usar, concebido para reduzir os riscos de contaminação microbiana em culturas celulares e aplicações laboratoriais relacionadas. Esta solução 100x contém uma combinação bem estabelecida de penicilina, estreptomicina e anfotericina B, proporcionando uma atividade antimicrobiana de largo espetro contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras e fungos filamentosos. A formulação é adequada para utilização em culturas de células eucarióticas, meios bacterianos e outros sistemas sensíveis à contaminação, apoiando operações laboratoriais limpas e consistentes.
Aplicação e benefícios Optimizada para protocolos de investigação de rotina, esta solução é amplamente utilizada para manter condições assépticas em fluxos de trabalho de cultura de células. Oferece um desempenho fiável em ambientes sensíveis à contaminação, ajudando os investigadores a reduzir o risco de crescimento microbiano excessivo sem comprometer a saúde das células ou a reprodutibilidade experimental. A formulação estéril-filtrada elimina a necessidade de etapas adicionais de solubilização, apoiando a preparação simplificada de meios e reduzindo a variabilidade nos procedimentos laboratoriais diários.
Utilização e compatibilidade Para obter concentrações de trabalho padrão, diluir a solução 1:100 no seu meio de cultura completo. O produto é compatível com uma vasta gama de linhas celulares de mamíferos e meios basais. Com uma disponibilidade de stock consistente, os investigadores beneficiam de uma continuidade de fornecimento fiável e de um planeamento logístico simplificado. A solução deve ser armazenada a ≤ -15 °C e protegida de ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a estabilidade. Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.

Solução salina tamponada com fosfato (PBS)
A solução salina tamponada com fosfato (PBS) é uma solução tampão amplamente utilizada na investigação biológica e química. Desempenha um papel crucial na manutenção do equilíbrio do pH e da osmolaridade durante vários procedimentos experimentais, incluindo o processamento de tecidos e a cultura de células. A nossa solução PBS é meticulosamente formulada com ingredientes de elevada pureza para garantir estabilidade e fiabilidade em todas as experiências. A osmolaridade e as concentrações de iões do nosso PBS imitam de perto as do corpo humano, tornando-o isotónico e não tóxico para a maioria das células.

Composição da nossa solução PBS
A nossa solução PBS é uma mistura com pH ajustado de tampões de fosfato de grau ultrapuro e soluções salinas. Numa concentração de trabalho 1X, contém

8000 mg/L de cloreto de sódio (NaCl)
200 mg/L de cloreto de potássio (KCl)
1150 mg/L Fosfato de sódio dibásico anidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato de potássio monobásico anidro (KH2PO4)

Esta composição assegura um pH e um equilíbrio iónico óptimos, adequados a uma vasta gama de aplicações biológicas.

Aplicações da nossa solução PBS
A nossa solução PBS é ideal para várias aplicações na investigação biológica. As suas propriedades isotónicas e não tóxicas tornam-na adequada para a diluição de substâncias e lavagem de recipientes de células. As soluções PBS que contêm EDTA são eficazes para desprender células ligadas e aglomeradas. No entanto, os metais divalentes, como o zinco, não devem ser adicionados ao PBS, uma vez que podem causar precipitação. Nestes casos, recomenda-se a utilização de tampões Good's. Além disso, a nossa solução de PBS é uma alternativa aceitável ao meio de transporte viral para o transporte e armazenamento de vírus de ARN, incluindo o SARS-CoV-2.

Controlo de qualidade

Estéril-filtrado


Armazenamento e prazo de validade

Armazenar entre +2°C e +25°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a uma temperatura entre 2°C e 25°C e utilizar no prazo de 24 meses.


Condições de transporte

Temperatura ambiente


Manutenção

Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar o congelamento e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.

Composição



Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)


Sais
Cloreto de potássio
200



Fosfato de potássio monobásico anidro
200



Cloreto de sódio
8000



Fosfato de sódio dibásico anidro
1150