Komórki HaCaT
Najważniejsze fakty dotyczące komórek Hacat
| Opis | Komórki HaCaT są kluczowym modelem w badaniach dermatologicznych, oferując wgląd w złożone mechanizmy biologii i patologii skóry. Spontanicznie unieśmiertelniona linia komórek HaCaT pochodzi z dorosłych ludzkich komórek naskórka i zachowuje zdolność do proliferacji i różnicowania, podobnie jak podstawowe keratynocyty in vivo. Komórki HaCaT służą jako solidna platforma do badania procesu różnicowania naskórka i badania markerów różnicowania naskórka niezbędnych do utrzymania integralności skóry. Podatność komórek HaCaT na apoptozę i ich wrażliwość na czynniki indukujące apoptozę są szeroko badane, szczególnie w kontekście czynników cytotoksycznych, takich jak RIPL. Badacze oceniają cytotoksyczność tych środków i zakres cytotoksyczności przy użyciu komórek HaCaT, wykorzystując techniki takie jak mikroskopia fluorescencyjna do wizualizacji zmian komórkowych. Naukowcy wykorzystali komórki HaCaT do zbadania wpływu różnych czynników, w tym substratów przeciwdrobnoustrojowych i ich wpływu na żywotność komórek. Komórki te są doskonałym podłożem do testowania przeciwdrobnoustrojowych biomateriałów i przeciwdrobnoustrojowych podłoży atelokolagenowych, kluczowych dla naprawy skóry i zastosowań medycznych. Linia naskórkowa HaCaT odgrywa również kluczową rolę w badaniu starzenia się komórek, cytokin i profili ekspresji genów związanych ze starzeniem się i chorobami przewlekłymi. Profile transkrypcyjne komórek HaCaT, w tym rola κB i mikroRNA, zapewniają wgląd w mechanizmy regulacyjne na poziomie molekularnym. Linia keratynocytów HaCaT, z ich charakterystyką jako keratynocytów naskórka, oferuje podatny system do badania skomplikowanej interakcji między komórkami naskórka a układem odpornościowym, w szczególności roli keratynocytów w stanach chorobowych. Umożliwiają one badanie modyfikacji epigenetycznych i ich wpływu na różnicowanie keratynocytów, w tym tworzenie zrogowaciałej otoczki, kluczowej cechy funkcji barierowej skóry. Podsumowując, komórki HaCaT są niezbędnym modelem w badaniach dermatologicznych, ułatwiającym głębsze zrozumienie biologii i patologii skóry poprzez ich podobieństwo do keratynocytów podstawnych oraz ich zdolność do wzrostu i różnicowania komórek. Ich zastosowanie rozciąga się od badania różnicowania naskórka i działania przeciwdrobnoustrojowego do badania odpowiedzi komórkowych, takich jak apoptoza, co czyni je kamieniem węgielnym w biologii komórki i badaniach biomedycznych. |
|---|---|
| Organizm | Człowiek |
| Tkanka | Skóra |
Szczegóły
| Wiek | 62 lata |
|---|---|
| Płeć | Mężczyzna |
| Pochodzenie etniczne | Kaukaski |
| Typ komórki | Keratynocyty o średnicy 20-25 mikrometrów. |
| Właściwości wzrostu | Adherent |
Dokumentacja
| Cytat | HaCaT (numer katalogowy Cytion 300493) |
|---|---|
| Poziom bezpieczeństwa biologicznego | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_0038 |
| Deponent | DKFZ, Heidelberg |
Genetyka linii komórkowej keratynocytów HaCaT
| Tumorogenne | Nie |
|---|---|
| Kariotyp | Aneuploidalny (hipotetraploidalny) |
Obsługa linii komórkowej Hacat
| Podłoże hodowlane | DMEM, w: 4,5 g/l glukozy, w: 4 mM L-glutaminy, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pirogronianu sodu (numer artykułu Cytion 820300a) |
|---|---|
| Suplementy | Uzupełnić podłoże 10% FBS |
| Odczynnik dysocjacyjny | Mieszanina 1:1 EDTA (zapas: 0,05%) i trypsyny (zapas: 0,1%) musi być przygotowana za każdym razem przed odłączeniem komórek przy użyciu PBS bez Ca2+ i Mg2+, aby zapewnić fizjologiczną osmolarność. Gotowe do użycia mieszaniny trypsyny/EDTA nie są zalecane, ponieważ mogą powodować zbrylanie się komórek. Alternatywnie można użyć TrypLE Express (Life Technologies) zamiast trypsyny/EDTA. Należy postępować zgodnie z protokołem producenta. |
| Czas podwojenia | Czas podwojenia komórek HaCaT wynosi 28 godzin. |
| Subkultury |
|
| Współczynnik podziału | Zalecany jest stosunek 1:5 do 1:10 |
| Gęstość siewu | 1 x 104 komórek/cm2 |
| Odnawianie płynów | 2 razy w tygodniu |
| Środek zamrażający | Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją. |
| Rozmrażanie i hodowla komórek |
|
| Atmosfera inkubacji | 37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera. |
| Powłoka kolby | W celu zapewnienia optymalnego przylegania i żywotności po rozmrożeniu zalecamy stosowanie kolb lub płytek pokrytych kolagenem. |
| Procedura zamrażania | Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania. |
| Warunki wysyłki | Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania. |
| Warunki przechowywania | W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu. |
Zapewnienie jakości
| Sterylność | Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji. Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym. |
|---|---|
| Profil STR |
Amelogenina: x,x
CSF1PO: 9,11
D13S317: 10,12
D16S539: 9,12
D5S818: 12
D7S820: 9,11
TH01: 9.3
TPOX: 11,12
vWA: 16,17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
D1S1656: 11,12
D2S1338: 17,25
D12S391: 18,23
D19S433: 13,14
|
| Allele HLA |
A*: '31:01:02
B*: '40:01:02, '51:01:01
C*: '03:04:01, '15:02:01
DRB1*: '04:01:01, '15:01:01
DQA1*: '01:02:01, '03:03:01
DQB1*: '03:01:01, '06:02:01
DPB1*: '03:01:01, '04:01:01
E: '01:03:01, '01:03:02
|
Certyfikat analizy (CoA)
| Numer działki | Typ certyfikatu | Data | Numer katalogowy |
|---|---|---|---|
| 300493-250324 | Certyfikat analizy | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190723 | Certyfikat analizy | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190124 | Certyfikat analizy | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225SF | Certyfikat analizy | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225 | Certyfikat analizy | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-040424 | Certyfikat analizy | 23. May. 2025 | 300493 |