Sf9-cellen
Algemene informatie
Beschrijving | Sf9-cellen zijn klonale isolaten afgeleid van de Spodoptera frugiperda Sf21-cellijn (IPLB-Sf-21-AE). Ze worden vaak gebruikt in insectencelculturen voor de productie van recombinante eiwitten met behulp van baculovirusexpressiesystemen. Sf9-cellen hebben een epitheliale morfologie en werden gekloond uit het eierstokweefsel van de vallende legerworm. Een van de belangrijkste eigenschappen van Sf9-cellen is hun kleine, regelmatige formaat dat ideaal is voor de vorming van monolagen en plaques. Ze zijn ook geschikt voor transfectie, plaque-assay/purificatie, amplificatie van hoge-titervoorraden en expressie van recombinante eiwitten. De Sf9 insectencellijn kan worden onderhouden in vastgehechte en gesuspendeerde culturen en heeft geen serum of CO2 nodig om te groeien. Ze worden beschouwd als Biosafety Level 1 en worden gewoonlijk gekweekt in een incubator van 26-28 graden Celsius. Sf9 cellen/baculovirus expressiesystemen worden veel gebruikt voor eiwitexpressie op hoog niveau, vaak voor zuivering, maar eiwitten kunnen ook functioneel tot expressie worden gebracht in de gedefinieerde Sf9 celomgeving. De grootte van geïnfecteerde Sf9 cellen is over het algemeen 17-30 micron in diameter. De Sf9-cellijn onderscheidt zich van de Sf21-cellijn doordat het een klonaal isolaat is met een kleinere en meer regelmatige grootte, terwijl Sf21-cellen een meer ongelijkmatige grootte hebben en monolagen en plaques vormen die onregelmatiger zijn. Sommige Sf9 cellijnen kunnen drager zijn van een negatief zintuiglijk Rhabdovirus genaamd Spodoptera frugiperda rhabdovirus (SfRV), hoewel niet alle geteste Sf9 cellen geïnfecteerd lijken te zijn met dit virus. Het genoom van Sf9 wordt geschat op 451 Mbp met een G+C-gehalte van 36,53%. |
---|---|
Organisme | Najaarslegerworm |
Weefsel | Eierstok |
Toepassingen | Transfectie, plaque-assay/purificatie, amplificatie van hoge-titervoorraden en expressie van recombinante eiwitten |
Synoniemen | SF9, sf9, SF-9, Sf-9, sf-9, Sf 9, Spodoptera frugiperda kloon 9, Sf kloon 9, IPLB-Sf-9AE, IPLB-SF-9AE, IPLB-SF-9, IPLB-Sf-9, IPLB-Sf9 |
Kenmerken
Leeftijd | Pupstadium |
---|---|
Geslacht | Vrouw |
Morfologie | Rond, vastgehecht, epitheloïd |
Groei eigenschappen | Monolaag, adherent |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | Sf9 (Cytion catalogusnummer 604328) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Virusgevoeligheid | Baculovirussen, Autographa californica (MNPV), St. Louis encefalitis (SLE) |
---|
Omgaan met
Kweekmedium | Spodopan (PAN Biotech) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium zo nodig aan met 2% FBS om de proliferatie te bevorderen |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Het losmaken van cellen met een celschraper wordt aanbevolen. Verzamel het medium met losgemaakte cellen na het schrapen in een centrifugebuis van 15 ml. Voeg ongeveer 5 ml medium toe aan de kolf en spoel de kolf meerdere keren om eventuele resterende cellen te verzamelen en te combineren met de rest van de cellen in de buis. Centrifugeer 3 minuten bij 300xg, verwijder het supernatant, resuspendeer de cellen in vers, koud medium en breng over in nieuwe kolven. |
Splitsingsverhouding | Voor de eerste twee subcultivaties wordt een verhouding van 1:3 tot 1:5 aanbevolen. In verdere subcultiveringen kunnen de cellen worden gesplitst in een verhouding van 1:10 tot 1:20 |
Dichtheid zaaien | 1 x 10^4 cellen/cm^2. Incubeer tussen 26 en 30 graden Celsius in een niet-bevochtigde incubator met omgevingslucht. Gebruik celkweekflessen met filterdoppen of maak de doppen los om zuurstofuitwisseling mogelijk te maken. |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
|
Required products
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij -130°C in een mechanische diepvriezer. Het vriesmedium CM-ACF maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en tijdrovende en veeleisende vriesprocessen met gecontroleerde snelheid niet meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium af, resuspendeer in CM-ACF, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-ACF is een serumvrij, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde, serumvrije celvriesmedium CM-ACF is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talloze publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde serumvrije ingrediënten
CM-ACF bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums hebben het nadeel van fluctuerende recovery rates en een onduidelijke samenstelling. Aangezien de samenstelling en concentratie van eiwitten en andere biologische componenten in serum varieert van batch tot batch, kan de reproduceerbaarheid van experimenten met cellen die werden ingevroren in een serumbevattend medium in het gedrang komen. Aangezien elk bestanddeel van CM-ACF zorgvuldig gedefinieerd is, kun je er zeker van zijn dat cellen altijd op identieke wijze herstellen.
Bevat DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Universeel
- zelfs voor stamcelpreservatie
Alle gangbare cellijnen kunnen worden ingevroren en ontdooid om veel levensvatbare cellen op te leveren. Vergeleken met standaardmedia is de mate van herstel van zelfs de meest kwetsbare cellen aanzienlijk hoger. Met CM-ACF bewaren we meer dan 1000 verschillende cellijnen met uitstekend succes.
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-ACF vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00