PK-15 Cellen
Verkenning van de interactie tussen het varkenspestvirus en PK-15 cellen
Beschrijving | De PK(15) cellijn, afgeleid van PK-2A, een cellijn verkregen uit de nier van een volwassen varken in 1955, is geïnfecteerd met het varkens type-C oncovirus, ook bekend als het porcine endogene retrovirus (PERV). Het genoom van de gastheercel bevat 62 kopieën van het pol-gen, dat codeert voor reverse transcriptase en andere eiwitten. Aanvankelijk bleken de virusdeeltjes geproduceerd door PK(15) defect en niet in staat om verschillende zoogdiercellijnen te infecteren, waaronder een menselijke cellijn. Latere studies toonden echter aan dat menselijke 293 cellen productief geïnfecteerd konden worden door het celvrije supernatant van PK(15)-cellen. Polymerasekettingreactie (PCR) analyses toonden aan dat de overgedragen virussen behoorden tot de polytropische subtypes PERV-A en PERV-B. Verder werd waargenomen dat de virusdeeltjes geproduceerd door de 293 cellen resistent waren tegen inactivatie door het menselijke complementsysteem. Naast zijn virologische betekenis, dient de PK(15) cellijn ook specifieke toepassingen als een geschikte transfectiegastheer. Met zijn adherente groei-eigenschappen is de PK(15)-cellijn waardevol in verschillende onderzoeks- en experimentele omgevingen. |
---|---|
Organisme | Varken |
Weefsel | Nieren |
Synoniemen | PK(15), PK (15), PK 15, PK15, Porcine Kidney-15 |
Details van de varkenscircoviruscellen PK-15
Leeftijd | Volwassen |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Morfologie | Epitheelachtig |
Groei eigenschappen | Monolaag, adherent |
Documentatie
Citeren | PK-15 (Cytion catalogusnummer 607426) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 2 |
Genoomprofiel van de PK15-cellijn
Virussen | PCV1 (Porcine circovirus 1) positief, PCV2 negatief, PCV3 negatief |
---|---|
Virusgevoeligheid | Varkenscholera, Afrikaanse varkenspest, vesiculair exantheem bij varkens, mond- en klauwzeer (MKZ), vesiculaire stomatitis (Indiana), vaccinia, reovirus 2, 3, adenovirus 4, 5, coxsackievirus B2, B3, B4, B5, B6 |
Virusresistentie | Poliovirus 2 |
Omgekeerde transcriptase | Positief |
Omgaan met
Kweekmedium | EMEM, w: 2 mM L-Glutamine, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: EBSS, w: 1 mM natriumpyruvaat, w: NEAA (Cytion artikelnummer 820100c) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:2 tot 1:4 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 2 x 10^4 cellen/cm^2 |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Herstel door bevriezing | Laat de cellen minstens 24 tot 48 uur bijkomen van het vriesproces. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
|
Benodigde producten
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
Dit EMEM-medium bestaat uit 2 mM L-glutamine, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM natriumpyruvaat en NEAA.
Wat zit er in EMEM?
EMEM is een aangepaste versie van Eagle's minimaal essentiële medium en bevat Earle's Balanced Salt Solution, niet-essentiële aminozuren, L-glutamine, natriumpyruvaat en natriumbicarbonaat. Het is belangrijk om te weten dat dit verlaagde gehalte aan natriumbicarbonaat (NaHCO3, 1,5 g/L) bedoeld is voor gebruik bij 5% CO2 in de lucht. Om de effectiviteit te behouden, wordt aanbevolen om het medium in het donker te bewaren bij 2 °C tot 8 °C als het niet wordt gebruikt.
Waar wordt EMEM voor gebruikt?
Eagle's minimaal essentieel medium (EMEM) is een celkweekmedium dat cellen in weefselkweek kan onderhouden. Het medium bevat hogere concentraties aminozuren, waardoor de eiwitsamenstelling van gekweekte zoogdiercellen nauwkeuriger kan worden benaderd. EMEM kan worden gebruikt om verschillende cellen te kweken, waaronder fibroblasten, menselijke leverkankercellijn (HepG2) cellen en menselijke foetale hersenprogenitor-afgeleide astrocytcellen (PDA). Het wordt meestal gebruikt in aanwezigheid van foetaal runderserum (FBS), kalfs
- of paardensera.
Waarin verschilt EMEM van andere celkweekmedia?
Hoewel EMEM en Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) enkele overeenkomsten hebben, verschillen ze ook. Beide media hebben geen eiwitten en bevatten de aminozuren, zouten, glucose en vitaminen die nodig zijn om een cel van energie te voorzien en in stand te houden in de weefselkweek. De DMEM-formulering is echter aangepast om tot vier keer meer vitaminen en aminozuren en twee tot vier keer meer glucose te bevatten dan EMEM. Het is vermeldenswaard dat EMEM ook verschilt van de originele MEM formulering.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
264,92
Magnesiumsulfaat
97,67
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
6,800.00
Natriumdiwaterstoffosfaat x H2O
140,00
Andere componenten
D(+)-Glucose
1,000.00
Fenol rood
10,00
Natriumpyruvaat
110,00
NaHCO3
1,500.00
Aminozuren
L-Alanine
8,90
L-Arginine x HCl
126,00
L-Asparagine x H2O
13,20
L-Asparaginezuur
13,30
L-Cystine
24,00
L-Glutamine
292,30
L-Glutaminezuur
14,70
Glycine
7,50
L-Histidine x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucine
52,00
L-Leucine
52,00
L-Lysine x HCl
72,50
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
32,00
L-Proline
11,50
L-Serine
10,50
L-Threonine
48,00
L-Tryptofaan
10,00
L-Tyrosine
36,00
L-Valine
46,00
Vitaminen
D-Calcium pantothenaat
1,00
Choline chloride
1,00
Foliumzuur
1,00
myo-Inositol
2,00
Nicotinamide
1,00
Pyridoxal x HCl
1,00
Riboflavine
0,10
Thiamine x HCl
1,00
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00