KATO-III Cellen
Algemene informatie
Organisme | Mens |
---|---|
Weefsel | Maag |
Ziekte | Adenocarcinoom |
Uitgezaaide plaats | Pleurale effusie |
Synoniemen | Kato III, Kato-III, KATO III, KATOIII, KatoIII, KATO 3, JTC-28, Japanse Weefselkweek-28 |
Kenmerken
Leeftijd | 57 jaar |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Aziatisch |
Morfologie | Sferisch |
Groei eigenschappen | Hechting/suspensie |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | KATO-III (Cytion catalogusnummer 300381) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Eiwitexpressie | p53 negatief, CEA positief |
---|---|
Antigeenexpressie | Bloedgroep B, Rh+ |
Isoenzymen | PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 2, G6PD, B, Fenotype Frequentie Product: 0.0742 |
Tumorigeen | Ja, in wangzakken van met antithymocytenserum behandelde hamsters, niet tumorigeen in naakte muizen |
Karyotype | Het aantal stamlijnchromosomen is hypotetraploïd met een 2S-component van 6,2%. Negen markers kwamen voor in de meeste S-metafasen, vier markers kwamen minder vaak voor. Eén (soms 2 kopieën) homogene kleuring regio (HSR) (t(11,HSR) was aanwezig in alle onderzochte metafasen, maar er werden geen dubbele minuten (DM) gedetecteerd (Sekiguchi 1978). |
Omgaan met
Kweekmedium | Ham's F12, w: 1,0 mM stabiele Glutamine, w: 1,0 mM natriumpyruvaat, w: 1,1 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820600a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Verdubbelingstijd | 36 uur |
Subcultuur | Verzamel de suspensiecellen in een buis van 15 ml en was de aanhangende cellen voorzichtig met PBS zonder calcium en magnesium (gebruik 3-5 ml voor T25-flesjes en 5-10 ml voor T75-flesjes). Breng Accutase aan (1-2 ml voor T25-flesjes, 2,5 ml voor T75-flesjes) en zorg dat de cellaag volledig bedekt wordt. Laat de cellen 10 minuten bij kamertemperatuur incuberen. Na de incubatie zowel de suspensie als de aanhangende cellen combineren en centrifugeren. Na het centrifugeren de celpellet voorzichtig resuspenderen en de celsuspensie overbrengen in nieuwe kolven met vers medium. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:2 tot 1:8 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 2 x 10^4 cellen/cm ^ 2 zal resulteren in een confluente monolaag binnen 2 tot 3 dagen. |
Vloeistofvernieuwing | Om de 3 tot 5 dagen |
Herstel door bevriezing | Plaats de cellen na het ontdooien bij 5 x 10 ^ 4 cellen/cm ^ 2 en laat de cellen herstellen van het vriesproces en zich minstens 24 uur hechten. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 7,11
D13S317: 8,12
D16S539: 10,12
D5S818: 10,11
D7S820: 8,12
TH01: 7,9
TPOX: 11
vWA: 14,16
D3S1358: 15,16
D21S11: 30,31
D18S51: 12
Penta E: 13,18,19
Penta D: 13,14
D8S1179: 13,14
FGA: 23,24
|
HLA-allelen |
A*: 02:01:01, 02:07:01
B*: 15:01:01, 46:01:01
C*: 01:02:01, 03:03:01
DRB1*: 08:03:02, 15:01:01G
DQA1*: 01:02:01, 01:03:01
DQB1*: 06:01:01, 06:02:01
DPB1*: 02:01:02, 02:02:01
E: 01:03:02
|
Benodigde producten
Een van de opmerkelijke voordelen is de mogelijkheid om de celgroei te ondersteunen zonder dat er serumsupplementen nodig zijn. Dit elimineert mogelijke interferentie veroorzaakt door serumcomponenten, waardoor consistente en betrouwbare experimentele resultaten worden gegarandeerd. Door een serumvrije kweekomgeving te bieden, biedt Ham's F-12 medium onderzoekers meer controle over hun onderzoeken.
Een andere belangrijke eigenschap van Ham's F-12 medium is de geschiktheid voor single-cell plating. Dit maakt het een uitstekende keuze voor een verscheidenheid aan cellijnen, waaronder CHO-cellen, longcellen en muis L-cellen. De geoptimaliseerde samenstelling van het medium vergemakkelijkt efficiënte aanhechting en groei van individuele cellen, waardoor homogene celculturen met verbeterde reproduceerbaarheid kunnen worden opgezet.
Bovendien is Ham's F-12 medium erkend als het medium bij uitstek voor de Clonal Toxicity Assay (CTA). Deze test speelt een cruciale rol bij het beoordelen van de cytotoxische effecten van stoffen op cellen. Door Ham's F-12 medium te gebruiken in de CTA kunnen onderzoekers nauwkeurig het effect van verschillende verbindingen of behandelingen op individuele cellen evalueren, wat waardevolle inzichten oplevert in toxicologische profielen.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium behalve het basismedium is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
44,00
Koper(II)sulfaat x 5H2O
0,00
IJzer(II)sulfaat x 7H2O
0,83
Magnesiumchloride x 6H2O
122,00
Kaliumchloride
223,65
Natriumchloride
7599,00
dinatriumwaterstoffosfaatwatervrij
142,04
Zinksulfaat x 7H2O
0,86
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
1801,60
Hypoxanthine
4,08
Linolzuur
0,08
DL-α liponzuur
0,21
Fenol rood
1,20
Putrescine x 2HCl
0,16
Natriumpyruvaat
110,00
Thymidine
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminozuren
L-Alanine
8,91
L-Arginine x HCl
210,70
L-Asparagine x H2O
15,01
L-Asparaginezuur
13,31
L-Cysteïne x HCl x H2O
35,12
L-Alanyl-L-Glutamine
217,30
L-Glutaminezuur
14,71
Glycine
7,51
L-Histidine x HCl x H2O
20,96
L-Isoleucine
3,94
L-Leucine
13,12
L-Lysine x HCl
36,54
L-Methionine
4,48
L-Fenylalanine
4,96
L-proline
34,53
L-Serine
10,51
L-Threonine
11,91
L-Tryptofaan
2,04
L-Tyrosine
5,44
L-Valine
11,71
Vitaminen
D(+)-Biotine
0,01
D-Calcium pantothenaat
0,24
Choline chloride
13,96
Foliumzuur
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamide
0,04
Pyridoxine x HCl
0,06
Riboflavine
0,04
Thiamine x HCl
0,34
Vitamine B12
1,36
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00