HuH-6-cellen
Algemene informatie
Beschrijving | HuH-6 cellen, kort voor Human Hepatoma 6 cellen, zijn een permanente cellijn die werd gecreëerd uit hepatoomweefsel dat in 1982 werd verkregen van een 57-jarige Japanse man. Deze cellen zijn een waardevol hulpmiddel geworden in biologisch onderzoek en vormen een handige vervanging voor primaire hepatocyten. De primaire toepassing van HuH-6 cellen ligt in het bestuderen van hepatitis C virus (HCV) infectie en hepatomen. Onderzoekers gebruiken deze cellen vaak als celkweekmodel om de mechanismen van HCV-infectie te onderzoeken en mogelijke behandelingen voor hepatomen te verkennen. Een cruciaal onderzoeksgebied waarbij HuH-6 cellen betrokken zijn, is het begrijpen van het metabolisme en de farmacokinetiek van geneesmiddelen. Deze cellen worden vaak gebruikt om het potentieel voor geneesmiddel-drug interacties (DDI's) te beoordelen door het analyseren van de genexpressie van verschillende CYP450 enzymen. Regelgevende instanties vereisen een evaluatie van het DDI-potentieel in hepatocyten voor specifieke enzymen zoals CYP3A4, CYP1A2 en CYP2B6. HuH-6 cellen, bekend als Cryopreserved Human Hepatocytes, Induction qualified (HUCPI), zijn gekarakteriseerd om enzyminductieniveaus te vertonen die door de FDA worden aanbevolen voor het evalueren van DDI's. Een andere belangrijke toepassing van HuH-6 cellen is de studie van transporter-gemedieerde effluxremming. Door de hepatocyten uit te zetten op collageen en te bedekken met een keldermembraanextract kunnen gepolariseerde celoppervlakstructuren worden gevormd en kunnen galeffluxtransporters opnieuw tot expressie worden gebracht. Dit stelt onderzoekers in staat om de effecten van medicijnremming op gal efflux transport te onderzoeken, die kunnen variëren van medicijn-drug interacties tot levertoxiciteit veroorzaakt door de ophoping van intracellulaire galzuren. Hepatocyten die gekarakteriseerd zijn voor transporterfunctie zijn zeer geschikt voor deze studies. Daarnaast spelen HuH-6 cellen een cruciale rol in de farmaceutische ontdekking van geneesmiddelen met een trager metabolisme. Door de fundamentele metabolische eigenschappen te meten van medicijnen die langzamer worden gemetaboliseerd, kunnen onderzoekers medicijnen ontwikkelen die langer werkzaam blijven. Geplateerde hepatocyten, zoals HuH-6 cellen, behouden hun metabolische activiteit gedurende een langere periode, waardoor ze ideaal zijn voor testen die vier uur of langer duren. Vooral hepatocyten die zijn geprekwalificeerd voor een lage klaring zijn waardevol voor deze onderzoeken, hoewel ook inductie- of transportergekwalificeerde hepatocyten (HUCPI) kunnen worden gebruikt. HuH-6 cellen zijn een waardevolle cellijn die is afgeleid van hepatoomweefsel. Ze worden vaak gebruikt in biologisch onderzoek om hepatitis C-virusinfectie, hepatomen, geneesmiddelmetabolisme en farmacokinetiek, geneesmiddel-drug interacties, transporter-gemedieerde effluxinhibitie en de ontdekking van geneesmiddelen met een trager metabolisme te bestuderen. Deze cellen bieden onderzoekers een handig en betrouwbaar model om verschillende aspecten van levergerelateerde biologie en medicijnontwikkeling te onderzoeken. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Lever |
Ziekte | Hepatoblastoom |
Synoniemen | HUH-6, HuH 6, HuH6, HUH6, Huh6 |
Kenmerken
Leeftijd | 1 jaar |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Aziatisch |
Morfologie | Epitheel |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | HuH-6 (Cytion catalogusnummer 305092) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Omgaan met
Kweekmedium | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | 1:2 tot 1:4 |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,y
CSF1PO: 10,12
D13S317: 8,12
D16S539: 10,11
D5S818: 8,11
D7S820: 11,12
TH01: 7,8
TPOX: 8
vWA: 14,17
D3S1358: 14,17
D21S11: 29,30
D18S51: 13,21
Penta E: 11
Penta D: 9,13
D8S1179: 10,11
FGA: 19,24
D6S1043: 13,18
D2S1338: 18
D12S391: 18,20
D19S433: 12,12.2
|