HaCaT-ras A5-cellen
€ 800,00*
Prijzen excl. btw plus verzendkosten Deze cellijn is in licentie gegeven aan CLS door een universiteit of instituut. Voor de verkoop van dit artikel moet een Material Transfer Agreement (MTA) worden afgesloten. Neem contact met ons op voor meer informatie.
Algemene informatie
Beschrijving | HaCaT-ras A5-cellen zijn een spontaan geïmmortaliseerde, niet-tumorigene humane keratinocytencellijn, die een belangrijke rol speelt bij het bestuderen van interacties in de tumormicro-omgeving en de progressie van huidcarcinomen. Deze cellen zijn afkomstig van een 62-jarige Kaukasische man en hebben klonale selectie en mutagenese ondergaan, die in combinatie met autocriene groeifactorregulatie de vorming van langzaam groeiende, hooggedifferentieerde goedaardige cysteuze tumoren in Balb/c-nu/nu-muizen mogelijk maken. Dit maakt ze tot een waardevol model voor het onderzoeken van de cellulaire dynamiek en moleculaire mechanismen van tumorprogressie in vivo. De HaCaT-ras A5-cellen zijn vooral nuttig voor het ophelderen van de complexe interacties tussen tumorcellen en omliggende stromale cellen, waaronder fibroblasten, immuuncellen en endotheelcellen. Deze interacties worden gemedieerd door de afscheiding van verschillende signaalmoleculen zoals groeifactoren, cytokinen en proteasen, waarbij interleukine-6 (IL-6) een centrale rol speelt. Van IL-6 is bekend dat het ontreguleerd raakt in veel kankertypes, voornamelijk door overexpressie of aanhoudende activering van de STAT3 transcriptiefactor. Onderzoek heeft aangetoond dat IL-6 stimulatie van HaCaT-ras A5 cellen hun proliferatie aanzienlijk verhoogt via de JAK/STAT signaalroute, terwijl fibroblasten onaangetast blijven door een sterkere remming door SOCS3, een negatieve regulator van deze signaalroute. Deze differentiële respons is vastgelegd in een wiskundig model dat de dynamiek van STAT3 en SOCS3 beschrijft, waardoor een beter begrip ontstaat van celspecifieke signaalcascades. Verder heeft IL-6 niet alleen direct invloed op de proliferatie van HaCaT-ras A5 cellen, maar beïnvloedt het ook indirect de cellulaire omgeving via de activering van een netwerk van groeifactoren zoals HGF, KGF, VEGF en IL-8. Genexpressieanalyse met meer dan 16.000 genen toonde aan dat IL-6 stimulatie 19 genen upreguleert die gerelateerd zijn aan de interferonsignaalroute in zowel HaCaT-ras A5 cellen als fibroblasten, wat correleert met de waargenomen groeiremming in fibroblasten. De ontdekking van de cruciale rol van SerpinB4 in de proliferatie van HaCaT-ras A5 cellen, bevestigd door siRNA knockdown experimenten, onderstreept de ingewikkelde regulatie door IL-6 in zowel tumor- als stromale cellen. Dit uitgebreide inzicht in de rol van IL-6 vergroot het potentieel voor het ontwikkelen van gerichte therapeutische strategieën gericht op het moduleren van IL-6 signaalwegen in de tumormicro-omgeving. Over het geheel genomen bieden HaCaT-ras A5 cellen een robuust model voor het onderzoeken van de complexe interactie binnen de tumormicro-omgeving, wat de weg vrijmaakt voor nieuwe benaderingen in kankeronderzoek en therapieontwikkeling. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Huid |
Synoniemen | HaCaT-ras kloon A-5, HaCaT A-5, A-5, A5 |
Kenmerken
Leeftijd | 62 jaar |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Kaukasisch |
Celtype | Keratinocyt |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | HaCaT-ras A5 (Cytion catalogusnummer 300494) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Deposant | DKFZ, Heidelberg |
Expressie / Mutatie
Eiwitexpressie | P53 (+), CEA (+), |
---|---|
Tumorigeen | Vorming van goedaardige tumoren in Balb/c-nu/nu-muizen. |
Karyotype | Aneuploïd (hypotetraploïd) |
Omgaan met
Kweekmedium | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Het 1:1 mengsel van EDTA (voorraad: 0,05%) en trypsine (voorraad: 0,1%) moet telkens vóór het losmaken van de cellen worden bereid met PBS zonder Ca2+ en Mg2+ om een fysiologische osmolariteit te verkrijgen. Kant-en-klare mengsels van trypsine/EDTA worden niet aanbevolen, omdat dit kan leiden tot klontering van de cellen. Als alternatief kan TrypLETM Express (Life Technologies) in plaats van trypsine/EDTA worden gebruikt. Het protocol van de fabrikant moet worden gevolgd. |
Subcultuur | Gooi het oude medium weg en was de aanhangende cellen met PBS dat geen calcium en magnesium bevat, met 3-5 ml voor T25-flesjes en 5-10 ml voor T75-flesjes. Voeg een vers bereide 0,05% EDTA-oplossing toe en zorg voor volledige bedekking van de cellaag met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Incubeer gedurende 10 minuten bij 37 graden Celsius. Voeg vervolgens een vers bereide trypsine/EDTA-oplossing toe met een concentratie van respectievelijk 0,05% en 0,025%. Gebruik 1 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes en zorg dat de cellen volledig bedekt zijn. De cellen moeten binnen 1-2 minuten loskomen. Neutraliseer de trypsine door celkweekmedium met FBS toe te voegen. Breng ten slotte de celsuspensie over in nieuwe kolven gevuld met vers kweekmedium. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:5 tot 1:10 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 1 x 10^4 cellen/cm^2 |
Vloeistofvernieuwing | 2 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 9,11
D13S317: 10,12
D16S539: 9,12
D5S818: 12
D7S820: 9,11
TH01: 9.3
TPOX: 11,12
vWA: 16,17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
|
HLA-allelen |
A*: 31:01:02
B*: 40:01:02, 51:01:01
C*: 03:04:01, 15:02:01
DRB1*: 04:01:01, 15:01:01G
DQA1*: 01:02:01, 03:03:01
DQB1*: 03:01:01, 06:02:01
DPB1*: 03:01:01G, 04:01:01G
E: 01:03:01, 01:03:02
|
Required products
Wat DMEM onderscheidt van andere media is de unieke samenstelling. Het bevat een indrukwekkende verviervoudiging van de aminozuur
- en vitamineconcentratie in vergelijking met het originele Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM werd oorspronkelijk ontwikkeld met lage glucose (1 g/L) en natriumpyruvaat, maar wordt vaak gebruikt met hogere glucosewaarden, al dan niet met natriumpyruvaat. DMEM bevat met name geen eiwitten, lipiden of groeifactoren, waardoor aanvulling noodzakelijk is. Voor optimale groei wordt DMEM vaak aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS). Daarnaast maakt DMEM gebruik van een natriumbicarbonaat buffersysteem (3,7 g/L), waarbij een omgeving van 5-10% CO2 nodig is om een fysiologische pH te handhaven.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) staat hoog aangeschreven onder de gedefinieerde media voor cel
- en weefselkweek en voorziet in de groeibehoeften van verschillende aanhangende celfenotypen. Het overtreft het originele Eagle's Medium, ontwikkeld in de jaren 1950 voor het kweken van kippeneieren, door de verbeterde aanvullende formulering die bekend staat als Dulbecco's modificatie. Deze modificatie verhoogt het gehalte aan geselecteerde aminozuren en vitaminen aanzienlijk, tot wel vier keer in vergelijking met het oorspronkelijke medium.
Op het gebied van celkweek speelt DMEM een essentiële rol als groeimedium voor verschillende celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en getransformeerde cellen. Onderzoekers gebruiken de aangepaste versie van DMEM ook voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen, zoals het ontdekken van medicijnen, weefselmanipulatie en het bestuderen van celsignaalroutes.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium behalve het basismedium is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Watervrij calciumchloride
200,00
IJzer(III)nitraat x 9H2O
0,10
Watervrij magnesiumsulfaat
97,66
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
6.400,00
Natriumdiwaterstoffosfaatwatervrij
108,69
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
4.500,00
Natriumpyruvaat
110,00
Fenol rood
15,00
NaHCO3
1.500,00
Aminozuren
L-Arginine x HCl
84,00
L-Cystine x 2HCl
62,58
L-Glutamine
584,00
Glycine
30,00
L-Histidine x HCl xH2O
42,00
L-Isoleucine
104,80
L-Leucine
104,80
L-Lysine x HCl
146,20
L-Methionine
30,00
L-Fenylalanine
66,00
L-Serine
42,00
L-Threonine
95,20
L-Tryptofaan
16,00
L-Tyrosine x Na
103,79
L-Valine
93,60
Vitaminen
D-Calcium pantothenaat
4,00
Choline chloride
4,00
Foliumzuur
4,00
myo-Inositol
7,00
Nicotinamide
4,00
Pyridoxine x HCl
4,00
Riboflavine
0,40
Thiamine x HCl
4,00
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00