HaCaT-cellen

Cytion's Freeze Medium CM-1 is een ultramodern cryoconserveringsmedium dat is ontworpen om het hoogste niveau van levensvatbaarheid en functionaliteit van de cellen na ontdooiing te garanderen. Dit veelzijdige medium is geschikt voor een breed spectrum van celtypes, waaronder menselijke en dierlijke cellen, waardoor het een essentieel hulpmiddel is voor diverse onderzoekstoepassingen. Geformuleerd met een zorgvuldig uitgebalanceerde combinatie van cryoprotectanten en essentiële voedingsstoffen, minimaliseert Freeze Medium CM-1 de vorming van ijskristallen en cellulaire stress tijdens het vriesproces, waardoor de cellulaire integriteit behouden blijft.
De belangrijkste kenmerken van Freeze Medium CM-1 zijn:

Brede compatibiliteit: Effectief voor een breed scala aan celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en gevestigde cellijnen.
Hoge levensvatbaarheid: Geoptimaliseerd voor maximaal herstel en levensvatbaarheid van de cellen na ontdooiing, voor betrouwbare experimentele resultaten.
Gebruiksklaar: Gemakkelijk bereid en gesteriliseerd voor onmiddellijke toepassing, waardoor de voorbereidingstijd korter wordt en het risico op besmetting kleiner.
Verbeterde stabiliteit: Behoudt consistente prestaties onder standaard cryoconserveringsomstandigheden, waardoor reproduceerbare resultaten worden gegarandeerd.
Lange houdbaarheid: CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.


CM-1 gebruiken voor het invriezen van cellen

Volg deze stappen om CM-1 te gebruiken voor het invriezen van zowel adherente als suspensiecellen

Voor adherente cellen, wassen en losmaken van het kweeksubstraat. Voor suspensiecellen gaat u direct door naar de volgende stap.
Tel de cellen om er zeker van te zijn dat ze de juiste concentratie hebben.
Centrifugeer de cellen om ze te pelleteren en resuspendeer ze vervolgens in CM-1 diepvriesmedium.
Breng de geresuspendeerde cellen over in cryovaatjes.
Gebruik een methode voor langzaam invriezen voordat de cellen worden overgebracht naar langdurige opslag





Methode
Beschrijving
Stappen





❄️
Handmatig invriezen

Een stapsgewijze methode waarbij de temperatuur geleidelijk wordt verlaagd om de levensvatbaarheid van de cellen te garanderen

1️⃣ Plaats cellen in vriesmedium in een vriezer van 4°C gedurende 40 minuten.
2️⃣ Breng de cellen over naar een vriezer van -80°C gedurende 24 uur.
3️⃣ Bewaar de cellen in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring



❄️
Mr. Frosty gebruiken

Een handig apparaat voor het gecontroleerd invriezen van cellen zonder elektrische voeding

1️⃣ Bereid cellen voor in cryovials met vriesmedium.
2️⃣ Plaats cryovials in Mr. Frosty container.
3️⃣ Bewaar bij -80°C gedurende 24 uur alvorens over te hevelen naar vloeibare stikstof



❄️
Vriezer met gecontroleerde snelheid

Een zeer nauwkeurige vriezer van Thermo Fisher of andere fabrikanten, ontworpen voor gecontroleerde temperatuurverlaging

1️⃣ Programmeer het apparaat om de temperatuur geleidelijk te laten dalen.
2️⃣ Plaats de geprepareerde cellen in de vriezer.
3️⃣ Breng de cellen na de vriescyclus over in vloeibare stikstof









Bewaar de cryovials bij temperaturen lager dan -130°C of in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring.


Ingrediënten

Bevat FBS, DMSO, Glucose, Zouten
Buffercapaciteit: pH = 7,2 tot 7,6


Cytion's Freeze Medium CM-1 biedt een betrouwbare oplossing voor cryopreservatie en zorgt voor een hoge levensvatbaarheid en functionaliteit van de cellen na ontdooien voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen.

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) is een zeer veelzijdig en veelgebruikt basismedium dat is ontworpen om de groei van een breed scala aan zoogdiercellen in biologisch onderzoek te ondersteunen. Het dient als een ideaal medium voor het kweken van primaire fibroblasten, neuronen, gliacellen, HUVECs, gladde spiercellen en populaire cellijnen zoals HeLa, 293, Cos-7 en PC-12.
DMEM onderscheidt zich van andere media door zijn unieke samenstelling. Het bevat een indrukwekkende verviervoudiging van de aminozuur
- en vitamineconcentratie in vergelijking met het originele Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM werd oorspronkelijk ontwikkeld met lage glucose (1 g/L) en natriumpyruvaat, maar wordt vaak gebruikt met hogere glucosewaarden, al dan niet met natriumpyruvaat. DMEM bevat met name geen eiwitten, lipiden of groeifactoren, waardoor aanvulling noodzakelijk is. Voor optimale groei wordt DMEM vaak aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS). Daarnaast maakt DMEM gebruik van een natriumbicarbonaat buffersysteem, waarbij een omgeving van 5-10% CO2 nodig is om een fysiologische pH te handhaven.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) staat hoog aangeschreven onder de gedefinieerde media voor cel
- en weefselkweek en voorziet in de groeibehoeften van verschillende aanhangende celfenotypen. Het overtreft het originele Eagle's Medium, ontwikkeld in de jaren 1950 voor het kweken van kippeneieren, door de verbeterde aanvullende formulering die bekend staat als Dulbecco's modificatie. Deze modificatie verhoogt het gehalte aan geselecteerde aminozuren en vitaminen aanzienlijk, tot wel vier keer in vergelijking met het oorspronkelijke medium.
Op het gebied van celkweek speelt DMEM een essentiële rol als groeimedium voor verschillende celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en getransformeerde cellen. Onderzoekers gebruiken de aangepaste versie van DMEM ook voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen, zoals het ontdekken van medicijnen, weefselmanipulatie en het bestuderen van celsignaalroutes.

Kwaliteitscontrole

Steriel gefilterd


Opslag en houdbaarheid

Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Na opening bewaren bij 4 °C en binnen 6-8 weken gebruiken.


Verzendomstandigheden

Omgevingstemperatuur


Onderhoud

Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.


Samenstelling



Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)


Aminozuren
Glycine
30.00



L-Arginine HCl
84.00



L-Cystine 2 HCl
62.57



L-Glutamine
584.00



L-Histidine HClH2O
42.00



L-Isoleucine
105.00



L-Leucine
105.00



L-Lysine HCl
146.00



L-Methionine
30.00



L-Fenylalanine
66.00



L-Serine
42.00



L-Threonine
95.00



L-Tryptofaan
16.00



L-Tyrosine 2 Na 2H2O
103.79



L-Valine
94.00


Vitaminen
Choline chloride
4.00



D-Calcium Pantothenaat
4.00



Foliumzuur
4.00



myo-Inositol
7.20



Nicotinamide
4.00



Pyridoxaal HCl
4.00



Riboflavine
0.40



Thiamine HCl
4.00


Anorganische zouten
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Andere componenten
D-glucose
4500.00



Fenolrood natriumzout
15.90



Natriumpyruvaat
110.00

Accutase-oplossing voor het losmaken van cellen met EDTA en fenolrood – 100 ml

Accutase is een gebruiksklare, steriel gefilterde celafhechtingsoplossing die is ontworpen als een zacht alternatief voor trypsine/EDTA voor het losmaken van hechtende zoogdiercellen van standaard plastic weefselkweekmateriaal en met adhesie gecoate oppervlakken. Het combineert proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit in een uitgebalanceerde zoutoplossing om een effectieve maar gecontroleerde dissociatie te bieden, waarbij eiwitten op het celoppervlak behouden blijven en een hoge levensvatbaarheid na passage en snelle herhechting worden ondersteund.

De Accutase-formule is gebaseerd op Dulbecco's fosfaatgebufferde zoutoplossing (DPBS) met EDTA en fenolrood als visuele pH-indicator. De enzymen zijn van niet-zoogdierlijke en niet-bacteriële oorsprong, waardoor Accutase bijzonder geschikt is voor stamcelonderzoek, vaccinworkflows en elke toepassing waarbij verontreinigingen van dierlijke of microbiële oorsprong tot een minimum moeten worden beperkt. De oplossing remt zichzelf bij 37 °C, zodat er na het losmaken geen neutraliserend reagens of serumhoudend medium nodig is – cellen kunnen direct in vers medium worden overgebracht.

Belangrijkste kenmerken

Kant-en-klare 1x steriel gefilterde vloeistof – verdunning of reconstitutie is niet nodig
Gecombineerde proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit voor zachte dissociatie
Elke batch is gestandaardiseerd op een gedefinieerde dissociatieactiviteit voor consistentie tussen de verschillende partijen
Enzymen van niet-zoogdierlijke en niet-bacteriële oorsprong
Auto-inhibitie bij 37 °C – geen neutraliserende oplossing nodig
Geformuleerd in Dulbecco’s PBS met EDTA
Fenolrood toegevoegd als visuele pH-indicator
pH 6,8 – 7,8


Typische toepassingen
Accutase dissocieert op milde wijze een breed scala aan hechtende en gevoelige celtypen, waaronder menselijke embryonale stamcellen (hESCs), menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs), neurale stamcellen, primaire neuronen en routinematig gekweekte hechtende lijnen zoals HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 en A549. Typische toepassingen zijn onder meer:

Routinematige subcultuur en passage van hechtende zoogdiercellen
Zachte dissociatie van afzonderlijke cellen van hESC's, iPSC's en andere gevoelige lijnen
Monstervoorbereiding voor flowcytometrie en FACS-analyse
Analyse van celoppervlaktemarkers waarbij de integriteit van het epitoop van belang is
Testen op celmigratie, proliferatie en apoptose
Rusttoestandtesten door serumuitputting en oncogeentransfectiestudies
Migratietests voor tumorcellen en neurale crestcellen
Opschaling van de productie in bioreactor-workflows

Voor routinewerkzaamheden brengt u ongeveer 10 ml Accutase per 75 cm2 kweekoppervlak aan en incubeert u dit gedurende 5–10 minuten bij kamertemperatuur. De optimale incubatietijd moet voor elke cellijn worden bepaald en mag niet langer zijn dan een uur. Spoel de cellaag vóór toevoeging af met een Ca2+/Mg2+-vrije zoutoplossing, zoals DPBS zonder calcium en magnesium, om restserum en tweewaardige kationen te verwijderen.

Behandeling en opslag
Bewaar de ongeopende fles ingevroren bij -15 °C of lager. Ontdooi bij kamertemperatuur of 's nachts bij +2 °C tot +8 °C. Ontdooi Accutase niet in een waterbad van 37 °C, aangezien verhoogde temperaturen de enzymactiviteit verminderen. Na ontdooien kan de oplossing maximaal 2 maanden worden bewaard bij +2 °C tot +8 °C; bewaar niet bij kamertemperatuur. Verwarm het reagens niet voor op 37 °C vóór gebruik – voeg het direct toe aan gewassen cellen bij kamertemperatuur. Voor een lange houdbaarheid wordt het verdelen in porties voor eenmalig gebruik aanbevolen om herhaalde ontdooicycli te voorkomen. Werk altijd onder aseptische omstandigheden.

Kwaliteit
Vervaardigd volgens strenge kwaliteitsnormen. Elke batch Accutase wordt steriel gefilterd en getest op steriliteit, pH, uiterlijk en dissociatieactiviteit om consistente, reproduceerbare prestaties van batch tot batch te garanderen.

Productspecificaties



Specificatie
Details



ProducttypeReagens voor celafhechting / dissociatie
FormaatSteriel gefilterde vloeistof, gebruiksklaar
Inhoud100 ml
Werkconcentratie1x (gebruiksklaar)
EnzymactiviteitGecombineerd proteolytisch en collagenolytisch
EnzymherkomstNiet-zoogdier en niet-bacterieel
BuffersysteemDulbecco’s PBS met EDTA
pH-indicatorFenolrood
pH-bereik6,8 – 7,8
UiterlijkHeldere, lichtrode tot oranje oplossing
Opslagtemperatuur-15 °C of lager
Stabiliteit na ontdooienTot 2 maanden bij +2 °C tot +8 °C
Aanbevolen gebruiksvolume~10 ml per 75 cm² kweekoppervlak
Typische incubatietijd5 – 10 minuten bij kamertemperatuur
VerzendvoorwaardenIngevroren op droogijs
Beoogd gebruikUitsluitend voor onderzoek en verdere productie



Formulering (samenstelling per liter)



Bestanddeel
Concentratie (mg/l)




Anorganische zouten

Natriumchloride (NaCl)8000,00
Dinatriumwaterstoffosfaat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumchloride (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenofosfaat (KH2PO4)200,00

Overige componenten

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenolrood3,00
Gepatenteerd enzymmengsel (proteolytische en collagenolytische activiteit)1x



Accutase is een geregistreerd handelsmerk van Innovative Cell Technologies, Inc.

Product Overzicht
Volume: 100 ml Opslag: ≤-15°C Steriliteit: Steriel gefilterd
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is een steriel, gebruiksklaar concentraat dat is ontworpen om de risico's van microbiële besmetting in celkweken en aanverwante laboratoriumtoepassingen te verminderen. Deze 100x-oplossing bevat een beproefde combinatie van penicilline, streptomycine en amfotericine B, die een breed spectrum antimicrobiële activiteit biedt tegen Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën, gisten en filamenteuze schimmels. De formulering is geschikt voor gebruik in eukaryote celculturen, bacteriële media en andere besmettingsgevoelige systemen, ter ondersteuning van schone en consistente laboratoriumwerkzaamheden.
Toepassing en voordelen Deze oplossing is geoptimaliseerd voor routinematige onderzoeksprotocollen en wordt veel gebruikt om aseptische omstandigheden in celkweekworkflows te handhaven. Het biedt betrouwbare prestaties in contaminatiegevoelige omgevingen en helpt onderzoekers het risico van microbiële overgroei te verminderen zonder de gezondheid van de cellen of de experimentele reproduceerbaarheid in gevaar te brengen. De steriel gefilterde formulering elimineert de noodzaak voor extra solubilisatiestappen, ondersteunt een gestroomlijnde mediabereiding en vermindert de variabiliteit in dagelijkse labprocedures.
Gebruik en compatibiliteit Om standaard werkconcentraties te bereiken, verdunt u de oplossing 1:100 in uw volledige kweekmedium. Het product is compatibel met een breed scala aan zoogdiercellijnen en basismedia. Door de consistente beschikbaarheid van de voorraad profiteren onderzoekers van een betrouwbare leveringscontinuïteit en vereenvoudigde logistieke planning. De oplossing moet worden bewaard bij ≤ -15 °C en worden beschermd tegen herhaalde vries-dooicycli om de stabiliteit te behouden. Alleen voor onderzoek. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.

Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelgebruikte bufferoplossing in biologisch en chemisch onderzoek. Het speelt een cruciale rol bij het handhaven van de pH-balans en osmolariteit tijdens verschillende experimentele procedures, waaronder weefselverwerking en celkweek. Onze PBS-oplossing is zorgvuldig geformuleerd met hoogzuivere ingrediënten om stabiliteit en betrouwbaarheid bij elk experiment te garanderen. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS benaderen die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.

Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een werkconcentratie van 1X bevat het:

8000 mg/L natriumchloride (NaCl)
200 mg/L Kaliumchloride (KCl)
1150 mg/L Watervrij natriumfosfaat dibasisch (Na2HPO4)
200 mg/L Watervrij monobasisch kaliumfosfaat (KH2PO4)

Deze samenstelling zorgt voor een optimale pH-waarde en ionenbalans, geschikt voor een breed scala aan biologische toepassingen.

Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor verschillende toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. PBS-oplossingen met EDTA zijn effectief voor het losmaken van vastzittende en samengeklonterde cellen. Tweewaardige metalen zoals zink mogen echter niet aan PBS worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, waaronder SARS-CoV-2.

Kwaliteitscontrole

Steriel gefilterd


Opslag en houdbaarheid

Bewaren bij +2°C tot +25°C, beschermd tegen licht.
Eenmaal geopend, bewaren bij 2°C tot 25°C en binnen 24 maanden gebruiken.


Verzendomstandigheden

Omgevingstemperatuur


Onderhoud

Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.

Samenstelling



Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)


Zouten
Kaliumchloride
200



Kaliumfosfaat monobasisch watervrij
200



Natriumchloride
8000



Watervrij natriumfosfaat dibasisch
1150

Organisme	Mens
Weefsel	Voorhuid