HT55-cellen

€ 430,00*

De producten worden bevroren verzonden in cryobuisjes met droogijs. Elk cryobuisje bevat doorgaans 3 × 10 ⁶ cellen voor hechtende lijnen of 5 × 10⁶ cellen voor suspensielijnen (zie het batch-CoA voor meer informatie).

Prijzen excl. btw plus verzendkosten

cryovial

Productnummer: 305018

Veiligheidsinformatieblad

Productblad

Overeenkomst materiaaloverdracht

Beschrijving	HT55 is een menselijke rectale adenocarcinoomcellijn die is geïsoleerd uit de primaire rectale tumor van een 54-jarige blanke vrouw. De celijn groeit als een hechtende monolaag met een epitheelachtige morfologie en is in Cellosaurus geregistreerd onder de code CVCL_1294. HT55 draagt meerdere heterozygote en homozygote functieverliesmutaties in het APC-tumorsuppressorgen (adenomateuze polyposis coli), waaronder p.Gln1131Ter, p.Gln1303Ter, p.Arg1463Ser, p.Asn581Tyr en p.Lys241Ter (allemaal heterozygoot), evenals een homozygote p.Arg213Leu-substitutie. Dit mutatieprofiel maakt HT55 tot een biologisch relevant model van APC-gedreven colorectale carcinogenese, dat de ontregeling van de canonieke WNT-route weerspiegelt die de oorzaak is van het merendeel van de colorectale kankers bij de mens. HT55 wordt op grote schaal gebruikt in onderzoek naar colorectale kanker voor studies naar WNT/β-catenine-signalering, de tumorsuppressorfunctie van APC, gevoeligheid en resistentie voor geneesmiddelen, en preklinische evaluatie van gerichte middelen tegen componenten van de WNT-route. De lijn is geschikt voor in-vitro farmacologische testen en xenotransplantaatstudies in immuungecompromitteerde muismodellen, en biedt daarmee een hechtend, hanteerbaar in-vitroplatform voor mechanistisch en translationeel onderzoek naar colorectale kanker. Door de aanwezigheid van meerdere APC-truncatiemutaties is HT55 representatief voor het microsatellietstabiele, chromosomaal instabiele subtype van colorectale kanker dat vaak wordt aangedreven door functieverlies van APC. HT55 wordt gekweekt in EMEM (MEM Eagle, w: 2 mM L-glutamine, w: 2,2 g/L NaHCO₃, w: EBSS; Cytion-artikelnummer 820100a), aangevuld met 10% FBS, bij 37 °C in een bevochtigde atmosfeer met 5% CO₂. Cellen worden met behulp van Accutase gehercultiveerd wanneer ze voor ongeveer 80–90% confluent zijn, met een aanbevolen splitsingsverhouding van 1:3 tot 1:5 en een zaaidichtheid van 1–3 × 10⁴ cellen/cm². Het medium wordt om de 2–3 dagen ververst. De verdubbelingstijd bedraagt ongeveer 28 uur.
Organisme	Mens
Weefsel	Rectum
Ziekte	Adenocarcinoom
Toepassingen	Onderzoek naar colorectale kanker; onderzoek naar de WNT/APC-route; testen op gevoeligheid en resistentie tegen geneesmiddelen; preklinische oncologie; xenotransplantaatmodellen; evaluatie van gerichte therapieën
Synoniemen	HT55

Leeftijd	54 jaar
Geslacht	Vrouw
Etniciteit	Kaukasisch
Morfologie	Epitheelachtig
Celtype	Epitheelcellen
Groei eigenschappen	Aanhangend

Citeren	HT55 (Cytion-catalogusnummer 305018)
Bioveiligheidsniveau	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccessie	CVCL_1294

Mutatieprofiel	Mutatie: p.Gln1131Ter, heterozygoot; Mutatie: p.Gln1303Ter, heterozygoot; Mutatie: p.Arg1463Ser, heterozygoot; Mutatie: p.Asn581Tyr, heterozygoot; Mutatie: p.Lys241Ter, heterozygoot; Mutatie: p.Arg213Leu, homozygoot

Kweekmedium	EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion artikelnummer 820100a)
Supplementen	Vul het medium aan met 10% FBS
Scheidingsreagens	Accutase
Verdubbelingstijd	28 uur
Subcultuur	Verwijder het oude medium van de aanhechtende cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-kolven 3-5 ml PBS en voor T75-kolven 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase; gebruik hiervoor 1-2 ml voor T25-flessen en 2,5 ml voor T75-flessen. Laat de cellen 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Meng de cellen na de incubatie voorzichtig met 10 ml medium om ze opnieuw in suspensie te brengen, en centrifugeer ze vervolgens 3 minuten bij 300×g. Gooi het supernatant weg, breng de cellen opnieuw in suspensie in vers medium en breng ze over naar nieuwe flessen die al vers medium bevatten.
Splitsingsverhouding	1 tot en met 5
Dichtheid zaaien	1 tot 3 x 10⁴ cellen/cm²
Vloeistofvernieuwing	Om de 2 tot 3 dagen
Middel invriezen	Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Cellen ontdooien en kweken	Controleer of de flacon bij levering diepgevroren blijft, aangezien de cellen op droog ijs worden verzonden om optimale temperaturen tijdens het transport te behouden. Bewaar het cryoflesje na ontvangst onmiddellijk bij temperaturen lager dan -150 °C om de integriteit van de cellen te behouden, of ga verder met stap 3 als onmiddellijke kweek vereist is. Voor onmiddellijke kweek: ontdooi de flacon snel door deze onder te dompelen in een waterbad van 37 °C met schoon water en een antimicrobieel middel, waarbij u 40-60 seconden zachtjes schudt totdat er een klein ijsklontje overblijft. Voer alle volgende stappen uit onder steriele omstandigheden in een stromingskap en desinfecteer de cryoflacon met 70% ethanol voordat deze wordt geopend. Open voorzichtig de gedesinfecteerde flacon en breng de celsuspensie over in een centrifugebuis van 15 ml met 8 ml kweekmedium op kamertemperatuur en meng voorzichtig. Centrifugeer het mengsel gedurende 3 minuten bij 300 x g om de cellen te scheiden en gooi het supernatant met resterend vriesmedium voorzichtig weg. Resuspendeer de celpellet voorzichtig in 10 ml vers kweekmedium. Verdeel voor adherente cellen de suspensie over twee T25-kweekkolven; breng voor suspensiekweken al het medium over in één T25-kweekkolf om effectieve celinteractie en -groei te bevorderen. Houd u aan de vastgestelde subcultuurprotocollen voor continue groei en onderhoud van de cellijn, om betrouwbare experimentele resultaten te garanderen.
Incubatieatmosfeer	37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.
Verzendvoorwaarden	Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.
Opslagomstandigheden	Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Als u van plan bent Cytion-cellijnen uitsluitend te gebruiken voor intern onderzoek op één enkele onderzoekslocatie, vul dan onze materiaaloverdrachtsovereenkomst (MTA) in, onderteken deze en stuur deze samen met uw bestelling op.

Voor commerciële toepassingen, waaronder maar niet beperkt tot werk tegen betaling, kwaliteitscontroletests, productvrijgave, diagnostisch gebruik of regelgevende studies, vult u het formulier voor beoogd gebruik in, zodat wij een overeenkomst kunnen opstellen die is afgestemd op uw project.

Let op: de MTA is alleen van toepassing op bepaalde cellijnen. Als deze kennisgeving en het MTA-document op een productpagina worden weergegeven, is de overeenkomst van toepassing. Voor cellijnen die niet onder de MTA vallen, wordt geen verwijzing naar de overeenkomst weergegeven. De MTA is niet geldig voor klanten in Noord- en Zuid-Amerika, China of Taiwan. Neem contact op met onze Amerikaanse entiteit om de juiste overeenkomst te ontvangen.

HT55-cellen

Algemene informatie

Kenmerken

Regelgevende gegevens

Biomoleculaire gegevens

Omgaan met

Kwaliteitscontrole en moleculaire analyse

Overeenkomst materiaaloverdracht