HL-60 cellen
Samenvatting over de HL-60 cellijn
Beschrijving | HL-60 cellen, afkomstig van een 36-jarige vrouw met acute promyelocytische leukemie, dienen als een vitaal model in kankeronderzoek, in het bijzonder bij het bestuderen van hematologische maligniteiten, vanwege hun vermogen om te differentiëren in rijpe witte bloedcellen en aangeboren immuunreacties na te bootsen, wat helpt bij het begrijpen van leukemische progressie, expressie van cellulaire oncogenen en identificatie van therapeutische doelwitten. Het vermogen van HL-60 cellen om te differentiëren in rijpe witte bloedcellen, zoals granulocyten en monocyten, door middel van middelen als dimethylsulfoxide (DMSO) of retinoïnezuur, onderstreept hun belang in studies met betrekking tot de differentiatie van humane myeloïde cellen en werpt licht op de mechanismen die ten grondslag liggen aan leukemische progressie en de werkzaamheid van therapeutische interventies. HL-60 humane myeloïde leukemiecellen zijn een integraal onderdeel van onderzoek dat zich richt op apoptose, celactivatie en de celcyclus, inclusief de regulatie van belangrijke oncogenen zoals het c-myc proto-oncogen en tumor necrose factor (TNF-alfa). Hun vermogen om extracellulaire vallen te vormen, structuren die betrokken zijn bij het vangen en doden van ziekteverwekkers, wat de aangeboren immuunrespons van primaire neutrofielen weerspiegelt, maakt HL-60 cellen een nuttig model voor het bestuderen van de immuunaspecten van leukemie en hoe leukemische cellen interageren met het immuunsysteem. Bovendien is de responsiviteit van HL-60 cellen op signaalwegen zoals de MAPK-route en verschillende kinasen cruciaal voor het ontleden van de moleculaire mechanismen die de proliferatie en differentiatie van leukemische cellen aansturen. Dit aspect is vooral nuttig voor het identificeren van therapeutische doelen en het ontwikkelen van nieuwe behandelingsstrategieën voor leukemie. HL-60 cellen zijn een cruciale bron in kankeronderzoek en bieden inzicht in hematologische maligniteiten, leukemische progressie en potentiële therapeutische doelen door hun unieke differentiatiemogelijkheden en nabootsing van immuunreacties. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Bloed |
Ziekte | Acute promyelocytische leukemie |
Toepassingen | Transfectiegastheer |
Synoniemen | HL 60, HL.60, HL60 |
Kenmerken
Leeftijd | 36 jaar |
---|---|
Geslacht | Vrouw |
Etniciteit | Kaukasisch |
Morfologie | Ronde cellen |
Celtype | Lymfoblast |
Groei eigenschappen | Ophanging |
Specificaties
Citeren | HL-60 (Cytion catalogusnummer 300209) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Genetica van de promyelocytische leukemiecellijn HL-60
Uitgedrukte receptoren | aanvulling, Fc |
---|---|
Isoenzymen | G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, ES-D,1, Me-2, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1 |
Oncogenen | myc+ |
Omgekeerde transcriptase | negatief |
Producten | tumornecrosefactor (TNF), ook bekend als tumornecrosefactor alfa (TNF-alfa, TNF-alfa), na stimulatie met forbol myristinezuur |
Omgaan met
Kweekmedium | RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Subcultuur | Houd culturen in stand door regelmatig medium toe te voegen of te vervangen. Begin culturen met een dichtheid van 2 x 10^5 cellen/ml en houd de celconcentratie binnen het bereik van 1 x 10^5 tot 1 x 10^6 cellen/ml voor optimale groei |
Dichtheid zaaien | 2 x 10^5 cellen/ml |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 13,14
D13S317: 8,11
D16S539: 11
D5S818: 12
D7S820: 11,12
TH01: 7,8
TPOX: 8,11
vWA: 16
D3S1358: 16
D21S11: 29,30
D18S51: 14
Penta E: 13
Penta D: 10,12
D8S1179: 13
FGA: 22,24
D1S1656: 15
D6S1043: 11,12
D2S1338: 17
D12S391: 18,20
D19S433: 14
|
HLA-allelen |
A*: 01:01:01
B*: 57:01:01
C*: 06:02:01
DRB1*: 07:01:01
DQA1*: 02:01:01
DQB1*: 03:03:02
DPB1*: 04:01:01, 13:01:01
E: 01:01:01, 01:09
|
Required products
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij -130°C in een mechanische diepvriezer. Het vriesmedium CM-ACF maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en tijdrovende en veeleisende vriesprocessen met gecontroleerde snelheid niet meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium af, resuspendeer in CM-ACF, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-ACF is een serumvrij, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde, serumvrije celvriesmedium CM-ACF is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talloze publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde serumvrije ingrediënten
CM-ACF bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums hebben het nadeel van fluctuerende recovery rates en een onduidelijke samenstelling. Aangezien de samenstelling en concentratie van eiwitten en andere biologische componenten in serum varieert van batch tot batch, kan de reproduceerbaarheid van experimenten met cellen die werden ingevroren in een serumbevattend medium in het gedrang komen. Aangezien elk bestanddeel van CM-ACF zorgvuldig gedefinieerd is, kun je er zeker van zijn dat cellen altijd op identieke wijze herstellen.
Bevat DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Universeel
- zelfs voor stamcelpreservatie
Alle gangbare cellijnen kunnen worden ingevroren en ontdooid om veel levensvatbare cellen op te leveren. Vergeleken met standaardmedia is de mate van herstel van zelfs de meest kwetsbare cellen aanzienlijk hoger. Met CM-ACF bewaren we meer dan 1000 verschillende cellijnen met uitstekend succes.
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-ACF vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
In eerste instantie ontworpen om de groei van menselijke leukemische cellen in zowel suspensie
- als monolaagculturen te ondersteunen, is RPMI 1640 Medium door aanpassingen door onderzoekers en commerciële leveranciers geëvolueerd tot een medium dat geschikt is voor een breed scala aan zoogdiercellen. Het is uitzonderlijk compatibel met cellijnen zoals HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyten en carcinomen.
RPMI 1640 Medium onderscheidt zich van andere celkweekmedia door zijn unieke samenstelling. Het bevat een aanzienlijke hoeveelheid fosfaat, aminozuren en vitaminen. Het bevat met name biotine, vitamine B12 en PABA, die afwezig zijn in Eagle's Minimal Essential Medium of Dulbecco's Modified Eagle Medium. Bovendien vertoont RPMI 1640 Medium significant verhoogde concentraties vitamine inositol en choline. Het bevat echter geen eiwitten, lipiden of groeifactoren. Daarom is aanvulling met 10% foetaal runderserum (FBS) vaak nodig om optimale omstandigheden voor celgroei te creëren.
Het buffersysteem van RPMI 1640 Medium is gebaseerd op natriumbicarbonaat (2,0 g/L) en vereist een omgeving met 5-10% CO2 om een fysiologisch geschikte pH te handhaven. De toevoeging van het reductiemiddel glutathion onderscheidt dit medium verder van andere.
Dit RPMI 1640 medium bevat 4,5 gram glucose per liter.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumnitraat x 4H2O
100,00
Watervrij magnesiumsulfaat
48,83
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
5450,00
dinatriumwaterstoffosfaat
800,49
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
4500,00
Glutathion (rood.)
1,00
HEPES
2383,00
Fenol rood
5,00
Natriumpyruvaat
110,00
Aminozuren
L-Arginine x HCl
241,86
L-Asparagine x H2O
56,82
L-Asparaginezuur
20,00
L-Cystine x 2HCl
65,19
L-Glutamine
300,00
L-Glutaminezuur
20,00
Glycine
10,00
L-Histidine x HCl x H2O
20,27
L-Hydroxyproline
20,00
L-Isoleucine
50,00
L-Leucine
50,00
L-Lysine x HCl
40,00
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
15,00
L-Proline
20,00
L-Serine
30,00
L-Threonine
20,00
L-Tryptofaan
5,00
L-Tyrosine x 2Na
28,83
L-Valine
20,00
Vitaminen
p-Aminobenzoëzuur
1,00
D-(+)-Biotine
0,20
D-Calcium pantothenaat
0,25
Choline chloride
3,00
Foliumzuur
1,00
myo-Inositol
35,00
Nicotinamide
1,00
Pyridoxine x HCl
1,00
Riboflavine
0,20
Thiamine x HCl
1,00
Vitamine B12
0,01
NaHCO3
1500,00
In eerste instantie ontworpen om de groei van menselijke leukemische cellen in zowel suspensie
- als monolaagculturen te ondersteunen, is RPMI 1640 Medium door aanpassingen door onderzoekers en commerciële leveranciers geëvolueerd tot een medium dat geschikt is voor een breed scala aan zoogdiercellen. Het is uitzonderlijk compatibel met cellijnen zoals HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyten en carcinomen.
RPMI 1640 Medium onderscheidt zich van andere celkweekmedia door zijn unieke samenstelling. Het bevat een aanzienlijke hoeveelheid fosfaat, aminozuren en vitaminen. Het bevat met name biotine, vitamine B12 en PABA, die afwezig zijn in Eagle's Minimal Essential Medium of Dulbecco's Modified Eagle Medium. Bovendien vertoont RPMI 1640 Medium significant verhoogde concentraties vitamine inositol en choline. Het bevat echter geen eiwitten, lipiden of groeifactoren. Daarom is aanvulling met 10% foetaal runderserum (FBS) vaak nodig om optimale omstandigheden voor celgroei te creëren.
Het buffersysteem van RPMI 1640 Medium is gebaseerd op natriumbicarbonaat (2,0 g/L) en vereist een omgeving met 5-10% CO2 om een fysiologisch geschikte pH te handhaven. De toevoeging van het reductiemiddel glutathion onderscheidt dit medium verder van andere.
De unieke samenstelling van deze RPMI formulering bevat 2,1 mM stabiele glutamine, 2,0 gram per liter NaHCO3 en fenolrood.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumnitraat x 4H2O
100,00
Watervrij magnesiumsulfaat
48,83
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
5,950.00
dinatriumwaterstoffosfaat
800,49
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
2,000.00
Glutathion (rood.)
1,00
Fenol rood
5,00
NaHCO3
2,000.00
Aminozuren
L-Arginine x HCl
241,86
L-Asparagine x H2O
56,82
L-Asparaginezuur
20,00
L-Cystine x 2HCl
65,19
L-Alanyl-L-Glutamine
447,00
L-Glutaminezuur
20,00
Glycine
10,00
L-Histidine x HCl x H2O
20,27
L-Hydroxyproline
20,00
L-Isoleucine
50,00
L-Leucine
50,00
L-Lysine x HCl
40,00
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
15,00
L-Proline
20,00
L-Serine
30,00
L-Threonine
20,00
L-Tryptofaan
5,00
L-Tyrosine x 2Na
28,83
L-Valine
20,00
Vitaminen
p-Aminobenzoëzuur
1,00
D-(+)-Biotine
0,20
D-Calcium pantothenaat
0,25
Choline chloride
3,00
Foliumzuur
1,00
myo-Inositol
35,00
Nicotinamide
1,00
Pyridoxine x HCl
1,00
Riboflavine
0,20
Thiamine x HCl
1,00
Vitamine B12
0.005
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00