HK-2 Cellen
Algemene informatie
Beschrijving | De menselijke nier-2 (HK-2) cellijn is een type proximale tubulaire cel (PTC) afkomstig van een normale menselijke nier. HK-2 cellen werden gecreëerd door transfectie met een recombinant retrovirus dat de E6/E7-genen van het humaan papillomavirus 16 (HPV-16) bevat. Dit proces leidde tot de immortalisatie van de cellen en de oprichting van een continu groeiende cellijn. De HK-2 cellen zijn uitgebreid gekarakteriseerd en onderzoek heeft aangetoond dat ze een fenotype behouden dat indicatief is voor goed gedifferentieerde PTC's. De cellen brengen EGF tot expressie en hebben dit nodig. De cellen brengen EGF tot expressie en hebben dit nodig voor hun groei en overleving. Ze zijn positief voor verschillende genen, waaronder alkalische fosfatase, gamma glutamyltranspeptidase, leucine aminopeptidase, zure fosfatase, cytokeratine, alfa 3, bèta 1 integrine en fibronectine. Daarnaast behouden de cellen functionele kenmerken van proximale tubuli en zijn ze in staat tot gluconeogenese. HK-2 cellen zijn ankerafhankelijk, wat betekent dat ze een oppervlak nodig hebben om zich aan vast te hechten om te kunnen groeien. Ze kunnen niet groeien in methylcellulose, zachte agar of suspensie. De cellen hebben een gemiddelde diameter van 18,2 micrometer en hun verdubbelingstijd varieert tussen 47,3 uur en 61,7 uur. Wat toepassingen betreft, zijn HK-2 cellen op grote schaal gebruikt in toxicologisch onderzoek vanwege hun vermogen om experimentele resultaten te reproduceren die verkregen zijn met vers geïsoleerde PTC's. HK-2 cellen zijn bijvoorbeeld gebruikt in toxicologisch onderzoek. HK-2 cellen zijn bijvoorbeeld gebruikt om de effecten van milieutoxines, zoals cadmium en cisplatine, op niercellen te bestuderen. De cellen zijn ook gebruikt om de mechanismen te bestuderen die ten grondslag liggen aan nierziekten zoals diabetische nefropathie en acute nierschade. Het is echter essentieel om op te merken dat de gevoeligheid van HK-2 cellen voor toxische verbindingen kan worden beïnvloed door het aantal passages. Concluderend kunnen we stellen dat HK-2 cellen een goed gekarakteriseerde PTC cellijn zijn die kan worden gebruikt in een verscheidenheid aan biologische onderzoekstoepassingen, met name in de toxicologie. Onderzoekers moeten zich echter bewust zijn van de mogelijke effecten van passage op de gevoeligheid van deze cellen voor toxische verbindingen en het aantal passages moet worden overwogen bij de interpretatie van experimentele resultaten. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Nier, cortex, proximale tubulus |
Synoniemen | Hk-2, HK2, Menselijke nier-2 |
Kenmerken
Leeftijd | Volwassen |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Europese |
Morfologie | Epitheel |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | HK-2 (Cytion catalogusnummer 305021) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Uitgedrukte receptoren | Epidermale groeifactor (EGF), uitgedrukt |
---|---|
Eiwitexpressie | Alkalische fosfatase, Gamma Glutamyltranspeptidase, Leucine Aminopeptidase, Zure fosfatase, Cytokeratine, Alfa 3, Beta 1 Integrine, Fibronectine |
Omgaan met
Kweekmedium | DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS, 10 microgram/L IGF-1, 10 microgram/L EGF, 1 mg/L Transferrine, 0,5 microgram/L TGF-b1, 0,2 mg/L Biotine 0,05 mg/ml BPE |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | 1:2 tot 1:4 |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 13
D13S317: 9
D16S539: 11,12
D5S818: 12
D7S820: 10,11
TH01: 9
TPOX: 8,9
vWA: 17,18
D3S1358: 16,17
D21S11: 28,30
D18S51: 12
Penta E: 10,11
Penta D: 9,12
D8S1179: 10,14
FGA: 20,22
D1S1656: 12,13
D6S1043: 12,13
D2S1338: 17,25
D12S391: 17.3,22
D19S433: 15,15.2
|