HEK293A-cellen
Algemene informatie
Beschrijving | De HEK293A cellijn, een afgeleide van de menselijke embryonale nier 293 (HEK293) cellen, vertegenwoordigt een gespecialiseerd hulpmiddel in virologisch en gentherapie onderzoek, met name in de productie, amplificatie en titratie van replicatie-incompetente adenovirussen. Deze cellen hebben een vlakke morfologie, wat aanzienlijk helpt bij microscopisch onderzoek en titratieprocessen, waardoor het eenvoudiger is om virale deeltjes te tellen en te beoordelen. Een cruciale eigenschap van de HEK293A cellijn is de stabiele integratie van het adenovirus E1 gen in het genoom. Deze integratie is cruciaal omdat het de noodzakelijke transcriptionele machinerie levert voor de expressie van E1-eiwitten, specifiek E1a en E1b. De aanwezigheid van deze eiwitten is essentieel voor de replicatie van adenovirale vectoren in de cel. Het E1a-eiwit activeert voornamelijk de transcriptie van het adenovirusgenoom, terwijl E1b-eiwitten betrokken zijn bij virale replicatie en verstoring van de celcyclus. Het nut van HEK293A cellen gaat verder dan alleen het ondersteunen van virale replicatie. Deze cellen vergemakkelijken de efficiënte productie van virale preparaten met een hoge titer en van hoge kwaliteit, die essentieel zijn voor zowel fundamenteel onderzoek als therapeutische toepassingen. De robuuste replicatiecapaciteit van de cellijn en de eenvoudige hanteerbaarheid stellen onderzoekers in staat om adenovirale constructen te screenen en te ontwikkelen met ongekende precisie en efficiëntie. Samengevat is de HEK293A cellijn een onmisbare bron op het gebied van virologie en gentherapie. Het vermogen om E1-eiwitten stabiel tot expressie te brengen en adenovirale replicatie te ondersteunen maakt het een waardevol hulpmiddel voor onderzoekers die adenovirale vectoren willen produceren en manipuleren. De eigenschappen van de cellijn maken een efficiënte generatie van virale vectoren mogelijk, wat cruciaal is voor het bevorderen van onderzoek en mogelijke therapeutische interventies. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Embryonale nier |
Synoniemen | HEK-293A, HEK293A, HEK 293A, HEK293-A, QBI-HEK 293A, QBI-293A |
Kenmerken
Leeftijd | Foetus |
---|---|
Geslacht | Vrouw |
Morfologie | Epitheel |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | 293A (Cytion catalogusnummer 305070) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Omgaan met
Kweekmedium | EMEM, w: 2 mM L-Glutamine, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: EBSS, w: 1 mM natriumpyruvaat, w: NEAA (Cytion artikelnummer 820100c) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | 1:3 tot 1:5 |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 12,12
D13S317: 12,14
D16S539: 9,13
D5S818: 8,8
D7S820: 11,12
TH01: 7,9.3
TPOX: 11,11
vWA: 16,19
D3S1358: 15,17
D21S11: 28,30.2
D18S51: 17,18
Penta E: 7,15
Penta D: 9,10
D8S1179: 12,12
FGA: 23,23
D6S1043: 11,11
D2S1338: 19,19
D12S391: 19,21
D19S433: 15,18
|