HBL-100 cellen
Algemene informatie
Beschrijving | De epitheelcellijn HBL-100 is door E.V. Gaffney en medewerkers afgeleid van de melk van een zogende moeder en 3 dagen na de bevalling verkregen. Hoewel de melkdonor geen borstletsel had en de patiënte geen familiegeschiedenis van borstkanker had, was het karyotype van de herstelde cellen al bij passage 7 abnormaal. Deze lijn was in staat om een kleine hoeveelheid lactose te synthetiseren en reageerde op prolactine of oestrogeen door grotere hoeveelheden caseïne te produceren. Elektronenmicrofoto's toonden microvilli, tonofibrillen en desmosomen. Problematische cellijn: Verkeerd geïdentificeerd. Aanwezigheid van een Y-chromosoom in cellijn waarvan gedacht werd dat deze van vrouwelijke oorsprong was (Yoshino et al. 2006. Capes-Davies, 2010). Oorspronkelijk dacht men dat deze afkomstig was van een caseïneproducerende borstcellijn. Bevat bovendien SV40-genomische sequentie terwijl de cellijn geacht werd spontaan geïmmortaliseerd te zijn. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Borst |
Ziekte | Carcinoom |
Synoniemen | HBL 100, HBL100 |
Kenmerken
Leeftijd | 27 jaar |
---|---|
Geslacht | Vrouw |
Etniciteit | Kaukasisch |
Morfologie | Epitheelachtig |
Groei eigenschappen | Monolaag, adherent |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | HBL-100 (Cytion catalogusnummer 300178) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Antigeenexpressie | HLA A1, A10, A11, B7, B8 |
---|---|
Isoenzymen | G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotype Frequentie Product: 0.0008 |
Tumorigeen | Ja, in naakte muizen. Bij een passage lager dan 35 is de lijn niet tumorigeen in naaktmuizen, maar vormt kolonies in zachte agar. Er is gemeld dat de tumorigeniciteit toeneemt boven passage 35. |
Virussen | De cellen bevatten een tamelijk geïntegreerd SV40-genoom en er is gemeld dat ze een type D retrovirus kunnen bevatten dat lijkt op of identiek is aan het Mason-Pfizer apenvirus (MPMV). |
Omgekeerde transcriptase | Positief |
Ploidiestatus | Aneuploïde |
Karyotype | Het aantal stamchromosomen is bijna triploïd met een modaal aantal van 67 chromosomen en de 2S-component komt voor bij 0,6%. De meeste chromosoomaanvullingen bestaan uit ongeveer 39 normale en 28 markerchromosomen. Markers zoals 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt en vele andere komen in de meeste metafasen voor. Normale chromosomen 11, 14, 15 en 16 zijn afwezig. 2, 12, 17 en 19 zijn monosomisch en de x is disomisch. DNA-profilering voor amelogenine, een geslachtschromosoomspecifieke PCR-test die x-chromosoomspecifieke producten kan onderscheiden van Y-chromosoomspecifieke producten, onthulde de aanwezigheid van Y-chromosomen in deze cellijn van vermoedelijk vrouwelijke oorsprong. Bevestiging van de algemene bevindingen werd bereikt door QM-kleuring, C-banding en FISH, met een hele chromosoomverf probe naar het menselijke Y-chromosoom. |
Omgaan met
Kweekmedium | McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiel Glutamine, w: 2,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:2 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 1 x 10^4 cellen/cm^2 |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Herstel door bevriezing | Plaats de cellen na het ontdooien bij 5 x 10 ^ 4 cellen/cm ^ 2 en laat de cellen herstellen van het vriesproces en zich minstens 24 uur hechten. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,y
CSF1PO: 10
D13S317: 12
D16S539: 9,12
D5S818: 11,12
D7S820: 8,12
TH01: 6,8
TPOX: 8
vWA: 16
D3S1358: 14,16
D21S11: 28,30
D18S51: 16
Penta E: 7
Penta D: 12
D8S1179: 12,15
FGA: 25
|
HLA-allelen |
A*: 01:01:01, 02:01:01
B*: 08:01:01, 40:01:02
C*: 03:04:01, 07:01:01
DRB1*: 03:01:01, 15:01:01
DQA1*: 01:02:01, 05:01:01
DQB1*: 02:01:01, 06:02:01
DPB1*: 04:01:01
E: 01:01, 01:03
|
Required products
Een prominente toepassing van McCoy's 5A Medium is het gebruik in de kweek van menselijke coloncarcinoom cellijnen. Specifiek werd het gebruikt in de studie van de leucinerijke repeat-bevattende G-proteïne gekoppelde receptor (LGR5) en zijn rol in de metastase van darmkanker. Dit medium is effectief gebruikt voor de kweek van verschillende coloncarcinoomcellijnen, waaronder HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b en TENN, waardoor onderzoekers dieper kunnen ingaan op de mechanismen die ten grondslag liggen aan de uitzaaiing van colonkanker.
Naast de toepassing in kankeronderzoek, heeft McCoy's 5A Medium bewezen onmisbaar te zijn in de studie van osteoblasten. Onderzoekers die de ionenreactiviteit van calciumdeficiënt hydroxyapatiet in standaard celkweekmedia onderzoeken, hebben dit medium gebruikt om osteoblasten te kweken. Deze toepassing heeft geleid tot een beter begrip van de interacties tussen osteoblasten en calciumdeficiënt hydroxyapatiet, wat bijdraagt aan de vooruitgang op het gebied van botonderzoek.
Met name McCoy's 5A Medium is zorgvuldig geformuleerd door de aminozuren in Basal Medium Eagle te wijzigen om optimale ondersteuning te bieden aan levertumorcellen. Deze verrijkte formulering maakt het geschikt voor een breed scala van gevestigde cellijnen, evenals primaire cellen, waardoor de veelzijdigheid en toepasbaarheid in verschillende onderzoekssettings verder wordt verbeterd.
Bovendien breidt McCoy's 5A Medium zijn biochemische en fysiologische effecten uit tot buiten levertumorcellen. Het is met succes gebruikt om groei te ondersteunen in primaire culturen van beenmerg, huid, tandvlees, nieren, omentum, bijnieren, longen, milt, rattenembryo en andere celtypes. Deze brede waaier van toepassingen getuigt van het brede nut van McCoy's 5A Medium in de ondersteuning van de groei en het onderhoud van verschillende celtypes voor uitgebreid biologisch onderzoek.
Formulering
Dit McCoy's 5A medium (gemodificeerd) bevat 3,0 g/L glucose, stabiele glutamine, 2,0 mM natriumpyruvaat en 2,2 g/L NaHCO3.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
132,46
Magnesiumsulfaat x 7H2O
200,00
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
6,460.00
Natriumdiwaterstoffosfaat x H2O
580,00
Andere componenten
D(+)-Galactose watervrij
3,000.00
Glutathion (rood.)
0,50
Bacto-pepton
600,00
Fenol rood
10,00
Aminozuren
L-Alanine
13,36
L-Arginine x HCl
42,10
L-Asparagine x H2O
45,00
L-Asparaginezuur
19,97
L-Cysteïne
24,24
L-Glutamine stabiel
326,61
L-Glutaminezuur
22,10
Glycine
7,50
L-Histidine x HCl x H2O
20,76
L-Hydroxyproline
19,70
L-Isoleucine
39,36
L-Leucine
39,36
L-Lysine x HCl
36,50
L-Methionine
14,90
L-Fenylalanine
16,50
L-Proline
17,30
L-Serine
26,30
L-Threonine
17,90
L-Tryptofaan
3,10
L-Tyrosine
18,10
L-Valine
17,60
Vitaminen
p-Aminobenzoëzuur
1,00
Ascorbinezuur
0,50
D(+)-Biotine
0,20
D-Calcium pantothenaat
0,20
Choline chloride
5,00
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00