Daudi cellen
Essentiële feiten over Daudi-cellen
Beschrijving | De Daudi-cellijn werd in 1967 gemaakt van een 16-jarige Afrikaanse jongen bij wie Burkitt-lymfoom, een type lymfoom, werd vastgesteld. De Daudi-cellijn is vernoemd naar de patiënt van wie ze is afgeleid en wordt gekenmerkt door de positiviteit voor het Epstein-Barr Virus (EBV), een veelvoorkomend kenmerk bij Burkitt-lymfoom en verschillende andere lymfoproliferatieve aandoeningen. De EBV-infectie in deze cellen biedt een uniek model voor het bestuderen van de rol van het virus in tumorigenese, met name in de context van B-cel maligniteiten. Daudi menselijke cellen missen expressie van het klassieke Major Histocompatibility Complex (MHC) klasse I moleculen op hun oppervlak, wat wordt toegeschreven aan de afwezigheid van beta-2-microglobuline, een cruciale component die verantwoordelijk is voor de correcte intracellulaire vouwing en verwerking van het MHC klasse I molecuul in het endoplasmatisch reticulum. Het ontbreken van bèta-2-microglobuline in de Daudi-cellijn leidt tot een gebrek aan glycosylmodificaties die nodig zijn voor een goede expressie van deze moleculen op het celoppervlak. De Daudi-cellijn wordt veel gebruikt in immunologisch onderzoek, met name in studies waarbij sprake is van immunodepletie van lymfocytensubpopulaties, waaronder lymfocyten, natural killer cellen en perifere bloedmononucleaire cellen. Samengevat dient de Daudi-cellijn als een kritische bron voor het bevorderen van onze kennis op verschillende onderzoeksgebieden, van het fundamentele begrip van celbiologie tot de ontwikkeling van doelgerichte therapieën voor de behandeling van kanker. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Bloed |
Ziekte | Burkitt lymfoom |
Toepassingen | Analyse van oppervlakteantigenen van B-cellen, testen van cytotoxische geneesmiddelen, mutatieanalyse, analyse van apoptotische mechanismen, ontwikkeling van assays. |
Synoniemen | DAUDI, NK-10A, NK-10a, NK 10a, NK10a, N, GM03190, GM3190, GM03190A, GM17346 |
Details
Leeftijd | 16 jaar |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Afrikaans |
Morfologie | Ronde cellen |
Celtype | B lymfoblast |
Groei eigenschappen | Ophanging |
Identificatiemiddelen
Citeren | Daudi (Cytion catalogusnummer 302009) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | Daudi-cellen geven geen Epstein-Barr virus (EBV) af wanneer ze gekweekt worden, waardoor ze geclassificeerd zijn als risicogroep 1. Wanneer ze echter gebruikt worden voor genetische experimenten, moeten ze behandeld worden als cellen van risicogroep 2. |
Genetica
Antigeenexpressie | CD10+, CD19+, CD20+, CD21+, CD22+, CD23-, CD24-, CD32+, CD37+, CD38+, CD39-,CD40+, CD54+, CD72+, CD73-, CD75+, CD77+, CD81+, CD82+, CD83-, CD84+, CD86+ |
---|---|
Karyotype | 46, bijna diploïd |
Kweekmethoden voor Daudi-cellijnen
Kweekmedium | RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Subcultuur | Houd culturen in stand door regelmatig medium toe te voegen of te vervangen. Begin culturen met een dichtheid van 2 x 10^5 cellen/ml en houd de celconcentratie binnen het bereik van 1 x 10^5 tot 1 x 10^6 cellen/ml voor optimale groei |
Dichtheid zaaien | 3 x 10^5 cellen/ml |
Vloeistofvernieuwing | 2 keer per week |
Herstel door bevriezing | Snel (48 uur) |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole van Daudi-cellen
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,y
CSF1PO: 12
D13S317: 11,12
D16S539: 10,12
D5S818: 8,13
D7S820: 8,10
TH01: 6,7
TPOX: 8,11
vWA: 15,17
D3S1358: 16,18
D21S11: 34,35
D18S51: 16,18
Penta E: 7,9
Penta D: 10,12
D8S1179: 14
FGA: 21,26
D19S433: 12,14
|
HLA-allelen |
A*: 01:02, 02.01.1900 18:01
B*: 02.01.1900 10:01, 02.01.1900 10:02
C*: 03:02:02, 06:02:01
DRB1*: 13:01:01, 13:02:01
DQA1*: 01:02:01, 01:03:01
DQB1*: 06:02:01, 06:04:01
DPB1*: 02:01:02, 106:01
E: 01:03:02, 01:03:05
|
Benodigde producten
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
In eerste instantie ontworpen om de groei van menselijke leukemische cellen in zowel suspensie
- als monolaagculturen te ondersteunen, is RPMI 1640 Medium door aanpassingen door onderzoekers en commerciële leveranciers geëvolueerd tot een medium dat geschikt is voor een breed scala aan zoogdiercellen. Het is uitzonderlijk compatibel met cellijnen zoals HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyten en carcinomen.
RPMI 1640 Medium onderscheidt zich van andere celkweekmedia door zijn unieke samenstelling. Het bevat een aanzienlijke hoeveelheid fosfaat, aminozuren en vitaminen. Het bevat met name biotine, vitamine B12 en PABA, die afwezig zijn in Eagle's Minimal Essential Medium of Dulbecco's Modified Eagle Medium. Bovendien vertoont RPMI 1640 Medium significant verhoogde concentraties vitamine inositol en choline. Het bevat echter geen eiwitten, lipiden of groeifactoren. Daarom is aanvulling met 10% foetaal runderserum (FBS) vaak nodig om optimale omstandigheden voor celgroei te creëren.
Het buffersysteem van RPMI 1640 Medium is gebaseerd op natriumbicarbonaat (2,0 g/L) en vereist een omgeving met 5-10% CO2 om een fysiologisch geschikte pH te handhaven. De toevoeging van het reductiemiddel glutathion onderscheidt dit medium verder van andere.
Dit RPMI 1640 medium bevat 4,5 gram glucose per liter.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumnitraat x 4H2O
100,00
Watervrij magnesiumsulfaat
48,83
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
5450,00
dinatriumwaterstoffosfaat
800,49
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
4500,00
Glutathion (rood.)
1,00
HEPES
2383,00
Fenol rood
5,00
Natriumpyruvaat
110,00
Aminozuren
L-Arginine x HCl
241,86
L-Asparagine x H2O
56,82
L-Asparaginezuur
20,00
L-Cystine x 2HCl
65,19
L-Glutamine
300,00
L-Glutaminezuur
20,00
Glycine
10,00
L-Histidine x HCl x H2O
20,27
L-Hydroxyproline
20,00
L-Isoleucine
50,00
L-Leucine
50,00
L-Lysine x HCl
40,00
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
15,00
L-Proline
20,00
L-Serine
30,00
L-Threonine
20,00
L-Tryptofaan
5,00
L-Tyrosine x 2Na
28,83
L-Valine
20,00
Vitaminen
p-Aminobenzoëzuur
1,00
D-(+)-Biotine
0,20
D-Calcium pantothenaat
0,25
Choline chloride
3,00
Foliumzuur
1,00
myo-Inositol
35,00
Nicotinamide
1,00
Pyridoxine x HCl
1,00
Riboflavine
0,20
Thiamine x HCl
1,00
Vitamine B12
0,01
NaHCO3
1500,00
In eerste instantie ontworpen om de groei van menselijke leukemische cellen in zowel suspensie
- als monolaagculturen te ondersteunen, is RPMI 1640 Medium door aanpassingen door onderzoekers en commerciële leveranciers geëvolueerd tot een medium dat geschikt is voor een breed scala aan zoogdiercellen. Het is uitzonderlijk compatibel met cellijnen zoals HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyten en carcinomen.
RPMI 1640 Medium onderscheidt zich van andere celkweekmedia door zijn unieke samenstelling. Het bevat een aanzienlijke hoeveelheid fosfaat, aminozuren en vitaminen. Het bevat met name biotine, vitamine B12 en PABA, die afwezig zijn in Eagle's Minimal Essential Medium of Dulbecco's Modified Eagle Medium. Bovendien vertoont RPMI 1640 Medium significant verhoogde concentraties vitamine inositol en choline. Het bevat echter geen eiwitten, lipiden of groeifactoren. Daarom is aanvulling met 10% foetaal runderserum (FBS) vaak nodig om optimale omstandigheden voor celgroei te creëren.
Het buffersysteem van RPMI 1640 Medium is gebaseerd op natriumbicarbonaat (2,0 g/L) en vereist een omgeving met 5-10% CO2 om een fysiologisch geschikte pH te handhaven. De toevoeging van het reductiemiddel glutathion onderscheidt dit medium verder van andere.
De unieke samenstelling van deze RPMI formulering bevat 2,1 mM stabiele glutamine, 2,0 gram per liter NaHCO3 en fenolrood.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumnitraat x 4H2O
100,00
Watervrij magnesiumsulfaat
48,83
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
5,950.00
dinatriumwaterstoffosfaat
800,49
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
2,000.00
Glutathion (rood.)
1,00
Fenol rood
5,00
NaHCO3
2,000.00
Aminozuren
L-Arginine x HCl
241,86
L-Asparagine x H2O
56,82
L-Asparaginezuur
20,00
L-Cystine x 2HCl
65,19
L-Alanyl-L-Glutamine
447,00
L-Glutaminezuur
20,00
Glycine
10,00
L-Histidine x HCl x H2O
20,27
L-Hydroxyproline
20,00
L-Isoleucine
50,00
L-Leucine
50,00
L-Lysine x HCl
40,00
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
15,00
L-Proline
20,00
L-Serine
30,00
L-Threonine
20,00
L-Tryptofaan
5,00
L-Tyrosine x 2Na
28,83
L-Valine
20,00
Vitaminen
p-Aminobenzoëzuur
1,00
D-(+)-Biotine
0,20
D-Calcium pantothenaat
0,25
Choline chloride
3,00
Foliumzuur
1,00
myo-Inositol
35,00
Nicotinamide
1,00
Pyridoxine x HCl
1,00
Riboflavine
0,20
Thiamine x HCl
1,00
Vitamine B12
0.005
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00