HEK293-CTLA4細胞

Name: CLS Cell Lines Service GmbH
Address: Dr.-Eckener-Straße 8, Eppelheim, 69214, DE
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製品番号 305423

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第三者協定

説明	免責事項：細胞株の表示価格は非営利目的のお客様専用です。営利団体を代表される方は、代替価格についてお問い合わせください。 HEK293-CTLA4細胞株は、CTLA4レセプターを中低レベル（細胞あたり約4,000分子）で発現するように操作された安定な組換えHEK293細胞株です。この細胞株は、インスクリーネックスのランディングパッド技術を用いて開発され、あらかじめ検証された特定のゲノム遺伝子座にCTLA4遺伝子を正確かつ再現性よく組み込むことができる。CD152としても知られるCTLA4は、T細胞の活性化を制御する上で重要な役割を果たす免疫チェックポイント・タンパク質である。CTLA4は、抗原提示細胞上のB7分子（CD80とCD86）への結合において刺激受容体CD28と競合することにより、免疫応答をダウンレギュレートし、自己寛容を維持し、自己免疫を予防する。CTLA4はがん免疫療法における重要な標的であり、特にイピリムマブのような薬剤は、このチェックポイントを阻害してT細胞を活性化することにより抗腫瘍免疫を増強することを目的としている。この細胞株におけるCTLA4の発現は、標的特異的抗体を用いたフローサイトメトリーを用いて確認され、細胞集団全体にわたって信頼性の高い一貫したレセプター密度が確保された。
生物	人間
組織	胎児腎臓

年齢	胎児
性別	女性
形態学	上皮様
成長特性	単分子膜、付着性

引用	HEK293-CTLA4（Cytion カタログ番号 305423）
バイオセーフティレベル	1
NCBI_TaxID	9606
GMOステータス	GMO-S1：このHEK293変異体には、免疫チェックポイント研究用のCTLA-4発現コンストラクトが含まれています。この分類はドイツ国内でのみ適用されます。

発現する受容体	CTLA4 (CD152)

培地	RPMI1640、w：2.0mM安定グルタミン、w：2.0g/L NaHCO3（Cytion article number 820700a）
サプリメント	培地に10% FBS、1mM ピルビン酸ナトリウム、10mM HEPES、1% NEAAを添加する。最終濃度が1 mg/mLになるようにGeneticin（G418-Sulfat）を加える。
解離試薬	トリプシン-EDTA
サブカルチャー	通常の接着細胞培養の場合：付着細胞から古い培地を吸引し、PBSで洗浄して残存培地を除去する。PBSを吸引した後、培養容器のサイズに応じて適切な量のTrypsin/EDTA溶液を加え（例えば、T25フラスコなら1ml、T75フラスコなら3ml）、細胞が剥離するまで（5～10分）室温または37℃でインキュベートする。顕微鏡で剥離を観察し、必要に応じて容器を軽くたたいて細胞を離す。いったん剥離したら、完全培地を加えてTrypsin/EDTAを失活させ、細胞を静かに再懸濁し、細胞懸濁液のアリコートを新しい培地の入った新しい培養容器に移す。容器を37℃、5％_CO2に設定したインキュベーターに入れ、2～3日ごとに培地を交換する。
分割比率	A ratio of 1:2 is recommended for the initial split after thawing. A ratio of 1:5 to 1:10 is recommended for routine culture.
フルード更新	週2～3回
解凍後の回復	解凍後、T25フラスコに1：2～1：3の割合で細胞を分割し、凍結から細胞を回復させ、少なくとも24時間接着させる。解凍後の細胞の接着と生存率を最良にするため、凍結回復後の最初の播種にはコラーゲンコートしたフラスコまたはプレートを使用することを推奨します。その後の細胞のルーチン培養には、コラーゲンコーティングは必要ありません。
フリーズ・ミディアム	凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地（FBSを含む）＋10％DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1（Cytionカタログ番号800100）を使用している。
細胞の解凍と培養	輸送中の最適温度を維持するため、細胞はドライアイスで輸送される。凍結バイアルを受け取ったら、細胞の完全性を保つために-150℃以下で直ちに保存するか、直ちに培養が必要な場合はステップ3に進む。直ちに培養する場合は、バイアルを清浄な水と抗菌剤を入れた37℃のウォーターバスに浸し、小さな氷の塊が残るまで40～60秒間静かに攪拌して速やかに融解する。凍結バイアルを開封する前に70％エタノールで消毒する。消毒したバイアルを注意深く開け、細胞懸濁液を8mlの室温培養液を入れた15ml遠心チューブに移し、穏やかに混ぜる。混合物を300 x gで3分間遠心して細胞を分離し、残留凍結培地を含む上清を注意深く捨てる。細胞ペレットを10mlの新しい培養液に静かに懸濁する。接着細胞の場合は、懸濁液を2つのT25培養フラスコに分け、懸濁培養の場合は、細胞の相互作用と増殖を効果的に促進するために、全ての培地を1つのT25培養フラスコに移す。細胞株の継続的な増殖と維持のため、確立された継代培養プロトコールに従い、信頼できる実験結果を確保する。
インキュベーションの雰囲気	37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。
フラスコ・コーティング	解凍後の最適な接着と生存率を得るためには、コラーゲンコートフラスコまたはプレートの使用を推奨する。
凍結手順	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
配送条件	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
保管条件	長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

不妊症	マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査を受けている。

この細胞株は、第三者との契約が必要であるため、標準的なサイシオンのMTAでは入手できないことにご注意ください。

HEK293-CTLA4細胞

一般情報

特徴

規制データ

生体分子データ

ハンドリング

品質管理／遺伝子プロファイル／HLA

第三者協定