U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 sejtek
800,00 EUR*
A termékeket fagyasztva, szárazjégen, kriogenikus csövekben szállítjuk. Minden kriogenikus cső általában 3 × 10 6 sejtet tartalmaz adhezív vonalak esetében, vagy 5 × 106 sejtet szuszpenziós vonalak esetében (a részleteket lásd a tétel CoA-jában).
Általános információk
| Leírás | Az U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 egy genomszerkesztett humán osteosarcoma sejtvonal, amely U2OS sejtekből származik, és amelyben az endogén SEH1L (SEH1) gént CRISPR/Cas9 technológiával módosították, hogy egy in-frame SNAPf tagot kódoljon. Az SEH1 a Y-komplex (más néven NUP107-160 komplex) egyik komponense, amely a nukleáris póruskomplex (NPC) központi szerkezeti modulja, és hozzájárul a pórusváz szerkezetének összeállításához és stabilitásához. A SNAPf kódoló szekvencia beillesztésével az endogén lókuszba a címkézett SEH1 fehérje natív szabályozó kontroll alatt expresszálódik, megőrizve a fiziológiai expressziós szinteket és minimalizálva a nukleáris pórus összetételének zavarait. A SNAPf tag a SNAP-tag egy módosított, gyorsan reagáló változata, amely kovalens kötéssel kapcsolódik a benzilguanin-konjugált szubsztrátokhoz, lehetővé téve a szelektív és stabil fluoreszcens jelölést élő vagy fixált sejtekben. Az U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 sejtekben a fúziós fehérje az NPC eloszlására jellemző pontszerű mintázatban lokalizálódik a magmembránban. Mivel a jelölés endogén fehérjeszinteken történik, ez a rendszer kiválóan alkalmas kvantitatív fluoreszcens mikroszkópiára, szuperfelbontású képalkotásra és egyrészecske-követési elemzésekre, amelyek célja az NPC szerveződésének és sztöchiometriájának feltárása. Az U2OS sejtek lapos morfológiája és nagy magjai tovább megkönnyítik a magmembrán struktúráinak nagy felbontású vizualizálását. A SEH1 részt vesz az NPC biogenezisében, és szerepet játszik a mitózis során a kinetokórhoz kapcsolódó folyamatokban is. Ennek megfelelően ez a sejtvonal robusztus platformot biztosít a sejtciklus-függő NPC összeszerelésének és szétszerelésének, a Y-komplex térbeli szerveződésének a pórusvázon belül, valamint a SEH1 potenciális kettős szerepének a sejtmembránon és a mitotikus kinetokórokon történő vizsgálatához. Az U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 lehetővé teszi a nukleáris pórusok szerkezetének és dinamikájának mechanisztikus vizsgálatát fiziológiailag releváns expressziós körülmények között. |
|---|---|
| Szervezet | Emberi |
| Szövet | Csont |
| Betegség | Osteosarcoma |
Jellemzők
| Kor | 15 év |
|---|---|
| Gender | Női |
| Etnicitás | Kaukázusi |
| Morfológia | Epithelszerű |
| Növekedési tulajdonságok | Adherent |
Szabályozási adatok
| Idézet | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytion katalógusszám 300664) |
|---|---|
| Biológiai biztonsági szint | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Betétes | Az Ellenberg Labor (EMBL) |
| GMO-státusz | GMO-S1: Ez a humán osteosarcoma sejtvonal (U2OS-CRISPR-CRISPR-SNAPf-SEH1) egy CRISPR-közvetített SNAPf-SEH1 fúziót tartalmaz, amely lehetővé teszi a SEH1 nukleoporin szelektív jelölését. A módosítás stabilan jelen van. Ez az osztályozás csak Németországban érvényes, máshol ettől eltérhet. |
Biomolekuláris adatok
| Fehérje expresszió | SEH1, SNAPf-tag |
|---|
A kezelése
| Kultúrközeg | McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükóz, w: stabil glutamin, w: 2,0 mM nátrium-piruvát, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion cikkszám: 820200a) |
|---|---|
| Kiegészítők | A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel, 3,0 g/L glükózzal, stabil glutaminnal, 2,0 mM nátrium-piruváttal, 2,2 g/L NaHCO3-mal, 1% NEAA-val |
| Dissociációs reagens | Accutase |
| Szubkultúrázás | Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak. |
| Fagyasztási közeg | Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében. |
| A sejtek felolvasztása és tenyésztése |
|
| Inkubációs légkör | 37°C, 5%CO2, párásított légkör. |
| Lombik bevonat | A felolvasztás utáni optimális kötődés és életképesség érdekében kollagénnel bevont lombikok vagy lemezek használatát javasoljuk. |
| Fagyasztási eljárás | A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre. |
| Szállítási feltételek | A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre. |
| Tárolási feltételek | Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt. |
Minőségellenőrzés / Genetikai profil / HLA
| Sterilitás | A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják. A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá. |
|---|