Cellules Sf9
Informations générales
Description | Les cellules Sf9 sont des isolats clonaux dérivés de la lignée cellulaire Sf21 de Spodoptera frugiperda (IPLB-Sf-21-AE). Elles sont couramment utilisées dans la culture de cellules d'insectes pour la production de protéines recombinantes à l'aide de systèmes d'expression de baculovirus. Les cellules Sf9 ont une morphologie épithéliale et ont été clonées à partir du tissu ovarien pupal de la chenille légionnaire d'automne. L'une des principales caractéristiques des cellules Sf9 est leur taille réduite et régulière, idéale pour la formation de monocouches et de plaques. Elles conviennent également à la transfection, à l'analyse/purification de plaques, à l'amplification de stocks à haut titre et à l'expression de protéines recombinantes. La lignée cellulaire d'insecte Sf9 peut être maintenue en cultures attachées et en suspension, et ne nécessite pas de sérum ou de CO2 pour se développer. Elles sont considérées comme des cellules de niveau de biosécurité 1 et sont généralement cultivées dans un incubateur à 26-28 degrés Celsius. Les systèmes d'expression des cellules Sf9/baculovirus sont largement utilisés pour l'expression de protéines de haut niveau, souvent à des fins de purification, mais les protéines peuvent également être exprimées de manière fonctionnelle dans l'environnement défini des cellules Sf9. La taille des cellules Sf9 infectées est généralement de 17 à 30 microns de diamètre. La lignée cellulaire Sf9 se distingue de la lignée cellulaire Sf21 par le fait qu'il s'agit d'un isolat clonal de taille plus petite et plus régulière, alors que les cellules Sf21 sont de taille plus disparate et forment des monocouches et des plaques plus irrégulières. Certaines lignées cellulaires Sf9 peuvent héberger un rhabdovirus à sens négatif appelé Spodoptera frugiperda rhabdovirus (SfRV), bien que toutes les cellules Sf9 testées ne semblent pas être infectées par ce virus. La taille du génome de Sf9 a été estimée à 451 Mbp avec un contenu G+C de 36,53%. |
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Organisme | Légionnaire d'automne |
Tissus | Ovaire |
Applications | Transfection, dosage/purification des plaques, amplification des stocks à haut titre et expression des protéines recombinantes |
Synonymes | SF9, sf9, SF-9, Sf-9, sf-9, Sf 9, Spodoptera frugiperda clone 9, Sf clone 9, IPLB-Sf-9AE, IPLB-SF-9AE, IPLB-SF-9, IPLB-Sf-9, IPLB-Sf9 |
Caractéristiques
L'âge | Stade nymphal |
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Genre | Femme |
Morphologie | Ronde, attachée, épithéloïde |
Propriétés de croissance | Monocouche, adhérente |
Identifiants / Biosécurité / Citation
Citation | Sf9 (numéro de catalogue Cytion 604328) |
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Niveau de biosécurité | 1 |
Expression / Mutation
Sensibilité aux virus | Baculovirus, Autographa californica (MNPV), encéphalite de Saint-Louis (ELS) |
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Manipulation
Milieu de culture | Spodopan (PAN Biotech) |
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Suppléments moyens | Compléter le milieu avec 2 % de FBS pour augmenter la prolifération si nécessaire |
Solution de passage | Accutase |
Sous-culture | Il est recommandé de détacher les cellules à l'aide d'un grattoir. Recueillir le milieu avec les cellules détachées après le raclage dans un tube à centrifuger de 15 ml. Ajouter environ 5 ml de milieu dans le flacon et rincer le flacon plusieurs fois pour collecter les cellules restantes et les combiner avec le reste des cellules dans le tube. Centrifuger pendant 3 minutes à 300xg, éliminer le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et froid et les répartir dans de nouveaux flacons. |
Taux de fractionnement | Pour les deux premières sous-cultures, un rapport de 1:3 à 1:5 est recommandé. Dans les sous-cultures suivantes, les cellules peuvent être divisées dans un rapport de 1:10 à 1:20 |
Densité de semis | 1 x 10^4 cellules/cm^2. Incuber entre 26 et 30 degrés Celsius dans un incubateur non humidifié, régulé par l'air ambiant. Utiliser des flacons de culture cellulaire avec des bouchons filtrants ou desserrer les bouchons pour permettre l'échange d'oxygène. |
Renouvellement des fluides | 2 à 3 fois par semaine |
Congélation du milieu | CM-1 (numéro de catalogue Cytion 800100) ou CM-ACF (numéro de catalogue Cytion 806100) |
Manipulation des cultures cryoconservées |
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Contrôle de qualité / Profil génétique / HLA
Stérilité | La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence. Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes. |
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Profil STR |
Amélogénine: x,x
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Required products
Dans la recherche biologique, la cryoconservation des cellules de mammifères est un outil inestimable. La conservation réussie des cellules est une priorité absolue, car la perte d'une lignée cellulaire en raison d'une contamination ou de mauvaises conditions de stockage entraîne une perte de temps et d'argent, ce qui retarde en fin de compte les résultats de la recherche. Une fois les cellules transférées d'un milieu de croissance cellulaire à un milieu de congélation, elles sont généralement congelées à une vitesse régulée et stockées dans de la vapeur d'azote liquide ou à une température inférieure à -130°C dans un congélateur mécanique. Le milieu de congélation CM-ACF permet la cryoconservation des cellules à une température inférieure à -130°C (ou dans l'azote liquide), ce qui élimine essentiellement le besoin d'un congélateur ultra-bas supplémentaire et coûteux, ainsi que les processus de congélation à vitesse contrôlée, longs et exigeants. Il suffit de prélever les cellules, d'aspirer le milieu de croissance, de les remettre en suspension dans le CM-ACF, de les transférer dans un cryovial et de conserver le flacon à une température inférieure à -130 °C.
Longue durée de conservation
CM-ACF est un milieu de cryoconservation sans sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Des centaines de chercheurs font confiance au CM-ACF
Notre milieu de congélation cellulaire sans sérum CM-ACF est un produit leader sur le marché en Allemagne et en Europe et se distingue par de nombreuses publications impliquant des centaines de lignées cellulaires différentes dans le monde entier. Nous l'avons testé avec plus de 1000 lignées cellulaires issues de notre banque de cellules propriétaire.
Ingrédients optimisés sans sérum
CM-ACF ne contient pas de produits à base de sérum. Les milieux de cryoconservation contenant du sérum présentent l'inconvénient d'avoir des taux de récupération fluctuants et une composition peu claire. Étant donné que la composition et la concentration des protéines et autres composants biologiques varient d'un lot à l'autre dans le sérum, la reproductibilité des expériences avec des cellules congelées dans un milieu contenant du sérum peut être compromise. Comme chaque composant de CM-ACF est soigneusement défini, vous pouvez être assuré que les cellules se rétablissent toujours à l'identique.
Contient du DMSO, du glucose, des sels
Pouvoir tampon pH = 7,2 à 7,6
Universel
- même pour la préservation des cellules souches
Toutes les lignées cellulaires courantes peuvent être congelées et décongelées pour obtenir de nombreuses cellules viables. Par rapport aux milieux standard, le taux de récupération des cellules, même les plus délicates, est nettement plus élevé. En utilisant CM-ACF, nous conservons plus de 1000 lignées cellulaires différentes avec un succès exceptionnel.
Applications et validation
Les cellules conservées dans notre milieu de congélation CM-ACF peuvent être utilisées pour le comptage, la viabilité et la cryoconservation des cellules, la culture cellulaire, la culture de cellules de mammifères, l'analyse de l'expression génétique et le génotypage, la transcription in vitro et les réactions en chaîne par polymérase. L'efficacité de chaque lot est évaluée sur des cellules CHO-K1. Chaque lot est soumis à des tests de pH, d'osmolalité, de stérilité et d'endotoxines afin de garantir une qualité élevée.
Dans la recherche biologique, la cryoconservation des cellules de mammifères est un outil inestimable. La conservation réussie des cellules est une priorité absolue, car la perte d'une lignée cellulaire en raison d'une contamination ou de mauvaises conditions de stockage entraîne une perte de temps et d'argent, ce qui retarde en fin de compte les résultats de la recherche. Une fois les cellules transférées d'un milieu de croissance cellulaire à un milieu de congélation, elles sont généralement congelées à une vitesse régulée et stockées dans de la vapeur d'azote liquide ou à une température inférieure à -130°C dans un congélateur mécanique. Le milieu de congélation CM-1 permet la cryoconservation des cellules à une température inférieure à -130°C (ou dans l'azote liquide), ce qui élimine essentiellement le besoin d'un congélateur ultra-bas supplémentaire et coûteux, ainsi que les processus de congélation à vitesse contrôlée, longs et exigeants. Il suffit de prélever les cellules, d'aspirer le milieu de croissance, de les remettre en suspension dans le CM-1, de les transférer dans un cryovial et de conserver le flacon à une température inférieure à -130 °C.
Longue durée de conservation
CM-1 est un milieu de cryoconservation contenant du sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Des centaines de chercheurs lui font confiance
Notre milieu de congélation cellulaire CM-1 est un produit leader sur le marché en Allemagne et en Europe et se distingue par de nombreuses publications impliquant des centaines de lignées cellulaires différentes dans le monde entier. Nous l'avons testé avec plus de 1000 lignées cellulaires issues de notre banque de cellules propriétaire.
Ingrédients optimisés
CM-1 contient des produits sériques. Les milieux de cryoconservation contenant du sérum protègent de manière optimale les cellules pendant leur congélation et présentent l'avantage d'un taux de récupération élevé. CM-1 ayant été testé avec une multitude de lignées cellulaires, vous pouvez être assuré que vos cellules se rétablissent toujours bien.
Contient du FBS, du DMSO, du glucose et des sels
Pouvoir tampon pH = 7,2 à 7,6
Applications et validation
Les cellules conservées dans notre milieu de congélation CM-1 peuvent être utilisées pour le comptage cellulaire, la viabilité et la cryoconservation, la culture cellulaire, la culture de cellules de mammifères, l'analyse de l'expression génique et le génotypage, la transcription in vitro et les réactions en chaîne par polymérase. L'efficacité de chaque lot est évaluée sur des cellules CHO-K1. Chaque lot est soumis à des tests de pH, d'osmolalité, de stérilité et d'endotoxines afin de garantir une qualité élevée.
- Une alternative douce à la trypsine
Accutase est une solution de détachement cellulaire qui révolutionne l'industrie de la culture cellulaire. Il s'agit d'un mélange d'enzymes protéolytiques et collagénolytiques qui imite l'action de la trypsine et de la collagénase. Contrairement à la trypsine, Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est beaucoup plus doux pour les cellules, ce qui en fait une solution idéale pour le détachement de routine des cellules du matériel plastique de culture tissulaire standard et du matériel plastique à revêtement adhésif. Dans cet article de blog, nous allons explorer les avantages et les utilisations d'Accutase et la façon dont il change la donne dans la culture cellulaire.
Avantages d'Accutase
Accutase présente plusieurs avantages par rapport aux solutions de trypsine traditionnelles. Tout d'abord, il peut être utilisé chaque fois qu'un détachement doux et efficace d'une lignée cellulaire adhérente est nécessaire, ce qui en fait un substitut direct à la trypsine. Deuxièmement, Accutase fonctionne extrêmement bien sur les cellules souches embryonnaires et neuronales, et il a été démontré qu'il maintient la viabilité de ces cellules après le passage. Troisièmement, Accutase préserve la plupart des épitopes pour une analyse ultérieure par cytométrie de flux, ce qui la rend idéale pour l'analyse des marqueurs de la surface cellulaire.
En outre, il n'est pas nécessaire de neutraliser Accutase lors du passage des cellules adhérentes. L'ajout de milieu après la séparation des cellules dilue Accutase de sorte qu'elle n'est plus en mesure de détacher les cellules. Ceci élimine le besoin d'une étape d'inactivation et permet aux techniciens de culture cellulaire de gagner du temps. Enfin, Accutase n'a pas besoin d'être aliquoté et un flacon est stable au réfrigérateur pendant 2 mois.
Applications d'Accutase
Accutase remplace directement la solution de trypsine et peut être utilisé pour le passage des lignées cellulaires. En outre, Accutase donne de bons résultats lors du détachement de cellules pour l'analyse de nombreux marqueurs de surface cellulaire par cytométrie de flux et pour le tri cellulaire. D'autres applications en aval du traitement par Accutase comprennent l'analyse des marqueurs de surface cellulaire, les essais de croissance virale, la prolifération cellulaire, les essais de migration des cellules tumorales, le passage de routine des cellules, l'augmentation de la production (bioréacteur) et la cytométrie de flux.
Composition d'Accutase
Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est un mélange enzymatique naturel avec une activité enzymatique protéolytique et collagénolytique. Il est formulé à une concentration beaucoup plus faible que la trypsine et la collagénase, ce qui le rend moins toxique et plus doux, mais tout aussi efficace.
Efficacité d'Accutase
Accutase s'est avéré efficace pour détacher les cellules primaires et les cellules souches et maintenir une viabilité cellulaire élevée par rapport aux enzymes d'origine animale telles que la trypsine. 100 % des cellules sont récupérées après 10 minutes, et il n'y a aucun inconvénient à laisser les cellules dans Accutase jusqu'à 45 minutes, grâce à l'autodigestion d'Accutase.
En résumé
En conclusion, Accutase est une solution puissante qui change la donne dans le domaine de la culture cellulaire. Grâce à sa nature douce, son efficacité et sa polyvalence, Accutase est l'alternative idéale à la trypsine. Si vous recherchez une solution fiable et efficace pour le détachement cellulaire, Accutase est la solution qu'il vous faut.
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon polyvalente utilisée dans de nombreuses applications biologiques et chimiques, ainsi que dans le traitement des tissus. Notre solution PBS est formulée avec des ingrédients de haute qualité pour garantir un pH constant pendant les expériences. L'osmolarité et les concentrations ioniques de notre solution PBS correspondent à celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.
Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KCl, 8 mM de Na2HPO4 et 2 mM de KH2PO4. Nous avons choisi cette composition sur la base des protocoles du CSHL et de Molecular cloning by Sambrook, qui sont des normes bien établies dans la communauté des chercheurs.
Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour une large gamme d'applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent idéale pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Notre solution PBS avec EDTA peut également être utilisée pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, il est important de noter que les métaux divalents tels que le zinc ne peuvent pas être ajoutés au PBS, car cela peut entraîner une précipitation. Dans ce cas, il est recommandé d'utiliser les tampons Good's. En outre, notre solution PBS s'est avérée être une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage de virus à ARN, tels que le SARS-CoV-2.
Stockage de notre solution PBS
Notre solution PBS peut être conservée à température ambiante, ce qui en facilite l'utilisation et l'accès.
En résumé
En résumé, notre solution PBS est un composant essentiel dans de nombreuses expériences biologiques et chimiques. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent adaptée à de nombreuses applications, de la culture cellulaire au milieu de transport viral. En choisissant notre solution PBS de haute qualité, les chercheurs peuvent optimiser leurs expériences et garantir des résultats précis et fiables.
Composition du PBS
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de potassium
200,00
Phosphate de potassium dihydrogène
200,00
Chlorure de sodium
8,000.00
hydrogénophosphate de di-sodium anhydre
1,150.00