KC-rakud
Üldine teave
| Kirjeldus | KC (Kc167) on Drosophila melanogaster’i embrüonaalne rakuliin, mis on saadud seljaosa sulgumisstaadiumis oleva emase embrüo rakkudest ning registreeritud Cellosaurus’es koodiga CVCL_Z833. See liin loodi algselt ja seda on laialdaselt kasutatud Drosophila rakubioloogias, geneetilistes sõelumistes ja funktsionaalses genoomikas. Kc167 rakud on SV40 abil immortaliseeritud ja kasvavad poolkinnitunult, moodustades segapopulatsiooni kinnitunud ja vabalt ujuvatest rakkudest. Need kuuluvad kõige paremini iseloomustatud Drosophila rakuliinide hulka ja alluvad täielikult RNAi-vahendatud geenide vaigistamisele, mis teeb neist selgrootute bioloogias genoomiüleste RNAi sõelumiste nurgakivimudeli. KC-rakke saab kasutada Drosophila rakubioloogias, genoomiülestes RNAi- ja CRISPR-sõelumistes, signaaliülekande radade uuringutes (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), kaasasündinud immuunsuse uurimisel ning evolutsiooniliselt säilinud radade võrdlevates uuringutes. Täielikult sekveneeritud ja annotatsioonidega varustatud Drosophila genoom koos ulatuslike avalikult kättesaadavate RNAi-reaktiivide andmebaasidega (nt DRSC/TRiP) muudab KC-rakud eriti võimsaks vahendiks erapooletuks funktsionaalse genoomika avastuste tegemiseks. SV40-ga immortaliseerimise tõttu kehtib BSL-2 klassifikatsioon. KC-rakke kasvatatakse Schneideri Drosophila-kasvatuskeskkonnas, millele on lisatud 2 mM glutamiini ja 10% FBS-i. Oluline on, et Drosophila rakuliine kasvatatakse 25 °C juures ümbritsevas õhus ilma CO₂-ta (mitte 37 °C juures / 5% CO₂-ga, nagu imetajate rakkude puhul). Rakke passitakse õrnalt resuspendeerimise ja lahjendamise teel (pooladherentne kasv). Kasvukeskkonda uuendatakse või rakke lahjendatakse iga 2–3 päeva järel. |
|---|---|
| Organism | Drosophila melanogaster (puuviljakärbes) |
| Kude | Embrüo |
| Haigus | Tavaline |
| Metastaatiline koht | Embrüo (seljaosa sulgumise etapp) |
| Rakendused | Drosophila rakubioloogia; genoomiüleseid RNAi-sõelumisi; CRISPR-sõelumisi; signaaliülekannet (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); kaasasündinud immuunsust; selgrootute funktsionaalset genoomikat |
| Sünonüümid | KC, K C |
Omadused
| Vanus | Seljaosa sulgemise etapp |
|---|---|
| Sugu | Naised |
| Morfoloogia | Poolkinnitunud epiteelilaadne |
| Raku tüüp | Embrüonaalsed rakud |
| Kasvuomadused | poolkinnitav |
Regulatiivsed andmed
| Tsitaat | KC (Cytioni katalooginumber 300604) |
|---|---|
| Bioturvalisuse tase | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosaurusAccession | CVCL_Z833 |
| GMOde staatus | GMO-S2: See Drosophila rakuliin sisaldab stabiilselt integreeritud SV40-immortaliseerimiskassetti. Nõutav on BSL-2 ohutustaseme järgimine. See klassifikatsioon kehtib ainult Saksamaal ja võib mujal erineda. |
Biomolekulaarsed andmed
| Viiruse vastuvõtlikkus | SV40-viirusega surematuks muudetud |
|---|
Töötlemine
| Kultuurikeskkond | Schneideri Drosophila kasvukeskkond + 2 mM glutamiin + 10% loote veise seerum (FBS). |
|---|---|
| Täiendused | Lisage kasvukeskkonnale 2 mM glutamiini ja 10% FBS-i |
| Dissotsiatsioonireaktiiv | Ei ole vajalik (poolkinnitunud; segage õrnalt uuesti lahustuma) |
| Aja kahekordistamine | umbes 24–48 tundi |
| Subkultuuride kasvatamine | Pipeteerige kultuuri ettevaatlikult, et poolkinnitunud rakud uuesti suspendeerida. Kandke sobiv kogus uude kolbi ja lisage värsket, eelsoojendatud Schneideri keskkonda. Lahjendage tiheduseni 5 × 10⁵ kuni 1 × 10⁶ rakku/ml. Inkubeerige 25 °C juures õhu käes ilma CO₂-ta. |
| Jagatud suhe | 1–3 |
| Külvi tihedus | 5 × 10⁵ kuni 1 × 10⁶ rakku/ml |
| Vedeliku uuendamine | Iga 2 kuni 3 päeva tagant |
| Külmutage keskkond | Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi. |
| Rakkude sulatamine ja kultiveerimine |
|
| Inkubatsiooni atmosfäär | 25 °C, ümbritsev õhk (CO₂-d ei ole vaja). |
| Veotingimused | Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi. |
| Ladustamistingimused | Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist. |
Kvaliteedikontroll ja molekulaaranalüüs
Materjali üleandmise leping
Kui kavatsete Cytioni rakuliine kasutada ainult ühe uurimisasutuse sisemisteks uuringuteks, täitke ja allkirjastage meie materjalide üleandmise leping (MTA) ning saatke see koos tellimusega.
Kõigi kommertsrakenduste puhul – sealhulgas, kuid mitte ainult tasuliste teenuste osutamine, kvaliteedikontrolli testid, toote turuleviimine, diagnostiline kasutamine või regulatiivsed uuringud – täitke palun kavandatud kasutusvorm, et saaksime koostada teie projektile sobiva lepingu.
Pange tähele: MTA kehtib ainult teatud rakuliinide puhul. Kui see teade ja MTA dokument on toote lehel, kehtib leping. Rakuliinide puhul, mis ei ole MTAga hõlmatud, ei näidata viidet lepingule. MTA ei kehti Ameerika, Hiina ega Taiwani klientide puhul. Palun võtke ühendust meie Ameerika Ühendriikide üksusega, et saada sobiv leping.