HaCaT rakud
Olulised faktid Hacati rakkude kohta
| Kirjeldus | HaCaT-rakud on dermatoloogiliste uuringute keskne mudel, mis annab ülevaate naha bioloogia ja patoloogia keerulistest mehhanismidest. Spontaanselt immortaliseeritud HaCaT rakuliin on saadud täiskasvanud inimese epidermise rakkudest ja säilitab võime proliferatsiooniks ja diferentseerumiseks, sarnaselt basaalsete keratinotsüütidega in vivo. HaCaT rakud on usaldusväärne platvorm epidermise diferentseerumisprotsessi uurimiseks ja naha terviklikkuse säilitamiseks oluliste epidermise diferentseerumise markerite uurimiseks. HaCaT-rakkude vastuvõtlikkust apoptoosile ja nende tundlikkust apoptoosi indutseerivate ainete suhtes on põhjalikult uuritud, eriti seoses tsütotoksiliste ainetega, nagu RIPL. Teadlased hindavad nende ainete tsütotoksilisust ja tsütotoksilisuse ulatust HaCaT-rakkude abil, kasutades rakumuutuste visualiseerimiseks selliseid meetodeid nagu fluorestsentsmikroskoopia. Teadlased on kasutanud HaCaT rakke, et uurida erinevate ainete, sealhulgas antimikroobsete substraatide mõju ja nende mõju rakkude elujõulisusele. Need rakud on suurepärane substraat antimikroobsete biomaterjalide ja antimikroobsete atelokollageenisubstraatide katsetamiseks, mis on olulised naha taastamisel ja meditsiinilistes rakendustes. HaCaT epidermise liinil on oluline roll ka rakkude vananemise, tsütokiinide ja vananemise ja krooniliste haigustega seotud geeniekspressiooniprofiilide uurimisel. HaCaT rakkude transkriptsiooniprofiilid, sealhulgas κB ja mikroRNAde roll, annavad ülevaate regulatiivsetest mehhanismidest molekulaarsel tasandil. HaCaT keratinotsüütide liin, mis on epidermise keratinotsüütide omadustega, pakub sobivat süsteemi epidermise rakkude ja immuunsüsteemi vahelise keerulise koostoime, eriti keratinotsüütide rolli uurimiseks haigusseisundites. Nad võimaldavad uurida epigeneetilisi modifikatsioone ja nende mõju keratinotsüütide diferentseerumisele, sealhulgas naha barjäärifunktsiooni võtmeteguriks oleva sarvkesta moodustumisele. Kokkuvõttes on HaCaT-rakud dermatoloogilistes uuringutes asendamatu mudel, mis hõlbustab naha bioloogia ja patoloogia sügavamat mõistmist tänu nende sarnasusele basaalsete keratinotsüütidega ja nende võimele läbida rakkude kasvu ja diferentseerumist. Nende kasutamine ulatub epidermise diferentseerumise ja antimikroobse toime uurimisest kuni raku reaktsioonide, näiteks apoptoosi uurimiseni, mistõttu on nad rakubioloogia ja biomeditsiiniuuringute nurgakivi. |
|---|---|
| Organism | Inimene |
| Kude | Nahk |
Üksikasjad
| Vanus | 62 aastat |
|---|---|
| Sugu | Mees |
| Etniline kuuluvus | Kaukaasia |
| Raku tüüp | Keratinotsüüdid läbimõõduga 20-25 mikromeetrit. |
| Kasvuomadused | Kinnipeetav |
Dokumentatsioon
| Tsitaat | HaCaT (Cytioni katalooginumber 300493) |
|---|---|
| Bioturvalisuse tase | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_0038 |
HaCaT keratinotsüütide rakuliini geneetika
| Tumorigeeniline | Ei |
|---|---|
| Karyotüüp | Aneuploidne (hüpotetraploidne) |
Hacati rakuliini käitlemine
| Kultuurikeskkond | DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a) |
|---|---|
| Täiendused | Täiendada söötme 10% FBS-ga |
| Dissotsiatsioonireaktiiv | EDTA (varu: 0,05%) ja trüpsiini (varu: 0,1%) 1:1 segu tuleb valmistada iga kord enne rakkude eraldamist, kasutades Ca2+ ja Mg2+ -vaba PBS-i, et tagada füsioloogiline osmolaarsus. Valmis trüpsiini/EDTA segusid ei soovitata kasutada, kuna see võib põhjustada rakuklumpide tekkimist. Alternatiivina võib kasutada trüpsiini/EDTA asemel TrypLE Expressi (Life Technologies). Tuleb järgida tootja protokolli. |
| Aja kahekordistamine | HaCaT rakkude kahekordistumisaeg on 28 tundi. |
| Subkultuuride kasvatamine |
|
| Jagatud suhe | A ratio of 1:5 to 1:10 is recommended |
| Külvi tihedus | 1 x 104 rakku/cm2 |
| Vedeliku uuendamine | 2 korda nädalas |
| Külmutage keskkond | Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi. |
| Rakkude sulatamine ja kultiveerimine |
|
| Inkubatsiooni atmosfäär | 37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär. |
| Kolvi katmine | Optimaalse kinnitumise ja elujõulisuse tagamiseks pärast sulatamist soovitame kasutada kollageeniga kaetud koldeid või plaate. |
| Külmutamise protseduur | Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi. |
| Veotingimused | Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi. |
| Ladustamistingimused | Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist. |
Kvaliteedi tagamine
| Steriilsus | Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil. Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt. |
|---|---|
| STR-profiil |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 9,11
D13S317: 10,12
D16S539: 9,12
D5S818: 12
D7S820: 9,11
TH01: 09. Mrz
TPOX: 11,12
vWA: 16,17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
D1S1656: 11,12
D2S1338: 17,25
D12S391: 18,23
D19S433: 13,14
|
| HLA alleles |
A*: '31:01:02
B*: '40:01:02, '51:01:01
C*: '03:04:01, '15:02:01
DRB1*: '04:01:01, '15:01:01
DQA1*: '01:02:01, '03:03:01
DQB1*: '03:01:01, '06:02:01
DPB1*: '03:01:01, '04:01:01
E: '01:03:01, '01:03:02
|
Analüüsisertifikaat (CoA)
| Partii number | Sertifikaadi tüüp | Kuupäev | Kataloogi number |
|---|---|---|---|
| 300493-250324 | Analüüsitunnistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190723 | Analüüsitunnistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190124 | Analüüsitunnistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225SF | Analüüsitunnistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225 | Analüüsitunnistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-040424 | Analüüsitunnistus | 23. May. 2025 | 300493 |