SiHa-rakud – valgustades emakakaelavähi uurimistööd
SiHa-rakud on emakakaelavähi rakud, mida kasutatakse laialdaselt biomeditsiinilistes uuringutes. Need on suurepärased transfektsioonikandjad ja seetõttu sobivad geeniekspressiooni uuringuteks. Kuna need rakud on inimese päritolu ja seotud emakakaelavähiga, kasutatakse neid peamiselt vähibioloogias, viroloogias ja ravimiarenduse uuringutes.
- Kasvukeskkond
- SiHa-rakkude ideaalseks kasvatamiseks kasutatakse Eagle'i minimaalseid põhikoostisega kasvukeskkonda (EMEM), mis sisaldab 10% FBS-i, 2 mM L-glutamiini, 2,2 g/l NaHCO3 ja Earle'i tasakaalustatud soolalahust (EBSS). Kasvukeskkonda vahetatakse 2–3 korda nädalas.
- Kaksikordistumisaeg
- SiHa-rakkude kahekordistumisaeg on umbes 17 tundi.
- Kasvutüüp
- SiHa on adhesiivne rakuliin.
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — SiHa tellimine
SiHa rakkude üldised omadused ja päritolu
Rakuliini päritolu ja üldiste omaduste mõistmine on äärmiselt oluline, kuna see mõjutab selle kasutamist teie teadustöös. Selles artikli osas saate teada SiHa rakuliini päritolu, eripärasid ja palju muud: Mis on SiHa vähirakuliin? Millised on SiHa-rakkude HPV-omadused? Milline on SiHa rakuliini päritolu? Milline on SiHa morfoloogia?
- SiHa, emakakaelavähi rakuliin, saadi Aasia päritolu naise (55-aastane) esmase emakabiopsia fragmentidest, kellel oli lamerakk-vähk [1].
- SiHa rakuliinil on hüpertriploidset kariootüüpi. Enamikul rakkudel on keskmine kromosoomide arv vahemikus 69–72. Siiski on umbes 24% rakkudel modaalne kromosoomide arv 71.
- SiHa rakud on inimese papilloomiviiruse tüübi 16 suhtes positiivsed. Neis esineb umbes 1–2 HPV genoomi koopiat raku kohta [2].
- Need emakakaelavähi rakud on epiteelilise morfoloogiaga.
SiHa rakuliin: kasvatamisjuhised
Rakuliini kultiveerimine ei ole lihtne, kuni te ei tea kõiki selle kultiveerimise põhipunkte. Te peaksite teadma: milline on SiHa rakkude kahekordistumisaeg? Milline on SiHa rakkude kasvukeskkond? Kuidas kultiveerida SiHa rakuliini?
SiHa-rakkude kasvatamise põhipunktid
Kaksikustumisaeg:
SiHa rakkude kahekordistumisaeg on umbes 17 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
SiHa on adhesiivne rakuliin.
Subkultiveerimissuhe:
SiHa-rakkude subkultiveerimissuhe on 1:2 kuni 1:4. Passaazimisel loputatakse adhesiivseid rakke 1x PBS-ga. Lisatakse Accutase-lahust ja rakke inkubeeritakse 8–10 minutit toatemperatuuril. Seejärel lisatakse kasvukeskkond ja rakud tsentrifuugitakse. Rakupellet resuspendeeritakse ja rakud valatakse uude kolbi kasvatamiseks.
Kasvukeskkond:
SiHa-rakkude optimaalseks kasvatamiseks kasutatakse Eagle'i minimaalseid põhikoostisega kasvatuskeskkonda (EMEM), mis sisaldab 10% FBS-i, 2 mM L-glutamiini, 2,2 g/l NaHCO₃ ja Earle'i tasakaalustatud soolalahust (EBSS). Kasvukeskkonda vahetatakse 2–3 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
SiHa-rakke hoitakse 37 °C niisutatud inkubaatoris, kuhu juhitakse 5% CO₂.
Säilitamine:
Külmutatud SiHa emakakaelavähi rakuliini viaale säilitatakse temperatuuril alla -150 °C elektrilises sügavkülmikus või pikemaajaliseks säilitamiseks vedela lämmastiku aurufaasis.
Külmutamisprotsess ja keskkond:
SiHa-rakkude külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF külmutuskeskkonda. Rakud külmutatakse aeglase külmutamise meetodil, mis võimaldab temperatuuri langust vaid 1 °C minutis, et säilitada rakkude eluvõime.
Sulatusprotsess:
Külmutatud rakke hoitakse 37 °C veevannis 40–60 sekundit, kuni jääb alles väike jääklomp. Seejärel lisatakse värsket kasvukeskkonda ja rakke tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda kuuluvad komponendid. Rakupellet resuspendeeritakse ja rakud jaotatakse kasvatamiseks kultuurikolbi.
Bioloogilise ohutuse tase:
SiHa rakukultuuride käitlemiseks ja hooldamiseks on vajalik 1. bioloogilise ohutuse taseme labor.
SiHa rakuliini eelised ja puudused
Nagu teistelgi inimese kartsinoomi rakuliinidel, on ka SiHa-l mõned eripärad, millega kaasnevad teatud eelised ja puudused. Käesolevas artiklis oleme arutanud mõningaid olulisemaid neist.
SiHa emakakaelavähi rakuliini eelised
- Emakakaelavähi mudel
- Pärineb emakakaela lamerakk-kartsinoomist.
- Kasutatakse emakakaelavähi mehhanismide, kasvu ja arengu uurimiseks.
- Ekspresseerib geene p53+ ja pRB+, mis on seotud DNA parandamise, rakutsükli reguleerimise ja kasvajate supressiooniga.
- Tuumorigeenne potentsiaal
- SiHa-rakud on kasvajate tekitavad ja võivad alasti hiirtel esile kutsuda halvasti diferentseerunud III astme epidermoidseid kasvajaid.
- Kasutatakse in vivo vähiuuringutes ja vähivastaste ravimeetodite testimisel.
SiHa-rakkude puudused
- Paljunemise kiirus
- SiHa-rakud paljunevad kiiresti, mis viib ülemäärase kasvuni.
- Nõuab sagedast passaažimist, mis suurendab geneetilise ebastabiilsuse riski, mis võib aja jooksul mõjutada rakkude käitumist.
SiHa-rakkude rakendused teadusuuringutes
SiHa rakuliini kasutatakse laialdaselt emakakaelavähi uurimisel. Siin käsitletakse mõningaid selle rakuliini konkreetseid rakendusi.
- Inimese papilloomviirusega (HPV) seotud uuringud: SiHa-rakud on HPV 16-positiivsed, mistõttu on need väärtuslikud inimese papilloomviiruse nakkuse, selle molekulaarsete mehhanismide ning selle rolli emakakaelavähi tekkes ja progresseerumises uurimisel. Teadlased kasutavad neid rakke ka viiruse replikatsiooni, integratsiooni ja selle mõju pereraku protsessidele uurimiseks. 2020. aastal läbi viidud uuringus kasutati SiHa rakuliini, et uurida HPV E6/E7 onkoproteiinide rolli emakakaelavähi tekkes, suunates neile CRISPR-tehnoloogia abil mõju. Tulemused näitasid, et E6/E7 geenide ekspressiooni pärssimine põhjustas SiHa rakkude kasvu pidurdumist ja apoptoosi. Seetõttu võivad need viirusgeenid olla olulised ravimite sihtmärgid HPV-ga seotud emakakaelavähi ravimeetodite väljatöötamisel [3].
- Vähibioloogia: SiHa-rakud on hindamatu mudel emakakaelavähi bioloogia uurimiseks, sealhulgas vähi tekke, progresseerumise, metastaaside ja invasiivsuse uurimiseks. Teadlased kasutavad neid rakke, et uurida emakakaelavähi tekkele ja kasvule kaasaaitavaid geneetilisi mutatsioone ja aluseks olevaid molekulaarseid signaalradasid; näiteks ühes uuringus kasutati SiHa-rakke ja leiti, et ülesreguleeritud SEC61G (SEC61 translokoni gamma-alagrupp) soodustab emakakaelavähi rakkude proliferatsiooni MAPK-kaskadi aktiveerimise kaudu [4].
- Ravimite sõelumine ja testimine: SiHa on laialdaselt kasutatav emakakaelavähi rakuliin, millega hinnatakse HPV-ga seotud emakakaelavähi vastu suunatud potentsiaalsete vähivastaste ravimite tõhusust. Teadlased uurivad nende rakkude abil ravimite antiproliferatiivset, apoptootilist ja metastaasivastast potentsiaali. Näiteks 2019. aastal läbi viidud uuringus uuriti Vatica diospyroides Symington Type SS puuviljaekstraktide tsütotoksilist potentsiaali SiHa emakakaelavähi rakuliinil [5].
SiHa-rakud teie teadustööks!
SiHa-rakke käsitlevad teadusartiklid
Mõned olulised ja sageli tsiteeritud teadusartiklid käsitlevad SiHa emakakaela lamerakk-kartsinoomi rakuliini.
Selles ajakirjas „OncoTargets and Therapy“ (2019) avaldatud artiklis väidetakse, et looduslik ühend aloe-emodiin avaldab SiHa emakakaelavähi rakkudes HPV E6/E7-ga ja glükoosi ainevahetusega seotud apoptootilist mõju.
See artikkel avaldati ajakirjas „Future Journal of Pharmaceutical Sciences“ 2022. aastal. Uuringus uuriti Excoecaria agallocha (L.) taime leheekstrakti kasvajavastast toimet SiHa emakakaelavähi rakuliinis.
Ajakirjas „Journal of Sol-Gel Science and Technology“ (2022) avaldatud uuringus väideti, et 1,10-fenantroliini molekul avaldab pärast sidumist tsinksulfaadi nanokübemetega SiHa-rakkudes märkimisväärset antiproliferatiivset toimet.
See uurimus avaldati ajakirjas „Oncology Reports“ 2019. aastal. Uuring näitas, et looduslik toode astragalosid IV pärsib SiHa-rakkude rännet ja invasiivsust, moduleerides TGF-β1-vahendatud PI3K- ja MAPK-signaaliteid.
Ajakirjas „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2020) avaldatud uuring näitas, et IFI16 (interferoon-gamma poolt indutseeritav valk 16) reguleerib PD-L1-geeni STING-TBK1-NF-kB signaalitee aktiveerimise kaudu, soodustades sellega SiHa emakakaelavähi rakkude kasvu.
SiHa rakuliini materjalid: juhendid, videod ja muud
Siin on mõned SiHa rakke käsitlevad veebivahendid.
- SiHa-rakkude transfektsioon: See teadusartikkel sisaldab protokolli SiHa emakakaelavähi rakkude kasvatamiseks ja SiHa-rakkude transfektsiooniks.
Järgmine link sisaldab teavet SiHa rakkude kultiveerimise kohta.
- SiHa rakuliin: See veebisait sisaldab palju väärtuslikku teavet SiHa rakuliini kohta. See hõlmab teavet kasvukeskkondade, kultiveerimistingimuste, SiHa rakkude subkultiveerimise protokollide ning nende proliferatiivsete ja krüokonserveeritud kultuuride käitlemise kohta.
SiHa emakakaelavähi rakkude kohta korduma kippuvad küsimused
Viited
- Melzer, C., J. von der Ohe ja R. Hass, Lühikokkuvõte: mesenküümse strooma/tüvirakkudele sarnaste rakkude ja vähirakkude vastastikune mõju pakub terapeutilist potentsiaali. Stem cells, 2018. 36(7): lk 951–968.
- Ostrowska, K.M. jt., Uuring kõrge riskiga inimese papilloomviiruse mõju kohta emakakaelavähi rakkude biokeemilisele koostisele, kasutades vibratsioonispektroskoopiat. Analyst, 2010. 135(12): lk 3087–3093.
- Chen, Y. jt., In vitro ja in vivo inimese emakakaelavähi rakkude kasvu pärssimine inimese papilloomiviiruse E6/E7 mRNA lõhustamise kaudu CRISPR/Cas13a süsteemi abil. Antiviral Research, 2020. 178: lk 104794.
- Fan, Y. jt., SEC61G soodustab emakakaelavähi proliferatsiooni, aktiveerides MAPK signaaliteed. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A. jt., Vatica diospyroides symingtoni tüübi SS puuviljaekstraktide vähivastane potentsiaal ja nende mõju emakakaelavähi rakuliinide programmeeritud rakusurmale. The Scientific World Journal, 2019. 2019.