661w rakud

661W on hiire koonusfotoretseptorist pärinev rakuliin, mis on algselt loodud transgeense hiire võrkkesta kasvajast, mis ekspresseerib simian viiruse 40 (SV40) suurt T-antigeeni inimese fotoretseptoritevahelise retinoidide siduva valgu (IRBP) promootori kontrolli all. Liin loodi sünnijärgsete võrkkesta eksplantaatidest ja esindab surematuid koonusfotoretseptorite eellasi. 661W rakud näitavad adhesiivset kasvu ja neid hoitakse tavaliselt Dulbecco modifitseeritud Eagle'i keskkonnas, millele on lisatud loote veise seerum standardse kultiveerimise tingimustes. Neid on laialdaselt kasutatud koonusfotoretseptorite in vitro mudelina, eriti valguse poolt indutseeritud kahjustuste, oksüdatiivse stressi, apoptoosi ja võrkkesta degeneratiivsete mehhanismide uuringutes.

Molekulaarne ja transkriptomiline iseloomustus kinnitab, et 661W rakud ekspresseerivad enamikku koonusfotoretseptorite markereid, sealhulgas koonusopsine ja fototransduktsiooniga seotud geene. Kõrge resolutsiooniga pildistamisuuringud näitavad, et need rakud moodustavad primaarse tsilia, mille struktuurilised omadused meenutavad fotoretseptori ühendavat tsiliat ja välissegmente. Immunotsütokeemilised ja ultrastruktuurilised analüüsid näitavad tsiliaarvalkude lokaliseerumist aksonemile, membraanile ja üleminekutsoonile, mis toetab nende kasulikkust võrkkesta tsiliaarhaiguste uurimisel. Funktsionaalsed uuringud on näidanud, et siRNA-vahendatud intraflagellaarse transpordi geenide, nagu Ift88, knock-down viib tsiliaaride kadumiseni, mis kinnitab 661W sobivust tsiliaarbioloogia mehhanistlike uuringute jaoks.

661W rakud on väga tundlikud fotooksüdatiivse stressi suhtes. Nähtava valguse mõju indutseerib apoptootilist rakusurma, mis on seotud NF-κB aktiivsuse allareguleerimise ja kaspaasi radade aktiveerimisega. Apoptoosi pärssivate valkude, nagu Bcl-2, üleväljendamine annab vastupidavuse valguse poolt indutseeritud apoptoosile, säilitades NF-κB tuuma aktiivsuse ja parandades rakkude ellujäämist. Need omadused muudavad 661W tugevaks mudeliks fotoretseptorite degeneratsiooni aluseks olevate molekulaarsete radade analüüsimiseks. Tähtis on märkida, et 661W liin on olnud seotud ka varasemate rakkude liinide valesti identifitseerimise juhtumitega, sealhulgas RGC-5 liini ristsaastumisega, mis rõhutab selle mudeli kasutamisel rangete autentimise vajadust. Kokkuvõttes pakub 661W hästi iseloomustatud hiire koonusfotoretseptori platvormi võrkkesta degeneratsiooni, oksüdatiivse stressi reaktsioonide, tsiliaarfunktsiooni ja koonuste ellujäämist sihtivate terapeutiliste sekkumiste uurimiseks.