Buňky SiHa – nový pohled na výzkum rakoviny děložního čípku
Buňky SiHa jsou buňky rakoviny děložního čípku, které se široce používají v biomedicínském výzkumu. Jsou vynikajícími hostiteli pro transfekci, a proto jsou vhodné pro studie genové exprese. Vzhledem k jejich lidskému původu a významu pro výzkum rakoviny děložního čípku se tyto buňky používají hlavně ve studiích zabývajících se biologií rakoviny, virologií a vývojem léčiv.
- Růstové médium
- Pro ideální růst buněk SiHa se používá Eagleovo minimální esenciální médium (EMEM) obsahující 10 % FBS, 2 mM L-glutaminu, 2,2 g/l NaHCO3 a Earleův vyvážený solný roztok (EBSS). Médium se vyměňuje 2 až 3krát týdně.
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení buněk SiHa je přibližně 17 hodin.
- Typ růstu
- SiHa je adhezivní buněčná linie.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-1
- K dostání u
- Cytion — Objednat SiHa
Obecné charakteristiky a původ buněk SiHa
Porozumění původu a obecným vlastnostem buněčné linie je zásadní, protože ovlivňuje její využití ve vašem výzkumu. V této části článku se dozvíte o původu buněčné linie SiHa, jejích charakteristických vlastnostech a mnohem více: Co je to rakovinová buněčná linie SiHa? Co jsou buňky SiHa HPV? Jaký je původ buněčné linie SiHa? Jaká je morfologie buněk SiHa?
- SiHa, buněčná linie karcinomu děložního čípku, byla odvozena z fragmentů primární biopsie dělohy asijské ženy (55 let) s dlaždicobuněčným karcinomem [1].
- Buněčná linie SiHa vykazuje hypertriploidní karyotyp. Většina buněk má průměrný počet chromozomů mezi 69 a 72. Přibližně 24 % buněk však má modální počet chromozomů 71.
- Buňky SiHa jsou pozitivní na lidský papilomavirus typu 16. Vykazují integraci přibližně 1 až 2 kopií genomu HPV na buňku [2].
- Tyto buňky rakoviny děložního čípku vykazují epiteliální morfologii.
Buněčná linie SiHa: Informace o kultivaci
Udržování kultury buněčné linie není snadné, dokud neznáte všechny klíčové body jejího pěstování. Měli byste vědět: Jaká je doba zdvojnásobení buněk SiHa? Jaké je médium pro buňky SiHa? Jak se pěstuje buněčná linie SiHa?
Klíčové body pro kultivaci buněk SiHa
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk SiHa je přibližně 17 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
SiHa je adhezivní buněčná linie.
Poměr subkultivace:
Poměr subkultivace pro buňky SiHa je 1:2 až 1:4. Pro pasážování se adhezivní buňky propláchnou 1x PBS. Přidá se roztok Accutase a buňky se inkubují po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Následně se přidá kultivační médium a buňky se odstředí. Peleta buněk se resuspenduje a buňky se přelijí do nové baňky pro kultivaci.
Růstové médium:
Pro ideální růst buněk SiHa se používá Eagleovo minimální esenciální médium (EMEM) obsahující 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/l NaHCO₃ a Earleův vyvážený solný roztok (EBSS). Média se vyměňují 2 až 3krát týdně.
Podmínky kultivace:
Buňky SiHa se udržují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s přívodem 5 % CO₂.
Skladování:
Zmrazené zkumavky s buněčnou linií SiHa z rakoviny děložního čípku se dlouhodobě skladují při teplotě pod -150 °C v elektrickém mrazáku nebo v plynné fázi kapalného dusíku.
Proces zmrazování a médium:
K zmrazení buněk SiHa se používá zmrazovací médium CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují metodou pomalého zmrazování, která umožňuje pokles teploty pouze o 1 °C za minutu, aby byla zachována životaschopnost buněk.
Proces rozmrazování:
Zmrazené buňky se udržují po dobu 40 až 60 sekund ve vodní lázni o teplotě 37 °C, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. Poté se přidá čerstvé růstové médium a buňky se odstředí, aby se odstranily složky zmrazovacího média. Buněčný pelet se resuspenduje a buňky se přenesou do kultivační baňky k růstu.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro manipulaci a udržování buněčných kultur SiHa je vyžadována laboratoř úrovně biologické bezpečnosti 1.
Výhody a nevýhody buněčné linie SiHa
Stejně jako jiné lidské karcinomové buněčné linie má i SiHa některé charakteristické vlastnosti spojené s určitými výhodami a nevýhodami. V tomto článku jsme se zabývali několika významnými z nich.
Výhody buněčné linie SiHa pro model rakoviny děložního čípku
- Model rakoviny děložního čípku
- Pochází z dlaždicobuněčného karcinomu děložního čípku.
- Používá se ke studiu mechanismů, růstu a vývoje rakoviny děložního čípku.
- Exprimuje geny p53+ a pRB+, které souvisejí s opravou DNA, regulací buněčného cyklu a potlačením nádorů.
- Tumorigenní potenciál
- Buňky SiHa jsou tumorigenní a mohou u nahých myší vyvolat špatně diferencované epidermoidní nádory stupně III.
- Používají se pro výzkum rakoviny in vivo a testování protinádorových léčebných postupů.
Nevýhody buněk SiHa
- Rychlost proliferace
- Buňky SiHa se rychle množí, což vede k nadměrnému růstu.
- Vyžadují časté pasážování, což zvyšuje riziko genetické nestability, která může v průběhu času ovlivnit chování buněk.
Výzkumné využití buněčné linie SiHa
Buněčná linie SiHa se hojně využívá ve výzkumu rakoviny děložního čípku. Zde se budeme zabývat několika konkrétními aplikacemi této buněčné linie.
- Studie související s lidským papilomavirem (HPV): Buňky SiHa jsou HPV 16 pozitivní, a proto představují cenný materiál pro studium infekce lidským papilomavirem, jejích molekulárních mechanismů a její role ve vývoji a progresi rakoviny děložního čípku. Vědci tyto buňky rovněž využívají k výzkumu replikace a integrace viru a jeho vlivu na procesy v hostitelské buňce. Studie provedená v roce 2020 využila buněčnou linii SiHa k prozkoumání role onkoproteinů HPV E6/E7 ve vývoji rakoviny děložního čípku, a to pomocí technologie CRISPR. Výsledky ukázaly, že potlačení genů E6/E7 vedlo k inhibici růstu buněk SiHa a k apoptóze. Tyto virové geny proto mohou sloužit jako klíčové cíle pro vývoj léčebných postupů proti rakovině děložního čípku související s HPV [3].
- Biologie rakoviny: Buňky SiHa slouží jako neocenitelný model pro studium biologie rakoviny děložního čípku, včetně vzniku, progrese, metastázování a invaze rakoviny. Výzkumníci tyto buňky využívají k prozkoumání genetických mutací a základních molekulárních drah přispívajících k rozvoji a růstu rakoviny děložního čípku; například jedna studie využila buňky SiHa a zjistila, že zvýšená exprese SEC61G (podjednotka gama translokonu SEC61) podporuje proliferaci buněk rakoviny děložního čípku prostřednictvím aktivace MAPK kaskády [4].
- Screening a testování léčiv: SiHa je široce používaná buněčná linie rakoviny děložního čípku k hodnocení účinnosti potenciálních protinádorových léčiv specifických pro rakovinu děložního čípku související s HPV. Výzkumníci pomocí těchto buněk zkoumají antiproliferační, apoptotický a antimetastatický potenciál léčiv. Například studie provedená v roce 2019 zkoumala cytotoxický potenciál extraktů z plodů Vatica diospyroides Symington typu SS na buněčné linii SiHa rakoviny děložního čípku [5].
Buňky SiHa pro váš výzkum!
Vědecké publikace zabývající se buněčnou linií SiHa
Některé významné a často citované výzkumné publikace se zabývají buněčnou linií SiHa, která představuje dlaždicový karcinom děložního čípku.
Tato publikace v časopise OncoTargets and Therapy (2019) navrhla, že přírodní sloučenina aloe-emodin vyvolává v buňkách karcinomu děložního čípku SiHa apoptotické účinky spojené s HPV E6/E7 a metabolismem glukózy.
Tento článek byl publikován v časopise „Future Journal of Pharmaceutical Sciences“ v roce 2022. Tato studie zkoumala protinádorové účinky extraktu z listů rostliny Excoecaria agallocha (L.) na buněčnou linii rakoviny děložního čípku SiHa.
Tato studie, publikovaná v časopise „Journal of Sol-Gel Science and Technology“ (2022), navrhla, že molekula 1,10-fenantrolinu po navázání na nanočástice síranu zinečnatého vykazuje významné antiproliferační účinky v buňkách SiHa.
Tento výzkum byl publikován v časopise Oncology Reports v roce 2019. Studie odhalila, že astragalosid IV, přírodní látka, potlačuje migraci a invazi buněk SiHa modulací signálních drah PI3K a MAPK zprostředkovaných TGF-β1.
Tato studie publikovaná v časopise *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) odhalila, že IFI16 (interferon-gamma inducible protein 16) reguluje gen PD-L1 prostřednictvím aktivace signální dráhy STING-TBK1-NF-kB, čímž podporuje růst buněk rakoviny děložního čípku SiHa.
Zdroje pro buněčnou linii SiHa: protokoly, videa a další
Zde najdete několik online zdrojů věnovaných buňkám SiHa.
- Transfekce buněk SiHa: Tento výzkumný článek obsahuje protokol pro kultivaci buněk SiHa pocházejících z rakoviny děložního čípku a pro transfekci těchto buněk.
Následující odkaz obsahuje informace o buněčné kultuře buněk SiHa.
- Buněčná linie SiHa: Tato webová stránka obsahuje mnoho cenných údajů o buněčné linii SiHa. Patří sem informace o růstových médiích, kultivačních podmínkách, protokolech pro subkultivaci buněk SiHa a zacházení s jejich proliferativními a kryokonzervovanými kulturami.
Často kladené otázky týkající se buněk karcinomu děložního čípku SiHa
Literatura
- Melzer, C., J. von der Ohe a R. Hass, Stručný přehled: interakce mezenchymálního stromatu/kmenových buněk s nádorovými buňkami skýtá terapeutický potenciál. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951–968.
- Ostrowska, K.M. a kol., Zkoumání vlivu vysoce rizikového lidského papilomaviru na biochemické složení buněk rakoviny děložního čípku pomocí vibrační spektroskopie. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087–3093.
- Chen, Y., a kol., Inhibice růstu buněk rakoviny děložního čípku in vitro a in vivo prostřednictvím štěpení mRNA genů E6/E7 lidského papilomaviru systémem CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y., a kol., SEC61G podporuje proliferaci rakoviny děložního čípku aktivací signální dráhy MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Protinádorový potenciál ovocných extraktů z Vatica diospyroides typu Symington SS a jejich vliv na programovanou buněčnou smrt buněčných linií rakoviny děložního čípku. The Scientific World Journal, 2019. 2019.