Buňky LLC-MK2 (původní)

Mrazicí médium CM-1 společnosti Cytion je nejmodernější kryokonzervační médium určené k zajištění nejvyšší úrovně životaschopnosti a funkčnosti buněk po rozmrazení. Toto univerzální médium je vhodné pro široké spektrum buněčných typů, včetně lidských i zvířecích buněk, což z něj činí základní nástroj pro různé výzkumné aplikace. Médium Freeze Medium CM-1, jehož složení obsahuje pečlivě vyváženou kombinaci kryoprotektantů a základních živin, minimalizuje tvorbu ledových krystalů a buněčný stres během procesu zmrazování, čímž zachovává buněčnou integritu.
Mezi hlavní vlastnosti Freeze Medium CM-1 patří:

Široká kompatibilita: Účinné pro širokou škálu buněčných typů, včetně primárních buněk, kmenových buněk a zavedených buněčných linií.
Vysoká životaschopnost: Optimalizováno pro maximální obnovu a životaschopnost buněk po rozmrazení, což zajišťuje spolehlivé výsledky experimentů.
Připraveno k použití: Pohodlně připravené a sterilizované pro okamžité použití, což zkracuje dobu přípravy a snižuje riziko kontaminace.
Zvýšená stabilita: Udržuje konzistentní výkonnost za standardních podmínek kryokonzervace a zajišťuje reprodukovatelné výsledky.
Dlouhá skladovatelnost: CM-1 je médium pro kryokonzervaci obsahující sérum, připravené k použití, které lze uchovávat v chladničce až jeden rok.


Použití přípravku CM-1 ke zmrazování buněk

Chcete-li použít CM-1 ke zmrazení adherentních i suspenzních buněk, postupujte podle následujících kroků

Pro adherentní buňky je omyjte a oddělte od kultivačního substrátu. U suspenzních buněk přejděte přímo k dalšímu kroku.
Spočítejte buňky, abyste zajistili jejich správnou koncentraci.
Odstřeďte buňky, abyste je peletovali, a poté je znovu rozpusťte v mrazicím médiu CM-1.
Resuspendované buňky přeneste do kryovialek.
Před přenosem buněk do dlouhodobého skladu použijte metodu pomalého zmrazování





Metoda
Popis
Kroky





❄️
Ruční zmrazení

Postupná metoda zahrnující postupné snižování teploty pro zajištění životaschopnosti buněk

1️⃣ Umístěte buňky do mrazicího média do mrazničky o teplotě 4 °C na 40 minut.
2️⃣ Přeneste na 24 hodin do mrazničky o teplotě -80 °C.
3️⃣ Pro dlouhodobé uchování uchovávejte buňky v tekutém dusíku



❄️
Použití přístroje Mr. Frosty

Praktické zařízení, které umožňuje řízenou rychlost zmrazování bez použití elektrické energie

1️⃣ Připravte buňky do kryovialek s mrazicím médiem.
2️⃣ Umístěte kryovialy do nádoby Mr. Frosty.
3️⃣ Před přenesením do kapalného dusíku uchovávejte při teplotě -80 °C po dobu 24 hodin



❄️
Mraznička s řízenou rychlostí

Vysoce přesný mrazák od společnosti Thermo Fisher nebo jiných výrobců určený k řízenému snižování teploty

1️⃣ Zařízení naprogramujte tak, aby postupně snižovalo teplotu.
2️⃣ Vložte připravené buňky do mrazničky.
3️⃣ Po skončení mrazicího cyklu přeneste buňky do tekutého dusíku









Kryovaky skladujte při teplotě nižší než -130 °C nebo v kapalném dusíku pro dlouhodobé uchování.


Složení

Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli
Pufrovací schopnost: pH = 7,2 až 7,6


Mrazicí médium CM-1 společnosti Cytion nabízí spolehlivé řešení pro kryokonzervaci, které zajišťuje vysokou životaschopnost a funkčnost buněk po rozmrazení pro širokou škálu výzkumných aplikací.

Médium 199 je univerzální a široce používané médium pro kultivaci buněk speciálně vytvořené pro kultivaci primárních explantátů. Toto komplexní médium kombinuje esenciální vitaminy, aminokyseliny a další faktory a poskytuje tak plně definovaný zdroj živin pro různé typy buněk. Je obzvláště vhodné pro netransformované buňky, což z něj činí neocenitelný nástroj pro biologický výzkum.
Médium 199 nabízí celou řadu aplikací v této oblasti. Dokáže účinně udržovat komplex kumulus-oocyt (COC) a podporovat in vitro zrání oocytů. Kromě toho se používá při oplachování aspiračních linií během odběru vajíček od německých holštýnských krav. Medium 199 navíc slouží jako vynikající médium pro kultivaci srdečních endoteliálních buněk získaných z potkanů. Tyto aplikace ukazují univerzálnost a přizpůsobivost média 199 různým experimentálním potřebám.
Historie
Vývoj média 199 v 50. letech 20. století znamenal významný pokrok v oblasti médií pro tkáňové kultury. Před jeho zavedením se mnoho kultivačních médií opíralo o produkty živočišného původu a tkáňové extrakty. Morgan a jeho kolegové však způsobili revoluci v této oblasti tím, že vytvořili zcela definovaný zdroj živin pro buněčné kultury. Svými pokusy s různými kombinacemi vitaminů, aminokyselin a dalších faktorů objevili výjimečné vlastnosti média 199 podporující růst.
Kontrola kvality

pH = 7,2 +/
- 0,02 při 20-25 °C.
Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmy a bakterií.

Údržba

Uchovávejte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C ve tmě. Zmrazování a zahřívání až do +37 °C snižuje kvalitu přípravku na minimum.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37° C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné přístroje).
Pokud má být použita pouze část média, odeberte toto množství z lahvičky a zahřejte jej při pokojové teplotě.
Doba použitelnosti jakéhokoli média s výjimkou základního média je 8 týdnů od data výroby.

Složení




Složení
mg/l


Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
264,92



Dusičnan železitý (III) x 9H2O
0,72



Síran hořečnatý
97,67



Chlorid draselný
400,00



Octan sodný x 3H2O
82,95



Chlorid sodný
6,800.00



Dihydrogenfosforečnan sodný x H2O
140,00


Ostatní složky
Adenin sulfát
10,00



AMP
0,20



ATP
1,00



Cholesterol
0,20



2'-Deoxyribóza
0,50



D(+)-glukóza bezvodá
1,000.00



Glutathion (červený)
0,05



Guanin x HCl
0,30



Hypoxantin
0,30



Fenolová červeň
10,00



D-ribóza
0,50



Thymin
0,30



Tween 80
4,90



Uracil
0,30



Xanthin
0,30



NaHCO3
2,200.00


Aminokyseliny
L-Alanin
25,00



L-Arginin x HCl
70,00



Kyselina L-asparagová
30,00



L-Cystein x HCl x H2O
0,10



L-Cystin
20,00



L-Glutamin stabilní
149,00



Kyselina L-glutamová
67,00



Glycin
50,00



L-histidin x HCl x H2O
21,88



L-hydroxyprolin
10,00



L-Isoleucin
20,00



L-leucin
60,00



L-Lysin x HCl
70,00



L-methionin
15,00



L-fenylalanin
25,00



L-Prolin
40,00



L-serin
25,00



L-Treonin
30,00



L-tryptofan
10,00



L-Tyrosin
40,00



L-Valin
25,00


Vitamíny
kyselina 4-amino-benzoová
0,05



Kyselina askorbová
0,05



D(+)-Biotin
0,01



Kalciferol
0,10



D-pantothenát vápenatý
0,01



Cholinchlorid
0,50



Kyselina listová
0,01



myo-Inositol
0,05



Menadion
0,01



Kyselina nikotinová
0.025



Nikotinamid
0.025



Pyridoxal x HCl
0.025



Pyridoxol x HCl
0.025



Riboflavin
0,01



DL-α-tokoferolfosforečnan disodná sůl
0,01



Thiamin x HCl
0,01



Vitamín A acetát
0,14

Roztok Accutase pro odloučení buněk s EDTA a fenolovou červení – 100 ml

Accutase je sterilně filtrovaný roztok pro odloučení buněk připravený k okamžitému použití, který byl vyvinut jako šetrná alternativa k trypsinu/EDTA pro disociaci adhezivních savčích buněk ze standardních plastových nádob pro tkáňové kultury a povrchů potažených adhezivním povlakem. Kombinuje proteolytickou a kolagenolytickou enzymatickou aktivitu ve vyváženém solném roztoku, aby zajistil účinnou, ale kontrolovanou disociaci, zachoval proteiny na povrchu buněk a podpořil vysokou životaschopnost po pasážování a rychlé opětovné přilnutí.

Složení přípravku Accutase je založeno na Dulbeccově fosfátovém pufru (DPBS) s EDTA a fenolovou červení jako vizuálním indikátorem pH. Enzymy jsou ne-savčího a ne-bakteriálního původu, díky čemuž je Accutase obzvláště vhodný pro výzkum kmenových buněk, pracovní postupy při vývoji vakcín a jakékoli aplikace, kde je nutné minimalizovat kontaminaci pocházející ze zvířat nebo mikroorganismů. Roztok se při teplotě 37 °C automaticky inhibuje, takže po oddělení buněk není zapotřebí žádné neutralizační činidlo ani médium obsahující sérum – buňky lze přenést přímo do čerstvého média.

Hlavní vlastnosti

Připravená k použití 1x sterilně filtrovaná kapalina – není nutné ředění ani rekonstituce
Kombinovaná proteolytická a kolagenolytická enzymová aktivita pro šetrnou disociaci
Každá šarže je standardizována na definovanou disociační aktivitu pro konzistenci mezi šaržemi
Enzymy nepocházejí ze savců ani z bakterií
Automatická inhibice při 37 °C – není potřeba neutralizační roztok
Formulováno v Dulbeccoově PBS s EDTA
Obsahuje fenolovou červeň jako vizuální indikátor pH
pH 6,8 – 7,8


Typické aplikace
Accutase šetrně disociuje širokou škálu adhezivních a citlivých buněčných typů, včetně lidských embryonálních kmenových buněk (hESCs), lidských indukovaných pluripotentních kmenových buněk (iPSCs), neurálních kmenových buněk, primárních neuronů a běžně kultivovaných adhezivních linií, jako jsou HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 a A549. Mezi typické příklady použití patří:

Rutinní subkultivace a pasážování adhezivních savčích buněk
Šetrná disociace jednotlivých buněk hESCs, iPSCs a dalších citlivých linií
Příprava vzorků pro průtokovou cytometrii a analýzu FACS
Analýza markerů na povrchu buněk, kde záleží na integritě epitopu
Testování migrace, proliferace a apoptózy buněk
Testování klidového stavu pomocí deprivace séra a studie transfekce onkogenů
Testování migrace nádorových buněk a buněk neurální lišty
Zvýšení produkce v bioreaktorových pracovních postupech

Pro rutinní práci naneste přibližně 10 ml přípravku Accutase na 75 cm2 kultivační plochy a inkubujte 5–10 minut při pokojové teplotě. Optimální doba inkubace by měla být stanovena pro každou buněčnou linii a neměla by přesáhnout jednu hodinu. Před přidáním opláchněte buněčnou vrstvu roztokem soli bez Ca2+/Mg2+, například DPBS bez vápníku a hořčíku, aby se odstranily zbytky séra a dvojmocné kationty.

Manipulace a skladování
Neotevřenou lahvičku skladujte zmrazenou při teplotě -15 °C nebo nižší. Rozmrazujte buď při pokojové teplotě, nebo přes noc při teplotě +2 °C až +8 °C. Accutase nerozmrazujte ve vodní lázni o teplotě 37 °C, protože zvýšené teploty snižují enzymovou aktivitu. Po rozmrazení lze roztok skladovat až 2 měsíce při teplotě +2 °C až +8 °C; neskladujte při pokojové teplotě. Před použitím reagencií neohřívejte na 37 °C – přidejte ji přímo k promytým buňkám při pokojové teplotě. Pro dlouhodobou skladovatelnost se doporučuje rozdělit reagenci na jednorázové alikvoty, aby se zabránilo opakovaným cyklům rozmrazování. Vždy pracujte za aseptických podmínek.

Kvalita
Vyrobeno podle přísných standardů kvality. Každá šarže přípravku Accutase je sterilizována filtrací a testována na sterilitu, pH, vzhled a disociační aktivitu, aby byla zajištěna konzistentní a reprodukovatelná výkonnost mezi jednotlivými šaržemi.

Specifikace produktu



Specifikace
Detail



Typ produktuReagencie pro odloučení/disociaci buněk
FormátSterilně filtrovaná kapalina, připravená k použití
Objem100 ml
Pracovní koncentrace1x (připraveno k použití)
Enzymová aktivitaKombinovaná proteolytická a kolagenolytická
Původ enzymuNesavčí a nebakteriální
Pufrovací systémDulbeccoův PBS s EDTA
Indikátor pHFenolová červeň
Rozsah pH6,8 – 7,8
VzhledČirý, světle červený až oranžový roztok
Skladovací teplota-15 °C nebo nižší
Stabilita po rozmrazeníAž 2 měsíce při teplotě +2 °C až +8 °C
Doporučený objem pro použití~10 ml na 75 cm2 kultivační plochy
Typická doba inkubace5 – 10 minut při pokojové teplotě
Podmínky přepravyZmrazené v suchém ledu
Určené použitíPouze pro výzkumné účely a další výrobu



Složení (složení na litr)



Složka
Koncentrace (mg/l)




Anorganické soli

Chlorid sodný (NaCl)8000,00
Hydrogenfosforečnan disodný (Na2HPO4)1150,00
Chlorid draselný (KCl)200,00
Dihydrogenfosforečnan draselný (KH₂PO₄)200,00

Ostatní složky

EDTA · 4Na (EDTA tetrasodný)220,00
Fenolová červeň3,00
Patentovaná směs enzymů (proteolytická a kolagenolytická aktivita)1x



Accutase je registrovaná ochranná známka společnosti Innovative Cell Technologies, Inc.

Přehled produktů
Objem: 100 ml Skladování: ≤-15 °C Sterilita: Sterilně filtrováno
Antibiotický/antimykotický roztok (100x ) je sterilní koncentrát připravený k použití, určený ke snížení rizika mikrobiální kontaminace v buněčných kulturách a příbuzných laboratorních aplikacích. Tento 100x roztok obsahuje osvědčenou kombinaci penicilinu, streptomycinu a amfotericinu B, která poskytuje široké spektrum antimikrobiální aktivity proti grampozitivním a gramnegativním bakteriím, kvasinkám a vláknitým houbám. Složení je vhodné pro použití v eukaryotických buněčných kulturách, bakteriálních médiích a dalších systémech citlivých na kontaminaci, což podporuje čistý a konzistentní laboratorní provoz.
Použití a výhody Tento roztok je optimalizován pro rutinní výzkumné protokoly a je široce používán k udržování aseptických podmínek v pracovních postupech buněčných kultur. Nabízí spolehlivý výkon v prostředí citlivém na kontaminaci a pomáhá výzkumníkům snížit riziko přemnožení mikroorganismů, aniž by bylo ohroženo zdraví buněk nebo reprodukovatelnost experimentů. Sterilně filtrované složení eliminuje potřebu dalších solubilizačních kroků, čímž podporuje zefektivnění přípravy médií a snižuje variabilitu každodenních laboratorních postupů.
Použití a kompatibilita Pro dosažení standardních pracovních koncentrací roztok nařeďte v poměru 1:100 do kompletního kultivačního média. Produkt je kompatibilní se širokou škálou savčích buněčných linií a základních médií. Díky stálé skladové dostupnosti mohou výzkumní pracovníci těžit ze spolehlivé kontinuity dodávek a zjednodušeného plánování logistiky. Roztok by měl být skladován při teplotě ≤ -15 °C a chráněn před opakovanými cykly zmrazování a rozmrazování, aby byla zachována jeho stabilita. Pouze pro výzkumné použití. Není určeno k použití při diagnostických nebo terapeutických postupech. Není určeno k použití u lidí nebo zvířat.

Roztok fyziologického roztoku s fosfátovým pufrem (PBS)
Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS) je široce používaný pufrovací roztok v biologickém a chemickém výzkumu. Hraje klíčovou roli při udržování rovnováhy pH a osmolarity během různých experimentálních postupů, včetně zpracování tkání a buněčných kultur. Náš roztok PBS je pečlivě sestaven z vysoce čistých složek, aby byla zajištěna stabilita a spolehlivost při každém experimentu. Osmolarita a koncentrace iontů našeho roztoku PBS věrně kopíruje osmolaritu a koncentraci iontů v lidském těle, takže je izotonický a netoxický pro většinu buněk.

Složení našeho roztoku PBS
Náš roztok PBS je směs fosfátových pufrů a fyziologických roztoků ultračisté kvality s upraveným pH. V pracovní koncentraci 1X obsahuje:

8000 mg/l chloridu sodného (NaCl)
200 mg/l chloridu draselného (KCl)
1150 mg/L bezvodý fosforečnan sodný dvoubazický (Na2HPO4)
200 mg/L Fosforečnan draselný jednobazický bezvodý (KH2PO4)

Toto složení zajišťuje optimální pH a iontovou rovnováhu vhodnou pro širokou škálu biologických aplikací.

Aplikace našeho roztoku PBS
Náš roztok PBS je ideální pro různé aplikace v biologickém výzkumu. Díky svým izotonickým a netoxickým vlastnostem je vhodný pro ředění látek a oplachování buněčných nádob. Roztoky PBS s obsahem EDTA jsou účinné pro uvolnění připojených a shlukovaných buněk. Do PBS by se však neměly přidávat dvojmocné kovy, jako je zinek, protože mohou způsobit srážení. V takových případech se doporučují Goodovy pufry. Kromě toho je náš roztok PBS přijatelnou alternativou virového transportního média pro transport a skladování RNA virů, včetně SARS-CoV-2.

Kontrola kvality

Sterilně filtrované


Skladování a doba použitelnosti

Skladujte při teplotě +2 °C až +25 °C, chráněné před světlem.
Po otevření skladujte při teplotě 2 °C až 25 °C a spotřebujte do 24 měsíců.


Přepravní podmínky

Okolní teplota


Údržba

Uchovávejte v chladu při teplotě +2°C až +8°C v temnu. Vyhněte se zmrazování a častému zahřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu výrobku.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné spotřebiče.
Pokud má být použita pouze část média, odeberte požadované množství a před použitím jej zahřejte na pokojovou teplotu.

Složení



Kategorie
Složky
Koncentrace (mg/l)


Soli
Chlorid draselný
200



Fosforečnan draselný monobazický bezvodý
200



Chlorid sodný
8000



Fosforečnan sodný dvoubazický bezvodý
1150