Buňky HaCaT
Základní fakta o buňkách Hacat
| Popis | Buňky HaCaT jsou klíčovým modelem v dermatologickém výzkumu a nabízejí pohled na složité mechanismy biologie a patologie kůže. Spontánně imortalizovaná buněčná linie HaCaT je odvozena z dospělých lidských epidermálních buněk a zachovává si schopnost proliferace a diferenciace podobně jako bazální keratinocyty in vivo. Buňky HaCaT slouží jako robustní platforma pro zkoumání procesu epidermální diferenciace a studium epidermálních diferenciačních markerů nezbytných pro zachování integrity kůže. Náchylnost buněk HaCaT k apoptóze a jejich citlivost k látkám indukujícím apoptózu jsou předmětem rozsáhlých studií, zejména v souvislosti s cytotoxickými látkami, jako je RIPL. Výzkumníci hodnotí cytotoxicitu těchto látek a rozsah cytotoxicity pomocí buněk HaCaT a k vizualizaci buněčných změn využívají techniky, jako je fluorescenční mikroskopie. Výzkumníci využívají buňky HaCaT ke zkoumání účinků různých látek, včetně antimikrobiálních substrátů, a jejich vlivu na životaschopnost buněk. Tyto buňky jsou vynikajícím substrátem pro testování antimikrobiálních biomateriálů a antimikrobiálních atelokolagenových substrátů, které mají zásadní význam pro obnovu kůže a lékařské aplikace. Epidermální linie HaCaT hraje také zásadní roli při studiu buněčné senescence, cytokinů a profilů genové exprese souvisejících se stárnutím a chronickými chorobami. Transkripční profily buněk HaCaT, včetně úlohy κB a mikroRNA, umožňují nahlédnout do regulačních mechanismů na molekulární úrovni. Linie keratinocytů HaCaT se svými vlastnostmi epidermálních keratinocytů nabízí schůdný systém pro pitvání složité souhry mezi epidermálními buňkami a imunitním systémem, konkrétně úlohy keratinocytů v chorobných stavech. Umožňují zkoumat epigenetické modifikace a jejich vliv na diferenciaci keratinocytů, včetně tvorby rohovinového obalu, který je klíčovým prvkem bariérové funkce kůže. Souhrnně lze říci, že buňky HaCaT jsou nepostradatelným modelem v dermatologickém výzkumu, který umožňuje hlubší pochopení biologie a patologie kůže díky jejich podobnosti s bazálními keratinocyty a jejich schopnosti procházet buněčným růstem a diferenciací. Jejich využití sahá od studia epidermální diferenciace a antimikrobiálních účinků až po zkoumání buněčných reakcí, jako je apoptóza, což z nich činí základní kámen buněčné biologie a biomedicínského výzkumu. |
|---|---|
| Organismus | Člověk |
| Tkáň | Kůže |
Podrobnosti na
| Věk | 62 let |
|---|---|
| Pohlaví | Muži |
| Etnická příslušnost | Kavkazský |
| Typ buňky | Keratinocyty o průměru 20-25 mikrometrů. |
| Růstové vlastnosti | Adherentní |
Dokumentace
| Citace | HaCaT (katalogové číslo Cytion 300493) |
|---|---|
| Úroveň biologické bezpečnosti | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_0038 |
| Vkladatel | DKFZ, Heidelberg |
Genetika buněčné linie keratinocytů HaCaT
| Tumorigenní | Ne |
|---|---|
| Karyotyp | Aneuploidní (hypotetraploidní) |
Manipulace s buněčnou linií Hacat
| Kultivační médium | DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutaminu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a) |
|---|---|
| Doplňky | Doplňte médium o 10% FBS |
| Disociační činidlo | Směs EDTA (zásoba 0,05 %) a trypsinu (zásoba 0,1 %) v poměru 1:1 musí být připravena vždy před oddělením buněk pomocí PBS bez Ca2+ a Mg2+, aby byla zajištěna fyziologická osmolarita. Směsi trypsinu/EDTA připravené k použití se nedoporučují, protože mohou způsobit shlukování buněk. Jako alternativu lze místo trypsinu/EDTA použít TrypLE Express (Life Technologies). Je třeba dodržovat protokol výrobce. |
| Doba zdvojnásobení | Doba zdvojení buněk HaCaT je 28 hodin. |
| Subkultivace |
|
| Poměr rozdělení | Doporučuje se poměr 1:5 až 1:10 |
| Hustota výsevu | 1 x 104 buněk/cm2 |
| Obnova tekutin | 2krát týdně |
| Zmrazovací médium | Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo. |
| Rozmrazování a kultivace buněk |
|
| Inkubační atmosféra | 37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra. |
| Povlak baňky | Pro optimální uchycení a životaschopnost po rozmrazení doporučujeme používat baňky nebo destičky potažené kolagenem. |
| Postup zmrazování | Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu. |
| Přepravní podmínky | Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu. |
| Podmínky skladování | Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku. |
Zajištění kvality
| Sterilita | Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy. Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám. |
|---|---|
| Profil STR |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 9,11
D13S317: 10,12
D16S539: 9,12
D5S818: 12
D7S820: 9,11
TH01: 9.3
TPOX: 11,12
vWA: 16,17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
D1S1656: 11,12
D2S1338: 17,25
D12S391: 18,23
D19S433: 13,14
|
| Alely HLA |
A*: '31:01:02
B*: '40:01:02, '51:01:01
C*: '03:04:01, '15:02:01
DRB1*: '04:01:01, '15:01:01
DQA1*: '01:02:01, '03:03:01
DQB1*: '03:01:01, '06:02:01
DPB1*: '03:01:01, '04:01:01
E: '01:03:01, '01:03:02
|
Certifikát o analýze (CoA)
| Číslo pozemku | Typ certifikátu | Datum | Katalogové číslo |
|---|---|---|---|
| 300493-250324 | Certifikát o analýze | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190723 | Certifikát o analýze | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190124 | Certifikát o analýze | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225SF | Certifikát o analýze | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225 | Certifikát o analýze | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-040424 | Certifikát o analýze | 23. May. 2025 | 300493 |