Клетки PC-12

Средата за замразяване CM-1 на Cytion е най-съвременна среда за криоконсервация, предназначена да осигури най-високо ниво на жизнеспособност и функционалност на клетките след размразяване. Тази универсална среда е подходяща за широк спектър от клетъчни типове, включително човешки и животински клетки, което я прави основен инструмент за различни изследователски приложения. Формулирана с внимателно балансирана комбинация от криопротектори и основни хранителни вещества, средата за замразяване CM-1 свежда до минимум образуването на ледени кристали и клетъчния стрес по време на процеса на замразяване, като по този начин запазва клетъчната цялост.
Основните характеристики на Freeze Medium CM-1 включват:

Широка съвместимост: Ефективна за широк спектър от клетъчни типове, включително първични клетки, стволови клетки и установени клетъчни линии.
Висока жизнеспособност: Оптимизирана за максимално възстановяване на клетките след размразяването им и тяхната жизнеспособност, което гарантира надеждни експериментални резултати.
Готов за употреба: Удобно подготвени и стерилизирани за незабавно приложение, което намалява времето за подготовка и риска от замърсяване.
Повишена стабилност: Поддържа постоянна производителност при стандартни условия на криоконсервация, като осигурява възпроизводими резултати.
Дълъг срок на съхранение: CM-1 е готова за употреба среда за криоконсервация, съдържаща серум, която може да се съхранява в хладилник до една година.


Използване на CM-1 за замразяване на клетки

За да използвате CM-1 за замразяване на адхезивни и суспензионни клетки, следвайте следните стъпки

За адхерентни клетки ги измийте и ги отделете от субстрата за култивиране. За суспензионни клетки преминете директно към следващата стъпка.
Пребройте клетките, за да се уверите, че те са с подходяща концентрация.
Центрофугирайте клетките, за да ги пелетирате, след което ги ресуспендирайте в среда за замразяване CM-1.
Прехвърлете ресуспендираните клетки в криовиали.
Използвайте метод за бавно замразяване, преди да прехвърлите клетките за дългосрочно съхранение





Метод
Описание
Стъпки





❄️
Ръчно замразяване

Метод, включващ постепенно намаляване на температурата, за да се осигури жизнеспособността на клетките

1️⃣ Поставете клетките в среда за замразяване във фризер с температура 4 °C за 40 минути.
2️⃣ Прехвърлете във фризер с температура -80°C за 24 часа.
3️⃣ Съхранявайте клетките в течен азот за дългосрочно запазване



❄️
Използване на Mr. Frosty

Удобно устройство, което позволява контролирана скорост на замразяване без електрическо захранване

1️⃣ Подгответе клетките в криовиали със замразяваща среда.
2️⃣ Поставете криовиолите в контейнера на Mr. Frosty.
3️⃣ Съхранявайте при -80 °C за 24 часа, преди да прехвърлите в течен азот



❄️
Фризер с контролирана скорост

Високопрецизен фризер на Thermo Fisher или на други производители, предназначен за контролирано намаляване на температурата

1️⃣ Програмирайте устройството за постепенно намаляване на температурата.
2️⃣ Поставете подготвените клетки във фризера.
3️⃣ След цикъла на замразяване прехвърлете клетките в течен азот









Съхранявайте криовиолите при температури под -130 °C или в течен азот за дългосрочно съхранение.


Съставки

Съдържа FBS, DMSO, глюкоза, соли
Буфериращ капацитет: pH = 7,2 до 7,6


Средата за замразяване CM-1 на Cytion предлага надеждно решение за криоконсервация, като осигурява висока клетъчна жизнеспособност и функционалност след размразяване за широк спектър от изследователски приложения.

Средата RPMI 1640, известна също като среда RPMI, е многофункционална среда за клетъчни култури, широко използвана в биологичните изследвания за култивиране на различни клетки от бозайници. Разработена от Джордж Е. Мур, Робърт Е. Гернер и Х. Адисън Франклин през 1966 г. в известния Комплексен център за ракови заболявания в Розуел Парк, тази среда получава името си от произхода си в Мемориалния институт в Розуел Парк (RPMI).
Първоначално създадена за поддържане на растежа на човешки левкемични клетки в суспензионни и монослойни култури, средата RPMI 1640 еволюира чрез модификации от изследователи и търговски доставчици, за да стане подходяща за разнообразни клетки на бозайници. Тя е изключително съвместима с клетъчни линии като HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, астроцити и карциноми.
Средата RPMI 1640 се отличава от другите среди за клетъчни култури поради уникалния си състав. Тя съдържа значително количество фосфати, аминокиселини и витамини. По-специално, тя включва биотин, витамин В12 и PABA, които отсъстват в Eagle's Minimal Essential Medium или Dulbecco's Modified Eagle Medium. Освен това средата RPMI 1640 показва значително повишени концентрации на витамините инозитол и холин. Тя обаче не съдържа протеини, липиди или растежни фактори. Поради това обикновено се налага добавяне на 10% фетален говежди серум (FBS), за да се осигурят оптимални условия за клетъчен растеж.
Буферната система на средата RPMI 1640 разчита на натриев бикарбонат и изисква 5-10% CO2 среда, за да се поддържа физиологично подходящо pH. Включването на редуциращия агент глутатион допълнително отличава тази среда от останалите.
Контрол на качеството

Стерилно филтрирани


Съхранение и срок на годност

Съхранявайте при температура от +2°C до +8°C, защитена от светлина.
След отваряне съхранявайте при 4°C и използвайте в рамките на 6-8 седмици.


Условия за транспортиране

Температура на околната среда


Поддръжка

Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.



Състав




Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)


Аминокиселини
Глицин
10.00



L-аланил-L-глутамин
434.40



L-аргинин
200.00



L-аспарагинH2O
56.82



L-аспарагинова киселина
20.00



L-цистин 2HCl
65.20



L-глутаминова киселина
20.00



L-Histidine HClH2O
20.27



L-хидрокси-L-пролин
20.00



L-изолевцин
50.00



L-Leucine
50.00



L-лизин HCl
40.00



L-метионин
15.00



L-фенилаланин
15.00



L-пролин
20.00



L-серин
30.00



L-Threonine
20.00



L-триптофан
5.00



L-тирозин 2Na 2H2O
28.83



L-Valine
20.00


Витамини
р-аминобензоена киселина
1.00



D-биотин
0.20



Холин хлорид
3.00



D-калциев пантотенат
0.25



Фолиева киселина
1.00



мио-Инозитол
35.00



Никотинамид
1.00



Пиридоксин HCl
1.00



Рибофлавин
0.20



Тиамин HCl
1.00



Витамин В12
0.005


Неорганични соли
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Други компоненти
D-глюкоза
2000.00



L-глутатион, редуциран
1.00



Фенол червено натриева сол
5.30

Разтвор за отделяне на клетки Accutase с EDTA и фенол червено – 100 мл

Accutase е готов за употреба, стерилно филтриран разтвор за отделяне на клетки, създаден като щадяща алтернатива на трипсин/EDTA за отделяне на адхезивни клетки от бозайници от стандартни пластмасови съдове за тъканни култури и повърхности с адхезивно покритие. Той съчетава протеолитична и колагенолитична ензимна активност в балансиран солен разтвор, за да осигури ефективно, но контролирано отделяне, като запазва протеините на клетъчната повърхност и подпомага висока жизнеспособност след пасаж и бързо повторно прикрепване.

Формулата на Accutase се основава на фосфатно-буфериран физиологичен разтвор на Дълбеко (DPBS) с EDTA и фенол червено като визуален индикатор за pH. Ензимите са от небозайнически и небактериален произход, което прави Accutase особено подходящ за изследвания на стволови клетки, работни процеси при ваксини и всякакви приложения, при които трябва да се сведе до минимум наличието на замърсители от животински или микробен произход. Разтворът се самоинхибира при 37 °C, така че след отделянето не се изисква неутрализиращ реагент или среда, съдържаща серум – клетките могат да се прехвърлят директно в свежа среда.

Основни характеристики

Готова за употреба 1x стерилно филтрирана течност – не се изисква разреждане или възстановяване
Комбинирана протеолитична и колагенолитична ензимна активност за нежно разграждане
Всяка партида е стандартизирана до определена дисоциационна активност за последователност между партидите
Ензими от небозайнически и небактериален произход
Автоинхибира се при 37 °C – не се изисква неутрализиращ разтвор
Формулиран в PBS на Дълбеко с EDTA
Включен фенол червен като визуален индикатор за pH
pH 6,8 – 7,8


Типични приложения
Accutase нежно дисоциира широка гама от адхезивни и чувствителни клетъчни типове, включително човешки ембрионални стволови клетки (hESCs), човешки индуцирани плюрипотентни стволови клетки (iPSCs), невронални стволови клетки, първични неврони и рутинно култивирани адхезивни линии като HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 и A549. Типични примери за употреба включват:

Рутинно субкултивиране и пасажиране на адхезивни клетки от бозайници
Нежно разграждане на единични клетки от hESCs, iPSCs и други чувствителни линии
Подготовка на проби за проточна цитометрия и FACS анализ
Анализ на маркери на клетъчната повърхност, при които целостта на епитопа е от значение
Тестове за клетъчна миграция, пролиферация и апоптоза
Тестове за покой чрез лишаване от серум и проучвания за трансфекция на онкогени
Тестове за миграция на туморни клетки и клетки от невралния гребен
Увеличаване на производството в биореакторни работни процеси

За рутинна работа нанесете приблизително 10 ml Accutase на 75 cm2 културална повърхност и инкубирайте в продължение на 5–10 минути при стайна температура. Оптималното време за инкубиране трябва да се определи за всяка клетъчна линия и не трябва да надвишава един час. Преди добавянето изплакнете клетъчния слой с разтвор на соли без Ca2+/Mg2+, като например DPBS без калций и магнезий, за да отстраните остатъчното серум и двувалентните катиони.

Работа и съхранение
Съхранявайте затворената бутилка замразена при -15 °C или по-ниска температура. Размразявайте при стайна температура или през нощта при +2 °C до +8 °C. Не размразявайте Accutase във водна баня при 37 °C, тъй като повишените температури намаляват ензимната активност. След размразяване разтворът може да се съхранява до 2 месеца при +2 °C до +8 °C; не съхранявайте при стайна температура. Не загрявайте реагента до 37 °C преди употреба – добавете го директно към измитите клетки при стайна температура. За дълъг срок на съхранение се препоръчва разделяне на аликвоти за еднократна употреба, за да се избегнат повтарящи се цикли на размразяване. Винаги работете при асептични условия.

Качество
Произведен съгласно строги стандарти за качество. Всяка партида Accutase е стерилно филтрирана и тествана за стерилност, pH, външен вид и дисоциационна активност, за да се гарантира постоянна и възпроизводима ефективност от партида до партида.

Спецификации на продукта



Спецификация
Подробности



Тип на продуктаРеагент за отделяне/дисоциация на клетки
ФорматСтерилно филтрирана течност, готова за употреба
Обем100 мл
Работна концентрация1x (готова за употреба)
Ензимна активностКомбинирана протеолитична и колагенолитична
Произход на ензимаНе от бозайници и не от бактерии
Буферна системаPBS на Дълбеко с EDTA
pH индикаторФенол червено
pH диапазон6,8 – 7,8
Външен видПрозрачен разтвор с цвят от бледочервен до оранжев
Температура на съхранение-15 °C или по-ниска
Стабилност след размразяванеДо 2 месеца при +2 °C до +8 °C
Препоръчително количество за употреба~10 мл на 75 cm2 културална повърхност
Типично време за инкубация5 – 10 минути при стайна температура
Условия за транспортиранеЗамразено в сух лед
ПредназначениеСамо за научноизследователски цели и по-нататъшно производство



Формулировка (състав на литър)



Компонент
Концентрация (mg/L)




Неорганични соли

Натриев хлорид (NaCl)8000,00
Динатриев хидрогенфосфат (Na2HPO4)1150,00
Калиев хлорид (KCl)200,00
Калиев дихидрогенфосфат (KH2PO4)200,00

Други компоненти

EDTA · 4Na (тетранатриев EDTA)220,00
Фенол червено3,00
Патентована ензимна смес (протеолитична и колагенолитична активност)1x



Accutase е регистрирана търговска марка на Innovative Cell Technologies, Inc.

Преглед на продукта
Обем: 100 ml Съхранение: ≤-15°C Стерилност: Стерилно филтриран
Антибиотик/антимикотичен разтвор (100x ) е стерилен, готов за употреба концентрат, предназначен за намаляване на рисковете от микробно замърсяване в клетъчни култури и свързани с тях лабораторни приложения. Този разтвор 100x съдържа утвърдена комбинация от пеницилин, стрептомицин и амфотерицин В
- осигуряваща широк спектър на антимикробна активност срещу грам-положителни и грам-отрицателни бактерии, дрожди и нишковидни гъбички. Формулата е подходяща за използване в еукариотни клетъчни култури, бактериални среди и други чувствителни към замърсяване системи, като подпомага чистите и последователни лабораторни операции.
Приложение и предимства Оптимизиран за рутинни изследователски протоколи, този разтвор се използва широко за поддържане на асептични условия в работните процеси на клетъчни култури. То предлага надеждна работа в чувствителни към замърсяване среди, като помага на изследователите да намалят риска от свръхрастеж на микроорганизми, без да се компрометира здравето на клетките или възпроизводимостта на експериментите. Стерилно-филтрираният състав елиминира необходимостта от допълнителни етапи на разтваряне, като подпомага рационализираното приготвяне на среди и намалява променливостта в ежедневните лабораторни процедури.
Употреба и съвместимост За да постигнете стандартни работни концентрации, разредете разтвора в съотношение 1:100 в пълна хранителна среда. Продуктът е съвместим с широк спектър от клетъчни линии на бозайници и базови среди. С постоянната наличност на склад изследователите се възползват от надеждна непрекъснатост на доставките и опростено логистично планиране. За да се запази стабилността, разтворът трябва да се съхранява при ≤ -15 °C и да се предпазва от многократни цикли на замразяване и размразяване. Само за изследователска употреба. Не е предназначен за използване в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.

Разтвор на фосфатно-буфериран физиологичен разтвор (PBS)
Фосфатно-буферираният физиологичен разтвор (PBS) е широко използван буферен разтвор в биологичните и химичните изследвания. Той играе решаваща роля за поддържане на pH баланса и осмоларността по време на различни експериментални процедури, включително обработка на тъкани и клетъчни култури. Нашият разтвор на PBS е щателно формулиран с висококачествени съставки, за да се гарантира стабилност и надеждност при всеки експеримент. Осмоларността и концентрацията на йони в нашия разтвор PBS са близки до тези в човешкото тяло, което го прави изотоничен и нетоксичен за повечето клетки.

Състав на нашия разтвор на PBS
Нашият разтвор на PBS е смес от свръхчисти фосфатни буфери и физиологични разтвори с коригирано pH. В работна концентрация 1Х той съдържа:

8000 mg/L Натриев хлорид (NaCl)
200 mg/L Калиев хлорид (KCl)
1150 mg/L Натриев фосфат двуосновен безводен (Na2HPO4)
200 mg/L Калиев фосфат монобазичен безводен (KH2PO4)

Този състав осигурява оптимално рН и йонно равновесие, подходящи за широк спектър от биологични приложения.

Приложения на нашия разтвор на PBS
Нашият разтвор на PBS е идеален за различни приложения в биологичните изследвания. Неговите изотонични и нетоксични свойства го правят подходящ за разреждане на вещества и за изплакване на клетъчни контейнери. Разтворите PBS, съдържащи EDTA, са ефективни за отделяне на прикрепени и слепени клетки. Въпреки това към PBS не трябва да се добавят двувалентни метали, като например цинк, тъй като това може да доведе до утаяване. В такива случаи се препоръчват буферите на Good's. Освен това нашият разтвор на PBS е приемлива алтернатива на вирусната транспортна среда за транспортиране и съхранение на РНК вируси, включително SARS-CoV-2.

Контрол на качеството

Стерилно филтриран


Съхранение и срок на годност

Съхранявайте при температура от +2°C до +25°C, защитени от светлина.
След отваряне съхранявайте при 2°C до 25°C и използвайте в рамките на 24 месеца.


Условия за транспортиране

Температура на околната среда


Поддръжка

Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.

Състав



Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)


Соли
Калиев хлорид
200



Калиев фосфат монобазичен безводен
200



Натриев хлорид
8000



Натриев фосфат двуосновен безводен
1150