Клетки LLC-MK2 (оригинални)

Средата за замразяване CM-1 на Cytion е най-съвременна среда за криоконсервация, предназначена да осигури най-високо ниво на жизнеспособност и функционалност на клетките след размразяване. Тази универсална среда е подходяща за широк спектър от клетъчни типове, включително човешки и животински клетки, което я прави основен инструмент за различни изследователски приложения. Формулирана с внимателно балансирана комбинация от криопротектори и основни хранителни вещества, средата за замразяване CM-1 свежда до минимум образуването на ледени кристали и клетъчния стрес по време на процеса на замразяване, като по този начин запазва клетъчната цялост.
Основните характеристики на Freeze Medium CM-1 включват:

Широка съвместимост: Ефективна за широк спектър от клетъчни типове, включително първични клетки, стволови клетки и установени клетъчни линии.
Висока жизнеспособност: Оптимизирана за максимално възстановяване на клетките след размразяването им и тяхната жизнеспособност, което гарантира надеждни експериментални резултати.
Готов за употреба: Удобно подготвени и стерилизирани за незабавно приложение, което намалява времето за подготовка и риска от замърсяване.
Повишена стабилност: Поддържа постоянна производителност при стандартни условия на криоконсервация, като осигурява възпроизводими резултати.
Дълъг срок на съхранение: CM-1 е готова за употреба среда за криоконсервация, съдържаща серум, която може да се съхранява в хладилник до една година.


Използване на CM-1 за замразяване на клетки

За да използвате CM-1 за замразяване на адхезивни и суспензионни клетки, следвайте следните стъпки

За адхерентни клетки ги измийте и ги отделете от субстрата за култивиране. За суспензионни клетки преминете директно към следващата стъпка.
Пребройте клетките, за да се уверите, че те са с подходяща концентрация.
Центрофугирайте клетките, за да ги пелетирате, след което ги ресуспендирайте в среда за замразяване CM-1.
Прехвърлете ресуспендираните клетки в криовиали.
Използвайте метод за бавно замразяване, преди да прехвърлите клетките за дългосрочно съхранение





Метод
Описание
Стъпки





❄️
Ръчно замразяване

Метод, включващ постепенно намаляване на температурата, за да се осигури жизнеспособността на клетките

1️⃣ Поставете клетките в среда за замразяване във фризер с температура 4 °C за 40 минути.
2️⃣ Прехвърлете във фризер с температура -80°C за 24 часа.
3️⃣ Съхранявайте клетките в течен азот за дългосрочно запазване



❄️
Използване на Mr. Frosty

Удобно устройство, което позволява контролирана скорост на замразяване без електрическо захранване

1️⃣ Подгответе клетките в криовиали със замразяваща среда.
2️⃣ Поставете криовиолите в контейнера на Mr. Frosty.
3️⃣ Съхранявайте при -80 °C за 24 часа, преди да прехвърлите в течен азот



❄️
Фризер с контролирана скорост

Високопрецизен фризер на Thermo Fisher или на други производители, предназначен за контролирано намаляване на температурата

1️⃣ Програмирайте устройството за постепенно намаляване на температурата.
2️⃣ Поставете подготвените клетки във фризера.
3️⃣ След цикъла на замразяване прехвърлете клетките в течен азот









Съхранявайте криовиолите при температури под -130 °C или в течен азот за дългосрочно съхранение.


Съставки

Съдържа FBS, DMSO, глюкоза, соли
Буфериращ капацитет: pH = 7,2 до 7,6


Средата за замразяване CM-1 на Cytion предлага надеждно решение за криоконсервация, като осигурява висока клетъчна жизнеспособност и функционалност след размразяване за широк спектър от изследователски приложения.

Среда 199 е универсална и широко използвана среда за клетъчни култури, специално разработена за култивиране на първични експланти. Тази всеобхватна среда съчетава основни витамини, аминокиселини и други фактори, за да осигури напълно определен хранителен източник за различни видове клетки. Тя е особено подходяща за нетрансформирани клетки, което я прави безценен инструмент за биологични изследвания.
Среда 199 предлага редица приложения в областта. Тя може ефективно да поддържа комплекса кумулус-оцит (COC) и да подпомага ин витро съзряването на яйцеклетки. Освен това тя се използва при промиване на аспирационни линии по време на събиране на яйцеклетки от немски крави от породата Холщайн. Освен това среда 199 служи като отлична среда за култивиране на сърдечни ендотелни клетки, получени от плъхове. Тези приложения демонстрират гъвкавостта и приспособимостта на среда 199 към различни експериментални нужди.
История
Разработването на среда 199 през 50-те години на миналия век бележи значителен напредък в областта на средите за тъканни култури. Преди нейното въвеждане много среди за култивиране са разчитали на продукти от животински произход и тъканни екстракти. Морган и колегите му обаче правят революция в тази област, като формулират напълно определен хранителен източник за клетъчни култури. Чрез своите експерименти, включващи различни комбинации от витамини, аминокиселини и други фактори, те откриват изключителните свойства на среда 199, стимулираща растежа.
Контрол на качеството

pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Всяка партида е тествана за стерилност и липса на микоплазма и бактерии.

Поддръжка

Съхранявайте в хладилник на тъмно при температура от +2°C до +8°C. Замразяването и затоплянето до +37°С намаляват до минимум качеството на продукта.
Не нагрявайте средата до повече от 37°С и не използвайте неконтролируеми източници на топлина (напр. микровълнови уреди).
Ако трябва да се използва само част от средата, извадете това количество от бутилката и го загрейте на стайна температура.
Срокът на годност на всяка среда, с изключение на основната среда, е 8 седмици от датата на производство.

Състав




Компоненти
mg/L


Неорганични соли
Калциев хлорид x 2H2O
264,92



Железен (III) нитрат x 9H2O
0,72



Магнезиев сулфат
97,67



Калиев хлорид
400,00



Натриев ацетат x 3H2O
82,95



Натриев хлорид
6,800.00



Натриев дихидрогенфосфат x H2O
140,00


Други компоненти
Аденин сулфат
10,00



AMP
0,20



ATP
1,00



Холестерол
0,20



2'-дезоксирибоза
0,50



D(+)-глюкоза, безводна
1,000.00



Глутатион (червен)
0,05



Гуанин х HCl
0,30



Хипоксантин
0,30



Фенол червено
10,00



D-рибоза
0,50



Тимин
0,30



Tween 80
4,90



Урацил
0,30



Ксантин
0,30



NaHCO3
2,200.00


Аминокиселини
L-аланин
25,00



L-аргинин x HCl
70,00



L-аспарагинова киселина
30,00



L-цистеин x HCl x H2O
0,10



L-цистин
20,00



Стабилен L-глутамин
149,00



L-глутаминова киселина
67,00



Глицин
50,00



L-хистидин x HCl x H2O
21,88



L-хидроксипролин
10,00



L-изолевцин
20,00



L-Leucine
60,00



L-лизин x HCl
70,00



L-метионин
15,00



L-фенилаланин
25,00



L-пролин
40,00



L-серин
25,00



L-треонин
30,00



L-триптофан
10,00



L-тирозин
40,00



L-валин
25,00


Витамини
4-аминобензоена киселина
0,05



Аскорбинова киселина
0,05



D(+)-Биотин
0,01



Калциферол
0,10



D-калциев пантотенат
0,01



Холин хлорид
0,50



Фолиева киселина
0,01



мио-Инозитол
0,05



Менадион
0,01



Никотинова киселина
0.025



Никотинамид
0.025



Пиридоксал х HCl
0.025



Пиридоксол х HCl
0.025



Рибофлавин
0,01



DL-α-токоферол фосфат динатриева сол
0,01



Тиамин х HCl
0,01



Витамин А ацетат
0,14

Разтвор за отделяне на клетки Accutase с EDTA и фенол червено – 100 мл

Accutase е готов за употреба, стерилно филтриран разтвор за отделяне на клетки, създаден като щадяща алтернатива на трипсин/EDTA за отделяне на адхезивни клетки от бозайници от стандартни пластмасови съдове за тъканни култури и повърхности с адхезивно покритие. Той съчетава протеолитична и колагенолитична ензимна активност в балансиран солен разтвор, за да осигури ефективно, но контролирано отделяне, като запазва протеините на клетъчната повърхност и подпомага висока жизнеспособност след пасаж и бързо повторно прикрепване.

Формулата на Accutase се основава на фосфатно-буфериран физиологичен разтвор на Дълбеко (DPBS) с EDTA и фенол червено като визуален индикатор за pH. Ензимите са от небозайнически и небактериален произход, което прави Accutase особено подходящ за изследвания на стволови клетки, работни процеси при ваксини и всякакви приложения, при които трябва да се сведе до минимум наличието на замърсители от животински или микробен произход. Разтворът се самоинхибира при 37 °C, така че след отделянето не се изисква неутрализиращ реагент или среда, съдържаща серум – клетките могат да се прехвърлят директно в свежа среда.

Основни характеристики

Готова за употреба 1x стерилно филтрирана течност – не се изисква разреждане или възстановяване
Комбинирана протеолитична и колагенолитична ензимна активност за нежно разграждане
Всяка партида е стандартизирана до определена дисоциационна активност за последователност между партидите
Ензими от небозайнически и небактериален произход
Автоинхибира се при 37 °C – не се изисква неутрализиращ разтвор
Формулиран в PBS на Дълбеко с EDTA
Включен фенол червен като визуален индикатор за pH
pH 6,8 – 7,8


Типични приложения
Accutase нежно дисоциира широка гама от адхезивни и чувствителни клетъчни типове, включително човешки ембрионални стволови клетки (hESCs), човешки индуцирани плюрипотентни стволови клетки (iPSCs), невронални стволови клетки, първични неврони и рутинно култивирани адхезивни линии като HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 и A549. Типични примери за употреба включват:

Рутинно субкултивиране и пасажиране на адхезивни клетки от бозайници
Нежно разграждане на единични клетки от hESCs, iPSCs и други чувствителни линии
Подготовка на проби за проточна цитометрия и FACS анализ
Анализ на маркери на клетъчната повърхност, при които целостта на епитопа е от значение
Тестове за клетъчна миграция, пролиферация и апоптоза
Тестове за покой чрез лишаване от серум и проучвания за трансфекция на онкогени
Тестове за миграция на туморни клетки и клетки от невралния гребен
Увеличаване на производството в биореакторни работни процеси

За рутинна работа нанесете приблизително 10 ml Accutase на 75 cm2 културална повърхност и инкубирайте в продължение на 5–10 минути при стайна температура. Оптималното време за инкубиране трябва да се определи за всяка клетъчна линия и не трябва да надвишава един час. Преди добавянето изплакнете клетъчния слой с разтвор на соли без Ca2+/Mg2+, като например DPBS без калций и магнезий, за да отстраните остатъчното серум и двувалентните катиони.

Работа и съхранение
Съхранявайте затворената бутилка замразена при -15 °C или по-ниска температура. Размразявайте при стайна температура или през нощта при +2 °C до +8 °C. Не размразявайте Accutase във водна баня при 37 °C, тъй като повишените температури намаляват ензимната активност. След размразяване разтворът може да се съхранява до 2 месеца при +2 °C до +8 °C; не съхранявайте при стайна температура. Не загрявайте реагента до 37 °C преди употреба – добавете го директно към измитите клетки при стайна температура. За дълъг срок на съхранение се препоръчва разделяне на аликвоти за еднократна употреба, за да се избегнат повтарящи се цикли на размразяване. Винаги работете при асептични условия.

Качество
Произведен съгласно строги стандарти за качество. Всяка партида Accutase е стерилно филтрирана и тествана за стерилност, pH, външен вид и дисоциационна активност, за да се гарантира постоянна и възпроизводима ефективност от партида до партида.

Спецификации на продукта



Спецификация
Подробности



Тип на продуктаРеагент за отделяне/дисоциация на клетки
ФорматСтерилно филтрирана течност, готова за употреба
Обем100 мл
Работна концентрация1x (готова за употреба)
Ензимна активностКомбинирана протеолитична и колагенолитична
Произход на ензимаНе от бозайници и не от бактерии
Буферна системаPBS на Дълбеко с EDTA
pH индикаторФенол червено
pH диапазон6,8 – 7,8
Външен видПрозрачен разтвор с цвят от бледочервен до оранжев
Температура на съхранение-15 °C или по-ниска
Стабилност след размразяванеДо 2 месеца при +2 °C до +8 °C
Препоръчително количество за употреба~10 мл на 75 cm2 културална повърхност
Типично време за инкубация5 – 10 минути при стайна температура
Условия за транспортиранеЗамразено в сух лед
ПредназначениеСамо за научноизследователски цели и по-нататъшно производство



Формулировка (състав на литър)



Компонент
Концентрация (mg/L)




Неорганични соли

Натриев хлорид (NaCl)8000,00
Динатриев хидрогенфосфат (Na2HPO4)1150,00
Калиев хлорид (KCl)200,00
Калиев дихидрогенфосфат (KH2PO4)200,00

Други компоненти

EDTA · 4Na (тетранатриев EDTA)220,00
Фенол червено3,00
Патентована ензимна смес (протеолитична и колагенолитична активност)1x



Accutase е регистрирана търговска марка на Innovative Cell Technologies, Inc.

Преглед на продукта
Обем: 100 ml Съхранение: ≤-15°C Стерилност: Стерилно филтриран
Антибиотик/антимикотичен разтвор (100x ) е стерилен, готов за употреба концентрат, предназначен за намаляване на рисковете от микробно замърсяване в клетъчни култури и свързани с тях лабораторни приложения. Този разтвор 100x съдържа утвърдена комбинация от пеницилин, стрептомицин и амфотерицин В
- осигуряваща широк спектър на антимикробна активност срещу грам-положителни и грам-отрицателни бактерии, дрожди и нишковидни гъбички. Формулата е подходяща за използване в еукариотни клетъчни култури, бактериални среди и други чувствителни към замърсяване системи, като подпомага чистите и последователни лабораторни операции.
Приложение и предимства Оптимизиран за рутинни изследователски протоколи, този разтвор се използва широко за поддържане на асептични условия в работните процеси на клетъчни култури. То предлага надеждна работа в чувствителни към замърсяване среди, като помага на изследователите да намалят риска от свръхрастеж на микроорганизми, без да се компрометира здравето на клетките или възпроизводимостта на експериментите. Стерилно-филтрираният състав елиминира необходимостта от допълнителни етапи на разтваряне, като подпомага рационализираното приготвяне на среди и намалява променливостта в ежедневните лабораторни процедури.
Употреба и съвместимост За да постигнете стандартни работни концентрации, разредете разтвора в съотношение 1:100 в пълна хранителна среда. Продуктът е съвместим с широк спектър от клетъчни линии на бозайници и базови среди. С постоянната наличност на склад изследователите се възползват от надеждна непрекъснатост на доставките и опростено логистично планиране. За да се запази стабилността, разтворът трябва да се съхранява при ≤ -15 °C и да се предпазва от многократни цикли на замразяване и размразяване. Само за изследователска употреба. Не е предназначен за използване в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.

Разтвор на фосфатно-буфериран физиологичен разтвор (PBS)
Фосфатно-буферираният физиологичен разтвор (PBS) е широко използван буферен разтвор в биологичните и химичните изследвания. Той играе решаваща роля за поддържане на pH баланса и осмоларността по време на различни експериментални процедури, включително обработка на тъкани и клетъчни култури. Нашият разтвор на PBS е щателно формулиран с висококачествени съставки, за да се гарантира стабилност и надеждност при всеки експеримент. Осмоларността и концентрацията на йони в нашия разтвор PBS са близки до тези в човешкото тяло, което го прави изотоничен и нетоксичен за повечето клетки.

Състав на нашия разтвор на PBS
Нашият разтвор на PBS е смес от свръхчисти фосфатни буфери и физиологични разтвори с коригирано pH. В работна концентрация 1Х той съдържа:

8000 mg/L Натриев хлорид (NaCl)
200 mg/L Калиев хлорид (KCl)
1150 mg/L Натриев фосфат двуосновен безводен (Na2HPO4)
200 mg/L Калиев фосфат монобазичен безводен (KH2PO4)

Този състав осигурява оптимално рН и йонно равновесие, подходящи за широк спектър от биологични приложения.

Приложения на нашия разтвор на PBS
Нашият разтвор на PBS е идеален за различни приложения в биологичните изследвания. Неговите изотонични и нетоксични свойства го правят подходящ за разреждане на вещества и за изплакване на клетъчни контейнери. Разтворите PBS, съдържащи EDTA, са ефективни за отделяне на прикрепени и слепени клетки. Въпреки това към PBS не трябва да се добавят двувалентни метали, като например цинк, тъй като това може да доведе до утаяване. В такива случаи се препоръчват буферите на Good's. Освен това нашият разтвор на PBS е приемлива алтернатива на вирусната транспортна среда за транспортиране и съхранение на РНК вируси, включително SARS-CoV-2.

Контрол на качеството

Стерилно филтриран


Съхранение и срок на годност

Съхранявайте при температура от +2°C до +25°C, защитени от светлина.
След отваряне съхранявайте при 2°C до 25°C и използвайте в рамките на 24 месеца.


Условия за транспортиране

Температура на околната среда


Поддръжка

Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.

Състав



Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)


Соли
Калиев хлорид
200



Калиев фосфат монобазичен безводен
200



Натриев хлорид
8000



Натриев фосфат двуосновен безводен
1150