Hep3B细胞：肝细胞癌研究与发现
HEP3B是一种源自人类的永生化肝细胞癌细胞系。它广泛应用于肝毒性及药物代谢研究。 HEP3B细胞的转染效率极高，因此常被用于研究肝癌的发生、进展及治疗干预措施。本文涵盖了关于HEP3B细胞系的所有必要信息，以协助您开展相关研究。主要内容包括：
- 培养基
- HEP3B细胞的培养使用含10% FBS、2.2 g/L NaHCO3、2 mM L-谷氨酰胺及Earle's平衡盐溶液（EBSS）的EMEM培养基。
- 倍增时间
- HEP3B细胞的倍增时间约为36小时。
- 生长类型
- 该肝癌细胞系为贴壁型。
- 生物安全等级
- BSL-1
HEP3B细胞的一般特征与来源
关于细胞系，您最需要了解的是其来源和一般特征。这些信息有助于您决定在研究中如何使用该细胞系，并指导您对其进行操作。本文部分涵盖了关于HEP3B来源和特征的所有必要信息。 您将在此了解：什么是HEP3B细胞系？HEP3B细胞的来源是什么？HEP3B细胞的形态特征如何？
- HEP3B是一种持续性人肝癌细胞系，源自一名患有肝细胞癌（HCC）的8岁非洲男童的肝组织。 该细胞系由Aden及其同事于1979年在美国费城威斯塔研究所（Wistar Institute）的Barbara B. Knowles实验室建立[1]。
- HEP3B细胞的染色体中整合了乙型肝炎病毒（HBV）基因组。
- 这些肝细胞癌细胞表现出上皮形态。
- HEP3B 细胞的模态染色体数为 60。与 HepG2 不同，它们不具有重排的 1 号染色体。
HepG2 和 Hep3B 有什么区别？
HepG2和HEP3B在每细胞的染色体数上有所不同。HEP3B含有60条染色体，而HepG2细胞平均含有55条染色体。此外，HepG2不具有致瘤性且乙型肝炎病毒检测呈阴性，而HEP3B具有致瘤性且乙型肝炎病毒检测呈阳性。
HEP3B细胞系的培养信息
了解细胞系的培养信息能让您更轻松地进行操作。本节涵盖了培养HEP3B HBV细胞系的所有要点，包括：HEP3B细胞的倍增时间是多少？HEP3B的培养条件是什么？如何培养HEP3B HCC细胞？
HEP3B细胞培养要点
倍增时间：
HEP3B细胞的倍增时间约为36小时。
贴壁型还是悬浮型：
该肝癌细胞系为贴壁型。
传代倍数：
HEP3B细胞的分传比例为1:2至1:4。贴壁的HEP3B细胞用1×PBS冲洗后，加入Accutase解离液进行孵育。 8至10分钟后，加入新鲜培养基，并将细胞离心。随后将收获的细胞小心重悬，并按推荐的分传比例注入含有培养基的培养瓶中。
生长培养基：
培养HEP3B细胞使用含10% FBS、2.2 g/L NaHCO3、2 mM L-谷氨酰胺及Earle's平衡盐溶液（EBSS）的EMEM培养基。
培养条件：
HEP3B细胞在37°C恒湿培养箱中培养，并持续供应5%二氧化碳。
储存：
冷冻的HEP3B细胞应保存在-150°C以下的电冻柜中，或保存在液氮的蒸汽相中。
冷冻过程与培养基：
推荐用于 HEP3B 细胞的冷冻培养基为 CM-1 或 CM-ACF。采用缓慢冷冻法进行冷冻，每分钟温度降幅仅为 1°C，以保护细胞存活率。
解冻过程：
将冷冻细胞置于预设为37°C的水浴中解冻40至60秒。随后将这些细胞加入新鲜培养基中，并进行离心以去除冷冻培养基成分。收集的细胞经重悬后，分装至新的培养瓶中进行培养。
生物安全等级：
HEP3B细胞培养需在1级生物安全实验室进行。
HEP3B细胞系：优势与局限性
HEP3B是一种广泛使用的肝细胞癌细胞系。本节将重点介绍该肝癌细胞系的一些主要优势与局限性。
优势
HEP3B细胞的主要优势包括：
易于培养
HEP3B细胞对培养条件要求不高，因此在研究实验室中易于操作和维护。这简化了实验流程。
转染效率高
HEP3B细胞表现出卓越的转染效率，因此被广泛应用于基因操作和基因表达相关研究。
致瘤性
HEP3B 是一种具有致瘤性的肝细胞癌细胞系，当注入免疫缺陷小鼠体内时能够形成肿瘤。这有助于利用 HEP3B 异种移植模型研究癌症的进展与发展。
HEP3B的P53状态
HEP3B细胞携带与肝细胞癌（HCC）及其他癌症相似的P53基因突变，因此适用于研究P53突变对癌症生长、发育和进展的影响。
局限性
HEP3B细胞系相关的局限性包括：
体外细胞模型
HEP3B细胞系作为肝细胞癌（HCC）细胞的体外模型。然而，它可能无法完全反映活体中HCC的复杂性。因此，体外实验结果可能与体内观察到的结果存在差异。
HEP3B细胞在研究中的应用
HEP3B细胞系在生物医学研究中具有多种应用。HEP3B细胞的主要研究应用包括：
- 癌症生物学：HEP3B是一种人类肝细胞癌细胞系。它是研究HCC发生和发展背后细胞及分子机制的宝贵细胞模型。研究人员利用这些细胞研究与肝癌相关的基因突变、细胞过程和细胞信号传导通路。 例如，一项研究利用HEP3B细胞发现，microRNA-223-3p可调节NLRP3炎性小体组分，抑制HEP3B肝细胞癌细胞的增殖并增强其凋亡[2]。
- 药物筛选与开发：HEP3B细胞系还被用于测试、筛选和开发针对肝癌的新型治疗药物。此外，它还用于评估不同抗癌药物和治疗方案的毒性和疗效。 研究人员还利用这些肝癌细胞研究药物代谢。研究人员使用HEP3B细胞，评估了烟木（Cotinus coggygria）植物提取物对HEP3B肝细胞癌细胞的细胞毒性潜力[3]。
- 病毒感染：HEP3B是一种乙型肝炎病毒阳性细胞系；因此，它被用于研究可能导致肝癌发展的病毒感染，即乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）。这有助于更好地理解病毒感染并开发潜在的抗病毒治疗方法。 例如，一项研究利用HEP3B肝细胞癌细胞，探讨了泛素化在丙型肝炎病毒传播中的重要性。 研究结果表明，泛素特异性蛋白酶 15 (USP15) 通过调节肝细胞特异性功能（包括脂滴形成和 HCV RNA 翻译）参与 HCV 的传播 [4]。
5. 关于HEP3B细胞系的文献
本文这一部分将介绍几篇关于HEP3B细胞的有趣研究论文。
发表于《生物化学与生物物理研究通讯》（2019年）的这篇论文提出，木犀草素诱导的内质网应激可能以一种P53独立的方式，在P53缺失的HEP3B细胞中发挥抗肿瘤作用。
从海滨海棠中分离出的卢佩醇对HEP3B肝癌细胞的潜在靶向作用
发表于《药学档案》（2021年）的这项研究提出，五环三萜类化合物卢佩醇可能是针对HEP3B细胞的潜在抗癌药物。
Cnidium monnieri (L.) Cusson 的乙醇提取物通过调节 HepG2 和 Hep3B 肝细胞癌细胞中的 p53 独立通路诱导细胞周期停滞和凋亡
该文章发表于《分子医学报告》（2017年）。 研究结果表明，Cnidium monnieri (L.) Cusson的乙醇提取物通过调节p53和Akt/GSK-3β信号通路，在HepG2和HEP3B肝细胞癌细胞中诱导细胞死亡（凋亡）和细胞周期阻滞。
奥拉诺芬通过失活PI3K/Akt信号通路增强硫代葡萄糖苷介导的Hep3B肝细胞癌细胞凋亡
发表于《生物分子与治疗学》（2020）的这项研究提出，奥拉诺芬表现出协同活性，并通过激活PI3K/AKT通路促进硫代葡萄糖苷介导的HEP3B细胞凋亡。
环状RNA-0072309通过靶向microRNA-665对Hep3B细胞系产生抗肿瘤作用
发表于《BioFactors》（2023年）的这篇研究论文提出，环状RNA-0072309通过靶向miRNA-665在肝细胞癌细胞HEP3B中发挥抗肿瘤作用。
HEP3B细胞系相关资源：实验方案、视频及其他
以下是关于HEP3B细胞的若干资源：
- HEP3B转染：本视频将讲解HEP3B细胞的转染操作流程。
- HEP3B转染效率：此链接将帮助您了解HEP3B DMEM培养基成分、细胞传代以及HEP3B细胞的转染方案。此外，它还提供了关于在转染方案中优化HEP3B Lipofectamine 3000试剂的信息。
以下链接包含HEP3B细胞培养方案：
- HEP3B培养条件：此链接将帮助您了解Huh7和HEP3B细胞培养的处理与维护方案。
- HEP3B细胞：该网站提供了大量关于HEP3B细胞的信息，包括HEP3B培养基、细胞传代、解冻以及增殖性与冷冻保存细胞培养的操作规程。
参考文献
- Puttahanumantharayappa, L.D. 等，肝细胞癌细胞系的起源与特性。《日本胃肠病学研究杂志》，2021. 1(8): 第 1040 页。
- Wan, L. 等，miRNA-223-3p 通过调节 NLRP3 促进 Hep3B 细胞凋亡并抑制其增殖。《实验与治疗医学》，2018. 15(3): 第 2429-2435 页。
- Danjolli-Hashani, D. 和 S. Selen-Isbilir，烟草木提取物对Hep3B癌细胞系的细胞毒性作用。《天然产物研究》，2022：第1-4页。
- Kusakabe, S. 等，USP15 通过调节病毒 RNA 翻译和脂滴形成参与丙型肝炎病毒的传播。 《病毒学杂志》，2019年，93(6)：10.1128/jvi.01708-18。