B16-F10 细胞——在转移研究中探索 B16-F10 黑色素瘤细胞系
B16-F10细胞是一种源自C57BL/6J小鼠的黑素瘤细胞系，广泛应用于皮肤癌研究。 研究人员利用这些细胞研究肿瘤的发生发展、进展以及治疗干预措施。本文将介绍B16-F10黑色素瘤细胞的基本特性，重点包括：
- 培养基
- B16-F10细胞在DMEM培养基中培养。为实现最佳细胞生长，培养基中需添加10%胎牛血清（FBS）、4 mM L-谷氨酰胺、1.5 g/L碳酸氢钠（NaHCO3）、4.5 g/L葡萄糖以及1.0 mM丙酮酸钠。 培养基应每周更换 2 至 3 次。
- 倍增时间
- B16-F10 细胞的倍增时间约为 20.1 小时。根据培养条件不同，倍增时间可能在 17 至 21 小时之间。
- 生长类型
- B16-F10 是一种贴壁细胞系。该细胞生长迅速，形成单层。
- 生物安全等级
- BSL-1
- B16-F10细胞系的来源与一般特性
- B16-F10细胞的培养信息
- B16-F10细胞：优缺点
- B16-F10细胞的研究应用
- 涉及 B16-F10 细胞系的文献
- B16-F10细胞系资源：操作指南、视频及其他
B16-F10细胞系的来源与一般特征
本节将为您深入解析 B16-F10 黑色素瘤肿瘤细胞的来源及其独特属性，助您在研究工作中高效利用该细胞系。您将主要了解：什么是 B16-F10 细胞？ B16-F10源自何处？B16-F10细胞系的形态特征如何？B16-F10细胞的大小是多少？
- B16-F10是源自C57BL/6J小鼠皮肤组织的B16肿瘤细胞系的亚克隆。在此，B16F10黑色素瘤细胞是通过将B16细胞系静脉注射到免疫缺陷小鼠或同基因小鼠体内后建立的。 这些细胞因其具有在体内形成转移性肺部克隆的潜力而被筛选出来，随后经过十轮体外肺部克隆形成实验后建立起来[1]。该细胞系由 Fidler 及其同事于 1976 年建立。
- B16-F10细胞系具有上皮样和纺锤形的外观。
- B16-F10 细胞的大小约为 15.4 ± 1.4 μm [2]。
B16-F1 和 B16-F10 细胞
B16-F1 和 B16-F10 细胞均源自 B16 亲本细胞系。两者起源相同，且具有几乎相似的特征。然而，它们的主要区别在于转移能力。 B16-F10 细胞具有较高的转移潜力，而 B16-F1 则较低 [3]。
B16-F10细胞的培养信息
在操作和培养细胞系之前，您必须了解其倍增时间、培养基、培养条件以及细胞培养方案。本节将讨论：B16-F10细胞的倍增时间是多少？如何培养B16-F10细胞？B16-F10细胞的培养基是什么？ B16-F10细胞推荐采用哪些培养条件？
B16-F10细胞培养要点
倍增时间：
B16-F10细胞的倍增时间约为20.1小时。根据培养条件不同，该时间可能在17至21小时之间波动。
贴壁或悬浮：
B16-F10 属于贴壁细胞系。该细胞生长迅速，可形成单层。
传代倍数：
B16-F10细胞以1:2至1:4的分传比进行传代。用磷酸盐缓冲盐水（1x）洗涤细胞，随后在室温下用Accutase传代液孵育8至10分钟。加入新鲜培养基并离心。 收集的细胞沉淀再次悬浮，并根据传代倍数将细胞分装至装有新鲜培养基的新培养瓶中。
生长培养基：
B16-F10细胞采用DMEM培养基培养。为促进细胞理想生长，培养基中需添加10%胎牛血清（FBS）、4 mM L-谷氨酰胺、1.5 g/L碳酸氢钠、4.5 g/L葡萄糖及1.0 mM丙酮酸钠。 培养基应每周更换2至3次。
培养条件：
B16-F10细胞在37 °C、5% CO₂浓度的加湿培养箱中培养。
保存：
冷冻细胞应保存在-150 °C以下的电动超低温冷冻柜中，或置于液氮气相中，以维持细胞活力。
冷冻流程与培养基：
B16-F10细胞需在CM-1或CM-ACF培养基中冷冻保存。为此，建议采用每分钟温度仅下降1°C的缓慢冷冻过程，以防止细胞受到冷冻冲击。
解冻过程：
冷冻的 B16-F10 细胞在预设为 37°C 的水浴中解冻 40 至 60 秒。随后，将细胞加入新鲜培养基中并离心，以去除冷冻培养基中的成分。收集的细胞用生长培养基重悬，并倒入培养瓶中进行培养。
生物安全等级：
处理和维护B16-F10细胞系需在生物安全1级实验室进行。
B16-F10细胞：优点与缺点
与其他细胞系一样，B16-F10 也具有一些优点和缺点。本节将讨论该皮肤黑色素瘤细胞系的一些显著优缺点。
优点
B16-F10细胞系在癌症研究中被广泛应用。B16-F10细胞的优势包括：
转移潜力
皮肤黑色素瘤 B16-F10 细胞具有较高的转移潜力，这使其在研究癌症转移及其潜在机制方面具有重要价值。
体外肿瘤模型
B16-F10细胞可作为研究癌症进展和生长的体外模型，帮助研究人员理解驱动癌症发展的细胞和分子机制。
缺点
B16-F10细胞系的相关缺点包括：
源自小鼠的细胞系
B16-F10 是一种源自小鼠的细胞系，这限制了其在人类特异性研究中的适用性。基于这些细胞的研究结果未必能完全适用于人类生物学。
B16-F10细胞的研究应用
B16-F10细胞系在癌症研究中被广泛应用。本文将探讨该细胞系的几个有前景的应用方向。
- 癌症研究：B16-F10细胞系是研究癌细胞过程（包括增殖、侵袭、迁移以及细胞死亡或凋亡）的宝贵模型。此外，它有助于研究人员深入了解驱动这些细胞过程的分子机制和信号通路。 2018年的一项研究探讨了CCR5（C-C趋化因子受体5型）在黑色素瘤细胞上皮-间质转化及转移中的作用。 研究结果表明，CCR5缺失可抑制肿瘤生长和转移，而高表达则会导致B16-F10细胞的生长和转移增强。 后续研究指出，CCR5通过调控TGFβ1的表达，进而调节PI3K/AKT/GSK3β信号通路，从而促进上皮-间质转化和细胞迁移[4]。
- 药物测试与开发：B16F10黑色素瘤细胞具有高度侵袭性，因此非常适合用于测试潜在的抗肿瘤药物和治疗方法。研究人员利用这些细胞评估不同化合物对细胞生长、增殖和转移的影响，从而辅助药物开发。 Valentina Nanni及其同事于2018年开展的一项研究，探讨了Spartiumjunceum花的水醇提取物的治疗效果。 该研究提出，花提取物能有效诱导B16-F10细胞衰老，从而抑制细胞生长和黑色素生成，因此可能具有潜在的抗癌活性[5]。
5. 涉及B16-F10细胞系的文献
以下是一些以B16-F10黑色素瘤细胞系为研究对象的重要文献：
双色高粱乙醇提取物对IBMX诱导的B16/F10黑色素瘤细胞黑色素生成的抑制作用
该研究发表于《Nutrients》（2020年）。研究提出，双色高粱乙醇提取物对皮肤黑色素瘤B16F10细胞具有抗黑色素生成作用。
发表于《医学科学监测：基础研究》（2022年）的研究指出，钙三醇通过抑制增殖并诱导凋亡，在B16-F10黑色素瘤细胞中发挥抗肿瘤作用。
卡多尔的促氧化作用与其对小鼠B16–F10黑色素瘤细胞的细胞毒性活性有关
该文章发表于《生物化学与生物物理研究通讯》（2022年）。研究结果表明，作为间苯二酚类脂质的卡多尔对B16-F10细胞系具有强烈的细胞毒性。
银杏外果皮提取物通过PI3K/Akt/NF-κB/MMP-9信号通路抑制B16-F10黑色素瘤转移
发表于《循证补充与替代医学》（2018年）的研究利用B16-F10细胞，探讨了银杏外果皮提取物的抗转移潜力。
硫辛酮通过抑制p-STAT3诱导B16-F10黑色素瘤细胞凋亡，并抑制小鼠脑内黑色素瘤的生长……
发表于《世界神经外科》（2018年）的这项研究提出，由于胸腺呋喃酮能抑制B16-F10细胞生长并诱导凋亡，因此可作为治疗脑内转移病灶的有效疗法。
B16-F10细胞系相关资源：操作指南、视频及其他
B16F10内皮细胞广泛应用于皮肤癌研究。以下是一些介绍其培养和转染方案的在线资源：
- B16F10黑色素瘤细胞转染：本视频教程可帮助您掌握B16-F10细胞的转染操作流程。
- B16-F10转染：本文档将详细说明皮肤黑色素瘤B16F10细胞的体外DNA转染方案。
以下链接包含 B16-F10 细胞的细胞培养方案：
- B16-F10 传代培养：该网站提供了关于 B16F10 黑色素瘤肿瘤细胞的有用信息。内容涵盖生长培养基、倍增时间、培养条件、细胞传代培养方案，以及冷冻保存和增殖性培养物的处理方法。
参考文献
- Poste, G. 等，来自培养细胞系、皮下肿瘤及单个肺转移灶的分离B16黑色素瘤克隆的转移特性比较。《癌症研究》，1982年，42(7): 2770-2778页。
- Nakamura, M., D. Ono, and S. Sugita, “利用锥形微流控装置对B16黑色素瘤细胞变体进行力学表型分析，以评估(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯的治疗效果”。《微机械》，2019. 10(3): 第 207 页。
- Danciu, C. 等，四种不同 B16 小鼠黑色素瘤细胞亚系的行为：C57BL/6J 皮肤。《国际实验病理学杂志》，2015。96(2)：第 73-80 页。
- Liu, J. 等，黑色素瘤中 CCR5 的高表达通过 TGFβ1 增强上皮-间质转化和转移。《病理学杂志》，2019 年。247(4): 第 481-493 页。
- Nanni, V. 等，Spartium junceum L. 花的水醇提取物通过诱导衰老抑制 B16-F10 细胞的增殖和黑色素生成。《植物医学》，2018. 46: 1-10 页。