A375细胞系——黑色素瘤研究指南
A375是一种广泛应用于毒理学和免疫肿瘤学研究的人类黑色素瘤细胞系。研究人员利用该细胞系研究癌症生物学和信号传导通路，测试或筛选潜在的抗癌药物，并开发新型有效的治疗方法。
- 培养基
- 参见产品页面
- 倍增时间
- 参见产品页面
- 生长类型
- 贴壁
- 生物安全等级
- BSL-1
A375细胞的来源与一般特征
了解细胞系的来源和一般特征有助于您规划其在研究中的应用。本文这一部分将介绍 A375 细胞系的来源和特征。例如：什么是 A375 细胞系？A375 细胞系有哪些特征？A375 细胞来自哪里？A375 黑色素瘤细胞的形态如何？A375 细胞的大小是多少？
- 皮肤癌细胞系A375源自一名54岁女性恶性黑色素瘤患者的实体瘤组织块培养[1]。
- A375细胞具有上皮样形态。
- 与其他细胞系相比，A375细胞的体积相对较小，其直径约为12微米。
- A375黑色素瘤细胞为次三倍体。该细胞系的模态染色体数为62。通常，每个细胞含有9条标记染色体，以及各1条正常的N2、N6和N22染色体。
A375细胞：细胞培养信息
A375细胞培养易于维持，对培养条件要求不高。本节将帮助您了解必要的细胞培养信息，例如A375细胞的倍增时间是多少？A375细胞系的培养基是什么？A375细胞的接种密度是多少？A375黑色素瘤细胞是否为贴壁细胞？
A375细胞培养要点
细胞倍增时间：
A375细胞的倍增时间为20小时。
贴壁型还是悬浮型：
A375是一种贴壁型人黑色素瘤细胞系。
接种密度：
1 × 10⁴ 细胞/cm² 的细胞密度是 A375 细胞培养的理想值。贴壁细胞用 1×磷酸盐缓冲盐水（PBS）冲洗，并用传代溶液（Accutase）孵育。随后，向细胞中加入培养基并离心。收获的细胞用培养基重悬，并分装到新的培养瓶中进行培养。
生长培养基：
建议使用DMEM作为A375细胞的理想培养基，需补充10%胎牛血清（FBS）、4.5 g/L葡萄糖、1.5 g/L碳酸氢钠、4 mM L-谷氨酰胺及1.0 mM丙酮酸钠。A375培养基应每周更换2-3次。
培养条件：
A375黑色素瘤细胞在加湿培养箱（37°C）中培养，并保持5%的二氧化碳浓度。
保存：
冷冻的A375细胞应保存在液氮气相或电冻柜中，温度需低于-150°C。
冷冻流程与培养基：
使用CM-1或CM-ACF培养基对A375细胞系进行冷冻。为保护细胞存活率，采用缓慢冷冻法，使温度以每分钟1°C的速率逐渐降低。
解冻过程：
将冷冻的A375黑色素瘤细胞安瓿置于水浴中快速振荡40至60秒，直至仅剩一小块冰块。向细胞中加入新鲜培养基并离心，以去除冷冻培养基中的成分。将获得的细胞沉淀再次悬浮，并转移至新的培养瓶中。
生物安全等级：
A375细胞培养在生物安全一级实验室环境中进行操作和维护。
A375细胞系的优势与局限性
与其他细胞系一样，A375黑色素瘤细胞系兼具独特的优势与局限性，使其成为黑色素瘤癌症研究中一种有价值的工具。本节仅列举了A375细胞系的几个显著优缺点。
优势
A375细胞的主要优势如下：
- 黑色素瘤肿瘤模型：A375细胞系源自恶性黑色素瘤肿瘤，因此是研究黑色素瘤生物学及治疗干预措施的宝贵肿瘤模型。这些细胞表现出类似黑色素瘤的特性，例如高增殖率和侵袭性。
- 致瘤性：A375细胞具有很强的致瘤性，即能够形成肿瘤。有报道称，在用抗胸腺细胞血清（一种免疫抑制剂）处理的NIH Swiss小鼠中，A375细胞可诱发侵袭性无色素性黑色素瘤。
- 特征明确：A375 是一个遗传特征明确的细胞系。它具有与黑色素瘤相似的特定基因突变。A375 的突变包括 BRAF 基因改变，使其对 BRAF 特异性抑制剂敏感。因此，这种遗传特征使 A375 细胞成为研究潜在分子通路和靶向治疗的绝佳癌症研究工具。
局限性
与 A375 细胞相关的局限性包括：
- 体外局限性：A375是一种体外肿瘤模型。尽管它模拟了黑色素瘤的特征，但无法完全体现黑色素瘤肿瘤的复杂性。因此，将体外研究结果推广至临床研究时需谨慎。
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A375细胞系的研究应用
A375细胞系在癌症研究中具有广泛的应用。以下是A375细胞的常见应用领域。
- 癌症研究：A375细胞在黑色素瘤研究中应用广泛。研究人员利用这些细胞探究皮肤癌的生物学特性、发展过程及潜在的细胞信号传导机制，包括细胞增殖、迁移和侵袭。这也有助于研究人员发现新的分子治疗靶点。 林朱及其同事于2019年开展的一项研究使用了高度侵袭性的黑色素瘤细胞系A375，并发现了microRNA-3662在A375黑色素瘤细胞生长和侵袭中的作用。研究结果表明，microRNA-3662以ZEB1基因为靶点，并在A375肿瘤模型中调节体外和体内黑色素瘤细胞的生长[2]。 同样，2018年开展的研究发现，PI3K/AKT和MAPK/ERK通路参与了A375细胞系的增殖和转移[3]。
- 药物发现与测试：A375细胞系是测试和筛选潜在抗癌药物的有用体外肿瘤模型。 研究人员利用这些A375黑色素瘤细胞评估新型化疗药物、化合物及其他疗法的毒性和疗效。例如，一项研究探讨了源自葡萄柚的微囊和纳米囊泡对A375人黑色素瘤癌细胞的抗癌特性。结果表明，微囊和纳米囊泡可诱导细胞周期阻滞和凋亡，并抑制细胞增殖、迁移和侵袭过程中的基因表达[4]。
A375细胞：相关文献
此处列举了部分以A375细胞为研究对象的重要学术文献。
维生素D及其低钙血症类似物调节顺铂和达卡巴嗪在人类黑色素瘤A375细胞系中的抗癌特性
该研究于2019年发表于《肿瘤学杂志》。研究提出，维生素D及其类似物的联合治疗可增强顺铂和达卡巴嗪在A375黑色素瘤细胞中的抗癌活性。
选定芦荟品种凝胶及全叶提取物对A375细胞系的抗黑色素瘤效应体外评价
该研究于2022年发表于《草药学杂志》。本研究探讨了芦荟凝胶在A375黑色素瘤细胞中的抗黑色素瘤效应。
Fermitin家族成员2通过增强p-α-Pix与Rac1的结合来激活MAPK通路，从而促进黑色素瘤进展
发表于《Oncogene》（2021年）的这项研究提出，Fermitin家族成员2（FERMT2或kindlin-2）通过与p-α-Pix和Rac1结合从而激活MAPK，进而促进黑色素瘤进展。
FARP1通过调节皮肤黑色素瘤中的MAPK信号通路促进细胞增殖
发表于《美国皮肤病理学杂志》（2019年）的这项研究提出，FARP1可能促进皮肤黑色素瘤的发生与进展。因此，它可能成为有用的治疗靶点。
Phyllodium elegans提取物对人类癌细胞系的细胞毒性和凋亡作用
该研究论文发表于《生物工程》（2019年）。本研究探讨了植物Phyllodium elegans提取物对包括A375在内的人类癌细胞系的细胞毒性和凋亡活性。
A375细胞系相关资源：实验方案、视频及其他
以下是几个关于A375细胞的在线资源。
此处列出了 A375 细胞的细胞培养方案。
- A375细胞系：此链接包含有关A375细胞系培养与维护的有用信息，包括A375培养基以及冷冻和增殖A375细胞系的处理方法。
A375 细胞的常见问题 (FAQ)
参考文献
- Avram, S. 等，鸡胚绒毛尿囊膜及Balb/c裸鼠上A375人黑色素瘤模型的标准化。《肿瘤学报告》，2017年，38(1): 89-99页。
- Zhu, L. 等，微RNA-3662 靶向 ZEB1 并抑制高度侵袭性黑色素瘤细胞系 A375 的侵袭。《癌症管理与研究》，2019，11：第 5845-5856 页。
- 彭，X. 等，Oxyfadichalcone C 通过抑制 PI3K/Akt 和 MAPK/ERK 信号通路抑制黑色素瘤 A375 细胞的增殖和转移。《生命科学》，2018. 206: 35-44 页。
- 斯坦利（Stanly, C.）等，西柚来源的微囊和纳米囊泡在A375人黑色素瘤细胞系中表现出独特的代谢组学特征和抗癌活性。《细胞》，2020年，第9卷第12期：第2722页。