NCI-H1299-RFP 细胞
一般信息
| 说明 | 经过改造的NCI-H1299 RFP细胞含有DAPK1基因的报告基因,它不仅有助于研究特定基因的激活,还能更广泛地了解细胞对表观遗传药物的整体反应。通过使用一种名为基因表达上限分析(CAGE)的技术,研究人员能够详细了解基因组中转录起始位置在DNMTi(DAC)、HDACi(SAHA或SB939)或它们的组合治疗后的变化。这种方法不仅揭示了 DAPK1 基因预期的重新激活,而且还发现了新的转录起始位点,即治疗诱导的非注释 TSS(TINATs),尤其是在药物治疗的情况下。这些新的转录起始位点通常位于基因组中通常不产生蛋白质的区域,从而产生了可能编码蛋白质的新 RNA 分子。 进一步分析表明,这些新的 RNA 分子有时会与现有的 RNA 分子合并,形成所谓的 TINAT 外显子融合转录本。根据这些转录本的拼接方式,它们可以转化为新的非典型蛋白质。实验室技术已经证实了这一过程,证明这些转录本确实可以产生新的蛋白质形式。这些蛋白质可能会在细胞内发生异常相互作用,或被免疫系统识别为异物,从而有可能成为癌症治疗的新靶点。 这些 TINATs 的激活涉及 DNA 甲基化和组蛋白修饰的复杂变化,说明在药物治疗过程中这些表观遗传因素之间存在复杂的相互作用。特别是,联合使用 DAC 和 SB939 会产生更大的效果,比单独使用其中一种药物更能促进这些新转录本的表达。了解这些相互作用及其结果有助于阐明表观遗传疗法是如何改变细胞行为的,并为利用这些复杂的分子变化进行新的癌症治疗提供了可能性。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 肺部 |
| 疾病 | 大细胞癌 |
| 转移部位 | 原发肿瘤部位(肺) |
| 应用 | 表观遗传疗法研究;DAPK1基因重新激活;DNMTi和HDACi药物反应研究;治疗诱导的非注释转录起始位点(TINATs);CAGE转录组学;融合转录本分析;来自隐性启动子的非典型蛋白质合成;表观遗传药物联合用药筛选 |
特点
| 形态学 | 上皮样 |
|---|---|
| 细胞类型 | 上皮细胞 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | NCI-H1299-EGFP,具有G418抗性及沉默报告基因(DKFZ # P-1045)(Cytion货号 300272) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_XB25 |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:该NCI-H1299衍生物(DKFZ #P-1045)在DAPK1基因座中含有一个被稳定沉默的EGFP报告基因,可用于表观遗传再激活的检测。 含有G418抗性盒。此分类仅适用于德国境内,其他地区可能有所不同。 |
生物分子数据
处理
| 培养基 | RPMI 1640,w:2.0 mM 稳定谷氨酰胺,w:2.0 g/L NaHCO3(Cytion 文章编号 820700a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 加倍时间 | 约24至36小时 |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 分割比率 | 1 到 5 |
| 播种密度 | 1 至 3 × 10⁴ 个细胞/cm² |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
|
| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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