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Células Vero: Abrindo Caminhos na Pesquisa Viral e na Inovação em Vacinas

A linhagem celular Vero, um modelo de célula mamífera imortalizada derivada das células epiteliais renais do macaco verde africano, está na vanguarda da pesquisa em virologia, microbiologia e biologia celular e molecular. Sua ampla aplicação abrange o desenvolvimento de vacinas, triagens farmacêuticas e a exploração da biologia de vírus e parasitas, imunologia tumoral e estratégias imunoterapêuticas.

📋 Linha de células Vero — Informações rápidas
Meio de crescimento
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Tempo de duplicação
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Tipo de crescimento
Adere
Nível de biossegurança
BSL-1
Disponível na
Cytion — Encomende Vero

Origem e principais características das células Vero

Ao se aprofundar em uma linhagem celular como a Vero, surgem várias perguntas: O que exatamente são as células Vero? Como a linhagem celular Vero foi estabelecida? Qual é a história por trás do nome “Vero”? Esta seção tem como objetivo esclarecer a origem e as principais características das células Vero.

A origem da linha celular Vero remonta a 1962, tendo se originado das células epiteliais renais do macaco verde africano. Essa linha foi cultivada por Y. Kawakita e Yasumura na Universidade de Chiba, no Japão. O termo “Vero” deriva de “Verda reno” em esperanto, que significa “rim verde”, embora “Vero” também remeta à noção de “verdade”.

As células Vero normalmente formam monocamadas, mas podem se adaptar a culturas em suspensão, apresentando uma estrutura semelhante à epitelial. Essas células são caracterizadas por sua forma arredondada a alongada e um diâmetro médio de cerca de 17 µm. Notavelmente, as células Vero apresentam um número hipodiplóide de cromossomos, sendo o número modal de cromossomos 58 em aproximadamente 66% da população celular, embora existam variações com ploidiões mais elevados em uma pequena fração (1,7%) das células.

Clones de células Vero e suas propriedades únicas

Clones distintos derivados da linhagem de células Vero apresentam características únicas que os diferenciam da linhagem original. Entre eles, dois clones notáveis de células Vero são:

  • Linha celular Vero E6: Também conhecida como Vero C1008, esse clone tem origem nas células Vero 76 e foi isolado em 1979 por P.J. Price, utilizando uma técnica de diluição em placas de microtitulação. As células Vero E6 são particularmente adequadas para o cultivo de vírus que se replicam lentamente.

  • Células Vero 76: Originadas do rim de um macaco verde africano em 1968, essas células mantêm a morfologia epitelial característica das células Vero.

Essas variantes das células Vero, juntamente com a linhagem-mãe, continuam a ser fundamentais para o avanço da pesquisa virológica e o desenvolvimento de intervenções médicas, o que destaca sua importância na comunidade científica.

Tecido renal humano ao microscópio.

Informações sobre o cultivo

A cultura de células Vero, uma linhagem celular de macaco, requer familiaridade com parâmetros específicos, como tempo de duplicação, densidade de semeadura e o meio de crescimento adequado.

  • Tempo de duplicação populacional: O tempo de duplicação das células Vero é de cerca de 24 horas.

  • Aderência: As células Vero aderem às superfícies e, normalmente, formam monocamadas quando cultivadas.

  • Densidade de semeadura: Recomenda-se iniciar com uma densidade de semeadura de 1 x 10⁴ células/cm². Para cultivar células Vero aderentes, lave-as com PBS e trate-as com Accutase para desprendê-las. Após o desprendimento, centrifugue as células, ressuspende-as em meio fresco e transfira-as para novos frascos de cultura.

  • Meio de crescimento: Tanto o Ham’s F12 quanto o DMEM são meios adequados para o cultivo de células Vero. Estes devem ser suplementados com 2,5 mM de L-glutamina e 5% de soro fetal bovino (FBS) para promover o crescimento ideal. O meio deve ser renovado duas a três vezes por semana.

  • Condições de crescimento: As células Vero se desenvolvem bem a uma temperatura de 37 °C em uma atmosfera umidificada com 5% de CO₂.

  • Armazenamento: Para armazenamento de longo prazo, as células Vero devem ser mantidas a temperaturas abaixo de -150 °C, seja em um freezer de temperatura ultrabaixa ou na fase de vapor de nitrogênio líquido.

  • Processo de congelamento e meio: Para criopreservação, utilize CM-1 ou CM-ACF, ou o meio de crescimento com FBS e DMSO, como meio de congelamento. Empregue uma técnica de congelamento lento, diminuindo a temperatura gradualmente a 1 °C por minuto.

  • Processo de descongelamento: Descongele as células Vero imergindo o recipiente em um banho-maria a 37 °C e agitando-o suavemente por 40 a 60 segundos. Em seguida, dilua as células em meio fresco, centrifugue para remover o crioprotetor, ressuspende-as em meio de crescimento fresco e coloque-as em um novo frasco para recuperação e crescimento.

  • Nível de biossegurança: As células Vero devem ser manuseadas em um laboratório que atenda aos requisitos do nível de biossegurança 1.

Vero cells two and one days after subculturing (10x magnification).

Aplicações da linha celular Vero na pesquisa

A linha celular Vero possui inúmeras aplicações em pesquisa nas áreas de biologia celular e virologia. Aqui, discutimos algumas delas especificamente.

Células Vero na pesquisa viral e na produção de vacinas

As células Vero, derivadas de células renais do macaco verde africano, tornaram-se um elemento essencial no desenvolvimento de bioprocessos para a produção de vacinas contra diversos vírus, incluindo o poliovírus e o vírus da encefalite japonesa. Sua adaptabilidade tanto em culturas aderentes quanto em suspensão e sua ampla capacidade de suportar diversos vírus, inclusive patógenos como o vírus dos pequenos ruminantes, destacam sua importância no isolamento de vírus e no desenvolvimento de vacinas.

Inúmeros estudos têm utilizado células Vero para a produção de vacinas humanas. Por exemplo, um estudo notável publicado em 2019 demonstrou o uso de células Vero no desenvolvimento de uma vacina inativada contra o vírus da febre amarela [2].

As células Vero são comumente utilizadas em estudos de infecção viral, como um estudo realizado em 2020 que infectou células Vero com diferentes isolados do vírus SARS-CoV-2 para estudar as propriedades de crescimento do vírus [4]. Da mesma forma, outro estudo investigou as respostas celulares à infecção por SARS-CoV-2 utilizando cultura de células Vero [5].

O papel das células Vero na engenharia de tecidos e no desenvolvimento de bioprocessos a montante

Além da produção de vacinas, as células Vero contribuem para a engenharia de tecidos e para o campo mais amplo do desenvolvimento de bioprocessos, ressaltando a necessidade de pesquisas contínuas sobre suas propriedades e aplicações. A seleção de sublinhagens adequadas de células Vero é fundamental para maximizar seu potencial nas indústrias biotecnológica e farmacêutica.

Aplicação das células Vero em testes de eficácia e segurança de medicamentos

As células Vero são frequentemente empregadas em testes de medicamentos para avaliar a eficácia e a segurança de compostos farmacêuticos. Essas células são frequentemente consideradas um modelo padrão para células renais normais em estudos que investigam os efeitos citotóxicos de vários medicamentos e agentes terapêuticos. Por exemplo, uma pesquisa que comparou o impacto de extratos da raiz da planta Terminalia avicennioides tanto na HepG2 — uma linhagem celular de câncer de fígado — quanto nas células Vero, derivadas do epitélio renal de macaco, constatou que os extratos eram mais prejudiciais às células cancerosas do que às células normais.

Limitações das células Vero

Embora as células Vero sejam amplamente utilizadas, elas apresentam limitações, como a produção da toxina Vero e alterações genômicas que podem afetar certas aplicações. Compreender as sublinhagens específicas e as características genômicas das células Vero, incluindo a linhagem F6, é essencial para otimizar seu uso em diversos bioprocessos.

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Publicações científicas

A seguir, apresentamos algumas publicações de pesquisa recentes e mais citadas que tratam das células Vero.

Adaptação das células Vero ao crescimento em suspensão para a produção do vírus da raiva em diferentes meios sem soro

Este estudo, publicado na revista Vaccine Journal (2019), adaptou células Vero para crescerem em culturas em suspensão, a fim de produzir o vírus da raiva em alto título utilizando diversos meios sem soro.

Suscetibilidade do Toxoplasma gondii ao extrato etanólico de Tinospora crispa em células Vero

Este artigo foi publicado na revista Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine em 2019. O estudo propôs que o extrato etanólico da planta Tinospora crispa exerce um efeito prejudicial sobre o parasita Toxoplasma gondii. No entanto, ele é seguro para as células hospedeiras (a linhagem celular Vero).

Efeitos do extrato de folhas de Colchicum baytopiorum sobre a citotoxicidade e as vias de morte celular nas linhagens celulares C-4 I e Vero

Este artigo foi publicado pelo “Journal of the Balkan Union of Oncology” em 2021. Neste estudo, Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez e Gul Ozcan exploraram o efeito citotóxico do extrato de folhas de Colchicum baytopiorum nas linhas celulares C-4I e Vero.

O resveratrol inibe a replicação do coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) em células Vero cultivadas

Este estudo, publicado na revista Phytotherapy Research (2021), utilizou células Vero infectadas com SARS-CoV-2 para investigar o efeito terapêutico do resveratrol na replicação do vírus.

As estatinas lipofílicas inibem a produção do vírus Zika em células Vero

Este artigo publicado na revista *Nature Scientific Reports* (2019) propõe que as estatinas lipofílicas, ou seja, cerivastatina, lovastatina, fuvastatina, sinvastatina e mevastatina, podem impedir a produção do vírus Zika em células Vero.

Recursos para células Vero: protocolos, vídeos e muito mais

Protocolos de cultura celular

Perguntas frequentes sobre as células Vero

As células Vero são um tipo de linhagem celular derivada das células renais do macaco verde africano. Elas são amplamente utilizadas em bioprocessos para a produção de vacinas devido à sua capacidade de crescer bem em cultura e produzir com segurança uma variedade de vírus para a fabricação de vacinas.
Um banco de células Vero é um conjunto de células cuja pureza e segurança foram exaustivamente testadas. Essas células são armazenadas e utilizadas como material de partida consistente para a produção de vacinas, garantindo a padronização e a escalabilidade no processo de fabricação.
A vacina contra a encefalite japonesa protege contra o vírus da encefalite japonesa, que é cultivado em culturas celulares — geralmente utilizando células Vero — para a produção da vacina. O vírus é então inativado ou atenuado e purificado para a elaboração da vacina.
A vacina celular contra a raiva é produzida por meio do cultivo do vírus da raiva em células cultivadas, da inativação do vírus e, em seguida, do uso desse vírus para estimular o sistema imunológico a se proteger contra a infecção por raiva.
O sequenciamento do genoma é o processo de determinar a sequência completa do DNA do genoma de um organismo. No contexto das doenças virais, ele ajuda a identificar o material genético do vírus, compreender suas mutações e desenvolver tratamentos direcionados ou vacinas.
A perda de heterozigosidade em células cultivadas refere-se à redução da diversidade genética quando ambas as cópias de um cromossomo se tornam idênticas em um determinado local, devido a mutações ou deleções. Isso pode afetar as características da célula, incluindo os padrões de crescimento e a resposta a vírus.
Os vetores virais são ferramentas comumente utilizadas por biólogos moleculares para introduzir material genético nas células. Esse processo pode ser realizado por diversos motivos, como para estudar a função dos genes, tratar doenças genéticas ou desenvolver vacinas.
O isolamento do vírus consiste em separar uma amostra viral pura de uma amostra clínica. Essa é uma etapa fundamental para identificar o vírus responsável por uma infecção e desenvolver vacinas ou terapias adequadas.
O desenvolvimento de bioprocessos refere-se ao projeto, desenvolvimento e implementação de processos que envolvem o uso de células vivas ou de seus componentes para obter os produtos desejados, como vacinas ou proteínas terapêuticas.
A engenharia de tecidos permite criar modelos de tecidos em 3D que imitam a estrutura e a função dos tecidos in vivo, possibilitando o teste da eficácia e da segurança das vacinas em um ambiente controlado que se assemelha muito ao contexto natural de uma infecção.
O vírus da rubéola é o agente patogênico causador da rubéola, também conhecida como sarampo alemão. As pesquisas sobre esse vírus costumam utilizar células Vero, uma linhagem celular derivada de células renais de macacos verdes africanos, devido à sua alta eficiência na replicação do vírus. Essas células proporcionam um ambiente controlado para o estudo das características do vírus e o desenvolvimento de vacinas.
Uma suspensão de células Vero refere-se às células Vero que foram cultivadas em um meio líquido. Essa forma de cultura celular é fundamental para a pesquisa virológica, pois permite a produção de vírus em grande escala e facilita processos como estudos de cinética de infecção, desenvolvimento de vacinas e testes de toxicidade.

As sublinhagens de células Vero são cepas especializadas da linhagem original de células Vero, cada uma com características únicas para diferentes necessidades de pesquisa. Exemplos incluem:

  • Vero 76: Adaptada para crescimento em suspensão, utilizada na produção de vacinas.
  • Vero E6: Altamente suscetível ao vírus Ebola, utilizada em pesquisas sobre febre hemorrágica.
A imortalização das células Vero significa que elas foram modificadas para proliferar indefinidamente. Isso é importante na pesquisa, pois garante um suprimento contínuo e uniforme de células que podem ser utilizadas em experimentos sem a variabilidade causada pelo envelhecimento celular, melhorando assim a reprodutibilidade dos resultados experimentais.

Referências

  1. Ammerman, N.C., M. Beier‐Sexton e A.F. Azad, Crescimento e manutenção de linhagens celulares Vero. Protocolos atuais em microbiologia, 2008. 11(1): p. A. 4E. 1–A. 4E. 7.
  2. Pato, T.P., et al., Purificação do vírus da febre amarela produzido em células Vero para a fabricação de vacinas inativadas. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214–3220.
  3. Aliyu-Amoo, H., et al., Efeito antiproliferativo de extratos e frações da raiz de Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill e Perr. nas linhagens celulares HepG2 e Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): p. 1–7.
  4. Yao, P., et al., Isolamento e características de crescimento do SARS-CoV-2 em células Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348–350.
  5. Park, B.K., et al., Sinalização diferencial e produção de vírus em células Calu-3 e Vero após infecção pelo SARS-CoV-2. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.
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