Linha celular Neuro-2a
A Neuro-2a é uma linhagem celular neural derivada de camundongo amplamente utilizada em pesquisas na área de neurociência. Essas células são empregadas principalmente para o estudo do desenvolvimento neural, da diferenciação, da neurotoxicidade, das vias de sinalização celular e do crescimento axonal. Além disso, são utilizadas para fins de desenvolvimento e triagem de medicamentos.
Este artigo enfoca aspectos importantes das células de neuroblastoma Neuro-2a que podem ajudá-lo antes de iniciar o trabalho com elas. Ele abordará principalmente:
- Características gerais e origem das células Neuro-2a
- Informações sobre o cultivo da linhagem celular Neuro-2a
- Vantagens e desvantagens da linhagem celular Neuro-2a
- Aplicações de pesquisa da linhagem celular Neuro-2a
- Publicações científicas que abordam as células Neuro-2a
- Recursos para as células Neuro-2a: protocolos, vídeos e muito mais
Características gerais e origem das células Neuro-2a
Esta parte do artigo abordará o histórico e as características básicas da linha celular Neuro-2a que é essencial conhecer antes de trabalhar com ela. Aqui, você aprenderá: O que é a linha celular Neuro-2a? Qual é a origem da linha celular Neuro-2a ? O que é a diferenciação celular das células Neuro-2a? Qual é o tamanho de uma célula Neuro-2a? Qual é a morfologia das células Neuro-2a?
- As células Neuro-2a se originaram de um tumor espontâneo (neuroblastoma) de um camundongo albino (linhagem A). A linhagem celular foi estabelecida por R.J. Klebe e F.H. Ruddle.
- As células de neuroblastoma Neuro-2a apresentam morfologia neuronal e de células-tronco amebóides.
- O tamanho das células Neuro-2a é de 12 micrômetros de altura [1].
- O número de cromossomos das células Neuro-2a pode variar de 59 a 193, com um número modal de 95. O cariótipo dessas células de neuroblastoma é instável, variando entre 94 e 98 cromossomos.
Informações sobre o cultivo da linhagem celular Neuro-2a
As células Neuro-2a são amplamente utilizadas em laboratórios de pesquisa em neurociência. Antes de trabalhar com essas células, você deve conhecer as informações essenciais sobre cultura celular mencionadas abaixo. Isso pode ajudar a facilitar o processo. Você saberá: O que é um meio de cultura celular para Neuro-2a ? Como se cultiva células Neuro-2a? Qual é o tempo de duplicação das células Neuro-2a? Qual é a densidade de semeadura das Neuro-2a ? Qual é o protocolo de cultura das células Neuro-2a? Quais são os meios de cultura para as células Neuro-2a?
Pontos-chave para a cultura de células Neuro-2a
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células Neuro-2a é de aproximadamente 70 horas.
Adesivas ou em suspensão:
A Neuro-2a é uma linhagem celular aderente.
Densidade de semeadura:
A densidade de semeadura celular otimizada para a linhagem celular Neuro-2a é de 1 x 10⁴ células/cm². Para a semeadura, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato, livre de magnésio e cálcio (1x). Posteriormente, adiciona-se uma solução de passagem (Accutase) e as células são incubadas por 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Após a dissociação celular, adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas. O sedimento celular coletado é cuidadosamente ressuspenso e as células são transferidas para um recipiente de cultura para crescimento.
Meio de crescimento:
O EMEM é utilizado para a cultura de células Neuro-2a. Ele contém 10% de FBS, 2 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃, EBSS, 1 mM de piruvato de sódio e NEAA para o crescimento celular ideal. O meio deve ser substituído de 1 a 2 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As culturas de Neuro-2a são mantidas em uma incubadora umidificada a 37 °C conectada a um suprimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
As células devem ser armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C em um freezer elétrico de temperatura ultrabaixa ou na fase de vapor de nitrogênio líquido para armazenamento de longo prazo.
Processo de congelamento e meio:
Os meios CM-1 ou CM-ACF são utilizados para congelar as células Neuro-2a. As células são congeladas por meio de um processo de congelamento lento que permite apenas uma queda de 1 °C por minuto. Isso protege as células contra choques térmicos e mantém sua viabilidade.
Processo de descongelamento:
Para descongelar culturas congeladas, o frasco é colocado em um banho-maria a 37 °C por 40 a 60 segundos, até que reste apenas um pequeno pedaço de gelo. Em seguida, adiciona-se o meio de cultura e as células são submetidas à centrifugação. Essa etapa ajuda a remover os componentes do meio de congelamento. O sedimento celular é então ressuspenso, e as células são transferidas para um novo frasco cheio de meio de cultura. Posteriormente, as células são colocadas em uma incubadora a 37 °C por um período mínimo de 24 horas.
Nível de biossegurança:
É obrigatório que o manuseio e a manutenção das culturas de Neuro-2a sejam realizados em laboratórios com nível de biossegurança 1.
- Vantagens e desvantagens da linhagem celular Neuro-2a
- Aplicações da linha celular Neuro-2a na pesquisa
- Informações sobre o cultivo da linha celular Neuro-2a
- Características gerais e origem das células Neuro-2a
- 5. Publicações científicas que utilizam células Neuro-2a
- Recursos para as células Neuro-2a: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Vantagens e desvantagens da linhagem celular Neuro-2a
As células Neuro-2a apresentam algumas vantagens e desvantagens que as distinguem de outras linhagens celulares neuronais. Alguns prós e contras notáveis dessas células estão listados aqui.
Vantagens
As vantagens da linha celular de neuroblastoma murino Neuro-2a são:
-
Fácil de manter:
A linha celular Neuro-2a não está associada a procedimentos complexos ou intricados de cultura celular. É fácil cultivá-la e mantê-la em laboratórios de pesquisa.
-
Modelo de célula neuronal in vitro:
A Neuro-2a é um modelo de célula neuronal prático, amplamente utilizado por pesquisadores em estudos sobre o desenvolvimento e a diferenciação de neurônios.
Desvantagens
As desvantagens das células Neuro-2a são:
-
Origem murina:
O Neuro-2a é de origem murina, e os pesquisadores devem ter cautela ao extrapolar resultados de estudos baseados em camundongos para a saúde e as doenças humanas, já que a biologia de camundongos e de seres humanos pode diferir significativamente.
Aplicações de pesquisa da linhagem celular Neuro-2a
As células Neuro-2a oferecem diversas aplicações no campo da pesquisa em neurociência. Algumas utilizações promissoras dessa linhagem celular são discutidas a seguir:
- Desenvolvimento neural: A Neuro-2a é um modelo de célula neuronal in vitro amplamente utilizado para o estudo do desenvolvimento neuronal e de processos relacionados, como diferenciação, crescimento axonal e formação de sinapses. Um estudo realizado em 2020 utilizou células Neuro-2a para explorar o papel do microRNA-124 na diferenciação de células neuronais induzida pelo ácido retinóico [2]. Outro estudo investigou a expressão do receptor gama do ácido retinóico (RARG) e do miRNA-124 na linha celular de neuroblastoma (N2A). Esse estudo propôs que o RARG é alvo do miR-124 e suprime o crescimento dos neuritos [3].
- Neurotoxicidade: As células Neuro-2a também são utilizadas para avaliar os efeitos tóxicos de medicamentos, produtos químicos ou fatores ambientais sobre as células neurais. Por exemplo, um estudo conduzido por Zhihong Yin e colegas investigou a neurotoxicidade do bisfenol A (BPA), um produto químico ambiental, utilizando células Neuro-2a. Eles observaram que o BPA reprime a diferenciação e a proliferação das células neuronais ao comprometer sua integridade celular e sináptica [4].
- Triagem de medicamentos: As células Neuro-2a também são empregadas para avaliar as atividades terapêuticas de diversos medicamentos, compostos e produtos naturais. Por exemplo, um estudo utilizou células Neuro-2a para analisar o potencial antioxidante do extrato da planta Ginkgo biloba. Além disso, a pesquisa sugeriu que ele causa uma redução na agregação de Aβ e pode ser um tratamento potencial para a doença de Alzheimer [5].
5. Publicações científicas que utilizam células Neuro-2a
Aqui estão alguns artigos de pesquisa interessantes que abordam a linhagem celular Neuro-2a.
Este estudo, publicado no *Journal of Natural Medicines* em 2018, investigou os efeitos terapêuticos de alcamidas isoladas da pimenta-branca (P. nigrum) em células neuronais Neuro-2a.
Esta pesquisa, publicada na revista *Acta Biochimica et Biophysica Sinica* em 2020, propôs que o gene Nkx2.1 desempenha um papel importante no desenvolvimento do cérebro de camundongos ao regular a cascata de sinalização Shh.
Este artigo, publicado na revista Toxicology and Industrial Health (2023), propôs que o bisfenol A, um produto químico ambiental, desencadeia neurotoxicidade em células neuro-2a e causa disfunções sinápticas e do citoesqueleto.
Este artigo, publicado na revista Pharmaceuticals (2021), propôs que um medicamento, a hexarelina, modula as cascatas PI3K/AKT e MAPK em células de neuroblastoma (Neuro-2a) e inibe a apoptose dessas células induzida pelo peróxido de hidrogênio.
Este artigo de pesquisa publicado na revista Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) propôs que o extrato etanólico da fruta de Emblica officinalis suprime a neuroinflamação nas células Neuro-2a e, portanto, pode ser benéfico para doenças neuroinflamatórias.
Recursos para células Neuro-2a: protocolos, vídeos e muito mais
A seguir, apresentamos os recursos online disponíveis sobre as células Neuro-2a. Eles incluem o protocolo de cultura e transfecção das células Neuro-2a.
- Protocolo de transfecção de Neuro-2a: A Neuro-2a é um hospedeiro adequado para transfecção. Este link orientará você sobre o protocolo de transfecção dessa linhagem celular. A eficiência da transfecção da Neuro-2a varia de acordo com o reagente utilizado.
O link a seguir contém o protocolo de cultura de células Neuro-2a.
- Protocolo de cultura de células Neuro-2a: este link ajudará você a conhecer o protocolo de subcultura das células Neuro-2a.
- Células Neuro-2a: O site contém informações abrangentes sobre meios de cultura para células Neuro-2a, densidade de semeadura e protocolos para subcultura e manuseio de culturas criopreservadas e proliferativas.
Referências
- Lulevich, V., et al., A mecânica de célula única fornece um meio sensível e quantitativo para investigar as interações entre o peptídeo beta-amilóide e as células neuronais. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., Papel do miR-124 na regulação da diferenciação das células Neuro-2A induzida pelo ácido retinóico. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., O receptor gama do ácido retinóico é alvo do microRNA-124 e inibe o crescimento dos neuritos. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., A exposição ao bisfenol-A induziu neurotoxicidade e está associada às sinapses e ao citoesqueleto em células Neuro-2A. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., O extrato de Ginkgo biloba (EGb) inibe o estresse oxidativo em células Neuro-2A que superexpressam APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.