Linha celular MRC-5: fibroblastos pulmonares fetais humanos na pesquisa viral

As células MRC-5 são uma linha celular diploide humana amplamente utilizada na produção de vacinas virais, incluindo as contra hepatite A, poliomielite e raiva, bem como para fins de pesquisa na área biomédica. Elas são uma ferramenta indispensável para o estudo de infecções e doenças virais e têm aplicações significativas na triagem de medicamentos e em testes de eficácia. Este artigo abrangente fornecerá detalhes essenciais sobre a linha celular diploide humana MRC-5 para facilitar sua pesquisa.

Características gerais e origem das células MRC-5

Compreender a origem e as características gerais de uma linhagem celular é fundamental ao considerar sua aplicabilidade à pesquisa. Esta seção aborda as características fibroblásticas e a origem das células MRC-5. Você aprenderá sobre:

• Origem: Essas células primárias foram isoladas em 1966 por J.P. Jacobs a partir do tecido pulmonar de um feto do sexo masculino caucasiano com 14 semanas de gestação, e não em 1996, como afirmado anteriormente.
• Morfologia das células MRC-5: As células MRC-5 apresentam uma morfologia semelhante à dos fibroblastos.
• Diâmetro celular: O diâmetro de uma célula MRC-5 é de aproximadamente 18 μm.
• Cariótipo: As células MRC-5 apresentam um cariótipo diplóide normal, com o número modal de cromossomos sendo 46, típico de uma linhagem celular humana normal.

Diretrizes para o cultivo da linha celular MRC-5

Para cultivar a linha celular MRC-5 de maneira eficiente, é necessário um entendimento abrangente de seus requisitos específicos. A seguir, apresentamos pontos essenciais a serem considerados para um cultivo bem-sucedido:

• Tempo de duplicação: A linha celular MRC-5 tem um tempo de duplicação de aproximadamente 45 horas. Dependendo das condições de cultura, esse tempo pode variar entre 35 e 45 horas.

• Natureza aderente: As células fetais MRC-5 são aderentes, exigindo fixação a uma superfície para crescer, o que é típico das células fibroblásticas.

• Densidade celular ideal: Para a semeadura, recomenda-se uma densidade ideal de 1 x 10⁴ células/cm². O processo de passagem envolve a lavagem das células aderentes com PBS, o tratamento com Accutase por 8 a 10 minutos para desprendimento, seguido de centrifugação. O sedimento celular é então ressuspenso em meio de crescimento e transferido para novos frascos para a continuação do cultivo.

• Meio de crescimento: O meio de crescimento recomendado para as células MRC-5 é o EMEM, suplementado com 10% de soro fetal bovino, 2,2 g/L de NaHCO₃, 2 mM de L-glutamina e Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS).

• Condições de cultura: Mantenha as culturas em uma incubadora umidificada a 37 °C com 5% de CO₂ para simular condições fisiológicas.

• Condições de armazenamento: Para armazenamento de longo prazo, as células MRC-5 devem ser mantidas na fase de vapor de nitrogênio líquido ou a temperaturas abaixo de -150 °C.

• Congelamento e descongelamento: Utilize o meio de congelamento CM-1 ou CM-ACF, aplicando um método de congelamento lento para preservar a viabilidade celular. Para o descongelamento, aqueça as células em banho-maria a 37 °C até que reste apenas um pequeno pedaço de gelo; em seguida, transfira-as para meio fresco e centrifugue para remover o agente crioprotetor. Resuspenda as células em meio de crescimento fresco antes de semeá-las em novos recipientes de cultura.

• Nível de biossegurança: O manuseio e a manutenção das culturas de MRC-5 exigem um laboratório de nível 1 de biossegurança, garantindo o cumprimento dos protocolos de segurança.

Essas diretrizes foram elaboradas para auxiliar os pesquisadores na manutenção da linhagem celular MRC-5 em condições ideais, facilitando a obtenção de resultados confiáveis e reproduzíveis em suas investigações científicas.

Publicado: 2023 | Última revisão: maio de 2026

Linha celular MRC-5: vantagens e limitações

Assim como outras linhas celulares, as células diploides humanas MRC-5 apresentam diversas vantagens e desvantagens. Nesta seção, abordaremos algumas das mais notáveis, que podem ajudá-lo a decidir sobre seu uso em sua pesquisa.

Vantagens

As principais vantagens das células MRC-5 são:

• Linha celular normal derivada de humanos

  As células fetais MRC-5 são derivadas de tecido pulmonar humano normal, o que as torna uma ferramenta valiosa para pesquisadores que estudam doenças específicas do ser humano. Por ser uma linhagem celular diplóide normal, ela imita de perto a fisiologia e as respostas das células humanas, oferecendo um modelo mais preciso para pesquisas biomédicas e farmacêuticas em comparação com linhagens celulares cancerosas ou transformadas.

• Suscetibilidade a vírus

  As células fibroblásticas MRC-5 apresentam alta suscetibilidade a vários vírus humanos, incluindo aqueles que causam infecções e doenças respiratórias, como a gripe e os coronavírus. Essa característica as torna particularmente úteis para o estudo da patogênese viral, a triagem de medicamentos antivirais e o desenvolvimento de vacinas virais. A capacidade das células MRC-5 de suportar uma replicação viral eficiente permite que os pesquisadores compreendam os mecanismos subjacentes às infecções virais e avaliem a eficácia de possíveis terapêuticas.

Limitações

Vida útil limitada: Apesar de sua utilidade, a linhagem de fibroblastos MRC-5 tem uma vida útil limitada in vitro. Normalmente, elas passam por aproximadamente 42 a 46 duplicações populacionais antes de entrar em um estado de senescência replicativa. Essa capacidade replicativa limitada representa um desafio para experimentos de longo prazo que exigem cultura celular contínua. Os pesquisadores precisam considerar cuidadosamente a duração de seus experimentos e planejar-se adequadamente para evitar problemas relacionados a alterações no comportamento celular induzidas pela senescência. Além disso, a vida útil limitada das células MRC-5 exige reposição periódica com células recém-cultivadas, o que pode afetar a consistência e a reprodutibilidade dos experimentos.

Aplicações das células MRC-5 na pesquisa

Avanços na pesquisa antiviral e no desenvolvimento de vacinas utilizando células MRC-5

As células MRC-5, originárias do tecido pulmonar de um feto abortado com 14 semanas de gestação, tornaram-se um pilar no campo da pesquisa antiviral e do desenvolvimento de vacinas. Essas linhagens de células diplóides são essenciais para a produção da vacina contra o vírus da rubéola e da vacina Sabin contra o poliovírus. A origem em tecido humano torna as células MRC-5 um modelo excepcional para o estudo de comportamentos virais, como a replicação do poliovírus, os mecanismos de amplificação do SARS-CoV e a geração do vírus do herpes simplex em ambientes laboratoriais.

A suscetibilidade dessas células a vários vírus agilizou o processo de desenvolvimento de vacinas, fornecendo um substrato celular confiável para a replicação de vírus, como aqueles que causam sarampo e rubéola. A natureza não cancerosa das células MRC-5 é vital para garantir a segurança das vacinas, pois proporciona uma resposta indicativa do que ocorreria em células humanas.

Avanços significativos na compreensão da infecção viral e no aprimoramento de vacinas foram possibilitados por meio de pesquisas que utilizam células MRC-5. Um estudo de 2021, por exemplo, mostrou que a escala de produção do vírus da raiva poderia ser aumentada pela supressão de proteínas celulares específicas com inibidores de interferon, levando assim a maiores rendimentos do vírus [3]. Além disso, um estudo de 2019 que examinou a resposta das células MRC-5 à infecção pelo vírus da raiva destacou o potencial dos exossomos, do miR-423-5p e da via de sinalização do interferon (tipo I) como alvos para melhorar a produção da vacina contra a raiva [4].

Células MRC-5 na terapia celular e na pesquisa de doenças

As células MRC-5 também desempenham um papel fundamental no campo da terapia celular. Sua comparação com células estromais mesenquimais do cordão umbilical, especialmente em termos de potencial de diferenciação, despertou grande interesse para seu uso em aplicações terapêuticas. Declarações de posição sobre terapia celular têm reconhecido essas células por seu potencial terapêutico no tratamento de diversas condições. Por exemplo, elas se mostram promissoras na modulação das respostas do sistema imunológico em doenças como a esclerose múltipla e no aumento da atividade potenciadora dos megacariócitos, o que é importante para a produção de plaquetas.

Além de suas aplicações terapêuticas, as células MRC-5 enriqueceram o campo da pesquisa de doenças, particularmente na compreensão de terapêuticas virais e produtos antiprotozoários. Por serem uma linhagem celular refratária, as células MRC-5 têm uma vida útil limitada, mas suas contribuições para a pesquisa médica são substanciais. Elas são fundamentais na descoberta de agentes antivirais e são utilizadas em ensaios de colônias de megacariócitos para aprofundar nossa compreensão da formação das plaquetas sanguíneas. O legado duradouro das células MRC-5 continua a moldar o panorama da ciência médica, aprimorando nossa capacidade de lidar com doenças e condições complexas.

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Publicações sobre a linhagem celular MRC-5

A linha celular MRC-5, um elemento fundamental na pesquisa médica, tem sido objeto de diversos estudos importantes. Abaixo estão algumas publicações dignas de destaque que utilizaram essa linha celular em suas pesquisas:

• Determinação do circovírus suíno em células diploides humanas 2BS e MRC-5 para a produção
  de vacinas Publicada no Chinese Journal of Biologicals em 2019, esta investigação analisou a presença do circovírus suíno dos tipos I e II nas linhas celulares diploides humanas 2BS e MRC-5, destacando suas implicações para o desenvolvimento de vacinas.

• A supressão do circ-UQCRC2 atenuou a lesão induzida por lipopolissacarídeo em células MRC-5 pela via
  miR-326/PDCD4/NF-κB. Neste artigo de 2021 da revista *International Immunopharmacology*, os pesquisadores exploraram como o direcionamento ao RNA circular, especificamente o circ-UQCRC2, poderia mitigar o dano celular induzido por lipopolissacarídeo nas células MRC-5 por meio da via de sinalização miR-326/PDCD4/NF-κB.

• A kurarinona inibe a infecção pelo HCoV-OC43 ao prejudicar o-induzido em células
  pulmonares humanas MRC-5 Este estudo de 2020, publicado no Journal of Clinical Medicine, investigou a eficácia terapêutica da kurarinona contra o coronavírus humano HCoV-OC43 em células MRC-5, destacando o potencial do composto em modular osinduzidos pelo vírus.

• O aurapteno apresenta atividade antiviral contra o coronavírus humano OC43 em células
  MRC-5. Publicado na revista *Nutrients* em 2023, esta pesquisa postulou que o aurapteno exibe capacidades antivirais contra o coronavírus HCoV-OC43 quando testado em células diploides humanas MRC-5, apresentando uma nova via para estratégias antivirais.

• Os efeitos de extratos ricos em resveratrol de resíduos de poda de Vitis vinifera em células HeLa, MCF-7 e MRC-5: A interação
  entre apoptose, autofagia e necrose Esta investigação, publicada na revista “Pharmaceutics” em 2022, examinou o impacto de extratos ricos em resveratrol de Vitis vinifera em três linhagens celulares humanas, incluindo a linhagem MRC-5, fornecendo insights sobre as possíveis aplicações terapêuticas desses extratos no câncer e em outras doenças.

Essas publicações destacam a versatilidade da linhagem celular MRC-5 em facilitar pesquisas diversificadas e inovadoras nas áreas de virologia, oncologia e outras disciplinas, contribuindo significativamente para nossa compreensão das respostas celulares e dos potenciais terapêuticos.

Perguntas frequentes sobre as células MRC-5

Referências

1. Yang, X., et al., A inibição do interferon aumenta a produção em escala piloto do vírus da raiva em células MRC-5 diploides humanas. Viruses, 2021. 14(1): p. 49.
2. Wang, J., et al., A entrega mediada por exossomos do miR-423-5p induzível aumenta a resistência das células MRC-5 à infecção pelo vírus da raiva. International Journal of Molecular Sciences, 2019. 20(7): p. 1537.
3. McKenna, K.C., O uso de tecido fetal proveniente de abortos em vacinas e pesquisas médicas obscurece o valor de toda a vida humana. Linacre Q, 2018. 85(1): p. 13-17.
4. Jordan, I. e V. Sandig, Matriz e bastidores: substratos celulares para vacinas virais. Viruses, 2014. 6(4): p. 1672-700.