Células ARPE-19 – Análise especializada da pesquisa sobre células do epitélio pigmentar da retina com ARPE-19
As células ARPE-19 são células epiteliais pigmentares da retina de origem humana, surgidas espontaneamente. Elas são utilizadas para estudar diversos aspectos da biologia da retina, condições patológicas e intervenções terapêuticas (farmacologia). Este artigo tem como objetivo fornecer uma visão abrangente sobre as células imortalizadas ARPE-19. Serão discutidas, principalmente, as características gerais, as condições de cultura e as diversas aplicações de pesquisa dessa linhagem celular. Assim, ao ler este artigo, você obterá uma compreensão completa sobre:
- Meio de crescimento
- O meio DMEM ou Ham’s F12 é utilizado para cultivar a linha celular ARPE-19. O meio ARPE-19 é suplementado com 5% de FBS, 3,1 g/L de glicose, 15 mM de HEPES, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio e 1,2 g/L de NaHCO₃. O meio é substituído de 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células ARPE-19 é de aproximadamente 55 a 65 horas. Elas podem passar por até 48 duplicações populacionais.
- Tipo de crescimento
- A ARPE-19 é uma linhagem celular aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende ARPE-19
- Células ARPE-19: Origem e características gerais
- Linha celular ARPE-19: Informações sobre cultura
- Vantagens e limitações das células ARPE-19
- Aplicações da linha celular ARPE-19 na pesquisa
- Células ARPE-19: Publicações científicas
- Recursos para a linhagem celular ARPE-19: protocolos, vídeos e muito mais
- Células ARPE-19: Origem e características gerais
- Linha celular ARPE-19: Informações sobre cultura
- Vantagens e limitações das células ARPE-19
- Aplicações da linha celular ARPE-19 na pesquisa
- 5. Células ARPE-19: Publicações científicas
- Recursos para a linhagem celular ARPE-19: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Células ARPE-19: Origem e características gerais
Conhecer a origem e as características gerais de uma linha celular é fundamental para seu uso eficaz na pesquisa. Esta seção do artigo abordará todas as informações sobre a linha celular ARPE. Por exemplo: O que é a linha celular ARPE-19? Por que usar células ARPE-19? O que é a linha celular ARPE-19/HPV-16? As células ARPE-19 são imortais? Qual é a morfologia e o tamanho das células ARPE-19?
- A linha de células epiteliais pigmentares da retina imortalizadas, ARPE-19, foi derivada dos olhos de um homem de 19 anos que faleceu em consequência de um traumatismo craniano sofrido em um acidente. Ela foi estabelecida por Amy Aotaki-Keen em 1986.
- Essas células expressam marcadores de células epiteliais pigmentares da retina, ou seja, CRALBP e RPE-65, sugerindo que podem formar monocamadas estáveis caracterizadas por polaridade morfológica e funcional.
- As células ARPE-19 possuem uma morfologia semelhante à das células epiteliais.
- As células ARPE-19 apresentam, em sua maioria, um cariótipo normal, exceto por uma deleção e uma adição no braço longo dos cromossomos 9 e 19, respectivamente. Além disso, também são observadas algumas aneuploidias [1].
Linha celular ARPE-19: Informações sobre o cultivo
Informações básicas sobre cultura celular são essenciais para o manuseio e a manutenção adequados de uma linha celular. Esta seção ajudará você a conhecer os pontos-chave para a cultura da linha celular ARPE-19. Você aprenderá: qual é o tempo de duplicação da ARPE-19? Qual é a densidade de semeadura da ARPE-19? Qual é a densidade celular da ARPE-19? Qual é o meio de congelamento da ARPE-19? Como se cultiva a linha celular ARPE-19?
Pontos-chave para a cultura de células ARPE-19
Tempo de duplicação populacional:
O tempo de duplicação da ARPE-19 é de aproximadamente 55 a 65 horas. As células podem passar por até 48 duplicações populacionais.
Adesivas ou em suspensão:
A ARPE-19 é uma linhagem celular aderente.
Proporção de subcultivo:
A proporção de subcultivo da ARPE-19 é de 1:3 a 1:5. As células aderentes são lavadas com PBS 1x e incubadas com solução de dissociação, Accutase, por 8 a 10 minutos. As células desprendidas são adicionadas a meio fresco e centrifugadas. O sedimento celular foi novamente ressuspenso e transferido para um frasco de cultura contendo meio fresco.
Meio de crescimento:
Utiliza-se o meio DMEM ou Ham’s F12 para cultivar a linhagem celular ARPE-19. O meio ARPE-19 é suplementado com 5% de FBS, 3,1 g/L de glicose, 15 mM de HEPES, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio e 1,2 g/L de NaHCO₃. O meio é substituído de 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As células ARPE-19 são mantidas em uma incubadora umidificada a 37 °C com um suprimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
A linhagem celular pode ser armazenada na fase de vapor de nitrogênio líquido ou a temperaturas inferiores a -150 °C para preservar a viabilidade das células a longo prazo.
Processo de congelamento e meio:
Utilizam-se CM-1 ou CM-ACF como meios de congelamento para as células ARPE-19. Resumidamente, as células são congeladas por meio de um método de congelamento lento que permite uma redução de temperatura de apenas 1 °C por minuto e protege as células contra o choque térmico.
Processo de descongelamento:
As células são descongeladas em banho-maria pré-ajustado a 37 °C. Após restar um pequeno pedaço de gelo, as células são adicionadas a meio de cultura fresco e centrifugadas. Isso remove os elementos do meio de congelamento. Em seguida, o sedimento celular é ressuspenso e as células são transferidas para um frasco para cultura.
Nível de biossegurança:
As células ARPE-19 são manuseadas em laboratórios de biossegurança nível 1.
Vantagens e limitações das células ARPE-19
As células ARPE-19 são amplamente utilizadas em estudos de biologia celular da retina. Assim como outras células, elas também apresentam algumas vantagens e limitações. Algumas delas estão listadas nesta seção:
Vantagens
As principais vantagens da linhagem celular ARPE-19 incluem:
Modelo de célula retiniana
As células ARPE-19 se assemelham muito às células do epitélio pigmentar da retina humana, tornando-as ideais para o estudo de doenças da retina e testes de medicamentos.
Taxa de crescimento estável
Essas células apresentam crescimento estável e podem ser mantidas por longos períodos, facilitando experimentos de longo prazo.
Adequação à transfecção
A linhagem celular ARPE-19 é um excelente hospedeiro para transfecção, amplamente utilizada em estudos de expressão tanto transitória quanto estável.
Limitações
A seguir, apresentamos algumas limitações associadas à linha celular ARPE-19:
Diferenciação limitada
A diferenciação das células ARPE-19 é limitada em comparação com as células retinianas primárias. Isso pode afetar certos estudos relacionados à diferenciação.
Aplicações da linha celular ARPE-19 na pesquisa
A linha celular ARPE-19 possui inúmeras aplicações na pesquisa da retina. Aqui, abordamos alguns usos específicos e significativos dessa linha celular do epitélio pigmentar da retina na pesquisa.
- Pesquisa sobre doenças da retina: as células ARPE-19 oferecem insights valiosos sobre a patogênese da retina. Pesquisadores utilizam essas células para investigar os mecanismos das doenças e possíveis tratamentos. Um estudo realizado em 2020 descobriu que o RNA circular hsa_circ_0041795 interage com o miRNA-646 e o VEGFC para facilitar a lesão induzida por níveis elevados de glicose nas células do epitélio pigmentar da retina humana ARPE-19. Portanto, o estudo propõe esse RNA circular como um alvo terapêutico e diagnóstico eficaz para combater a retinopatia diabética [2]. Da mesma forma, Jing Yang e colegas utilizaram células ARPE-19 e forneceram insights sobre a patogênese da retinopatia diabética. Eles observaram que a inibição do lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) pode suprimir a resposta inflamatória e a transição epitelial para mesenquimal em células ARPE-19 tratadas com altos níveis de glicose [3].
- Testes de medicamentos: as células ARPE-19 são utilizadas para avaliar a eficácia e a segurança de medicamentos e compostos, auxiliando no desenvolvimento de tratamentos ou terapias para doenças da retina. Por exemplo, um estudo realizado em 2019 constatou os efeitos protetores dos bioativos de Syzygium malaccense contra o estresse induzido pelo peróxido de hidrogênio em células epiteliais pigmentares da retina humana, ARPE-19 [4]. Posteriormente, um estudo identificou o papel terapêutico do extrato de Prunella vulgaris var. L contra lesões induzidas pela luz azul em células ARPE-19 e em modelo murino [5].
5. ARPE-19 cells: Research publications
The following are some interesting research publications featuring the ARPE-19 retinal pigment epithelial cells.
Evaluation of microRNA responses in ARPE-19 cells against the oxidative stress
This research article was published in 2018 in the Cutaneous and Ocular Toxicology. This study evaluated the miRNA expression in response to oxidative stress induced in ARPE-19 human retinal pigment epithelial cells via hydrogen peroxide treatment.
ARPE-19 conditioned medium promotes neural differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells
This publication in the World Journal of Stem Cells (2021) proposed that ARPE-19 cells conditioned media contains growth factors that encourage the neural differentiation of mesenchymal stem cells derived from adipose tissues.
This study was published in the International Journal of Molecular Sciences (2019). It states that quercetin protects IL-1β-stimulated release of chemokines in ARPE-19 cells by preventing the activation of MAPK and NF-κB cascades to improve the inflammatory response.
This research article was published in the International Journal of Molecular Sciences (2018). This study evaluated the possible effects of oxidative stress and inflammation on SIRT1 (Sirtuin 1) and DNMTs (DNA methyltransferases) functions as well as on LINE-1 (long interspersed nuclear element-1) methylation in ARPE-19 cells.
This article in Antioxidants (2022) found that Chrysanthemum boreale Flower Extracts exert protective effects against N-retinylidene-N-retinylethanolamine (A2E) induced retinal damage in ARPE-19 cells.
Resources for ARPE-19 cell line: Protocols, Videos, and More
ARPE-19 is a widely used retinal epithelial cell line. The available resources covering ARPE-19 cell culturing and transfection protocols are listed here:
- ARPE-19 transfection: This video is a step-by-step guide to learning transfection protocol for the ARPE-19 cell line.
Here are some resources describing the ARPE-19 cell culture protocol:
- ARPE-19 cell culture protocol: This link contains information about ARPE-19 cell culturing and maintenance. It comprises information about the ARPE-19 medium, culturing conditions, protocols for subculturing, and handling proliferative and cryopreserved cultures.
References
- Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. and X. Kang, hsa_circ_0041795 contributes to human retinal pigment epithelial cells (ARPE 19) injury induced by high glucose via sponging miR-646 and activating VEGFC. Gene, 2020. 747: p. 144654.
- Yang, J., et al., Silenced SNHG1 Inhibited Epithelial-Mesenchymal Transition and Inflammatory Response of ARPE-19 Cells Induced by High Glucose. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Protective effect of myricetin derivatives from Syzygium malaccense against hydrogen peroxide-induced stress in ARPE-19 cells. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
- Kim, J., K. Cho, and S.-Y. Choung, Protective effect of Prunella vulgaris var. L extract against blue light induced damages in ARPE-19 cells and mouse retina. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: p. 622-631.