תאי NCI-H1299-RFP

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 300272

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	תאי NCI-H1299 RFP, שעברו שינוי כדי לכלול גן DAPK1, אינם שימושיים רק לחקר הפעלת גנים ספציפיים, אלא גם מספקים הבנה רחבה יותר של האופן שבו תאים מגיבים לתרופות אפיגנטיות באופן כללי. באמצעות טכניקה המכונה Cap Analysis of Gene Expression (CAGE), הצליחו החוקרים לפרט את השינויים במיקום תחילת השעתוק בגנום בתגובה לטיפולים ב-DNMTi (DAC), HDACi (SAHA או SB939) או שילובים שלהם. שיטה זו חושפת לא רק את ההפעלה הצפויה של הגן DAPK1, אלא גם את הופעתם של אתרי התחלת שעתוק חדשים, המכונים TSSs (TINATs) שאינם מתועדים המושרים על ידי טיפול, במיוחד תחת טיפול תרופתי. אתרי התחלה חדשים אלה ממוקמים בדרך כלל באזורים בגנום שאינם מייצרים בדרך כלל חלבונים ומובילים ליצירת מולקולות RNA חדשות שעשויות לקודד חלבונים. ניתוח נוסף מראה כי מולקולות RNA חדשות אלה יכולות לעיתים להתמזג עם מולקולות קיימות כדי ליצור מה שמכונה "תמלילי TINAT-exon fusion". בהתאם לאופן שבו תמלילים אלה מחוברים, הם יכולים להתורגם לחלבונים חדשים ולא טיפוסיים. תהליך זה אושר באמצעות טכניקות מעבדה המדגימות שתמלילים אלה אכן יכולים להוביל לייצור צורות חלבון חדשות. חלבונים אלה עשויים לקיים אינטראקציה חריגה בתוך התא או להיות מזוהים כזרים על ידי מערכת החיסון, ובכך להציע יעדים חדשים לטיפול בסרטן. הפעלת ה-TINATs כרוכה בשינויים מורכבים הן במתילציה של ה-DNA והן בשינויים בהיסטונים, מה שממחיש את האינטראקציה המורכבת בין גורמים אפיגנטיים אלה תחת טיפול תרופתי. בפרט, השימוש המשולב ב-DAC ו-SB939 מראה השפעה גדולה יותר, ומגביר את הביטוי של תמלילים חדשים אלה יותר מאשר כאשר כל אחת מהתרופות משמשת לבדה. הבנת אינטראקציות אלה ותוצאותיהן מסייעת להבהיר כיצד טיפולים אפיגנטיים משנים את התנהגות התאים ופותחת אפשרויות לטיפולים חדשים בסרטן המנצלים שינויים מולקולריים מורכבים אלה.
אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	קרצינומה של תאים גדולים
אתר גרורתי	מיקום הגידול הראשוני (ריאה)
יישומים	מחקר בתחום הטיפול האפיגנטי; הפעלה מחדש של הגן DAPK1; מחקרים על התגובה לתרופות מסוג DNMTi ו-HDACi; אתרי התחלת שעתוק (TSS) שאינם מתועדים, הנוצרים כתוצאה מהטיפול (TINATs); טרנסקריפטומיקה בשיטת CAGE; ניתוח תמלילים משולבים; ייצור חלבונים לא טיפוסיים ממקדמי שעתוק נסתרים; סינון שילובים של תרופות אפיגנטיות

מורפולוגיה	דמוי אפיתל
סוג התא	תאי אפיתל
תכונות צמיחה	דבק

ציטוט	NCI-H1299-EGFP, עם עמידות ל-G418 ודיווח מושתק (DKFZ # P-1045) (מספר קטלוג Cytion 300272)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_XB25
סטטוס GMO	GMO-S1: נגזרת זו של NCI-H1299 (DKFZ #P-1045) מכילה רפורט EGFP המושתק באופן יציב בלוקוס DAPK1, מה שמאפשר קריאת נתונים על הפעלה מחדש אפיגנטית. קיימת קלטת עמידות ל-G418. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים.

תרבית ביניים	RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS
חומר מפרק	אקוטאז
זמן הכפלה	כ-24 עד 36 שעות
תת-תרבות	הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
יחס פיצול	1 עד 5
צפיפות זריעה	1 עד 3 × 10⁴ תאים/סמ"ר
חידוש נוזלים	2 עד 3 פעמים בשבוע
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

מוצרים קשורים

תאי NCI-H196

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	קרצינומה של תאים קטנים בריאות

‏550.00 ‏$*

תאי NCI-H295R

אורגניזם	אדם
רקמה	בלוטת יותרת הכליה
מחלה	קרצינומה

‏450.00 ‏$*

תאי NCI-H3122

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	אדנוקרצינומה

‏550.00 ‏$*

תאי NCI-H1299

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	קרצינומה

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-H460

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	קרצינומה של תאים גדולים בריאות

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-N87

אורגניזם	אדם
רקמה	קיבה
מחלה	אדנוקרצינומה צינורית בקיבה

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-H1975

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	אדנוקרצינומה של הריאה

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-H716

אורגניזם	אדם
רקמה	תוספתן
מחלה	אדנוקרצינומה של התוספתן

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-H1703

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	קרצינומה של תאי קשקש בריאות

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-H2228

אורגניזם	אדם
רקמה	ריאה
מחלה	אדנוקרצינומה של הריאה

‏395.00 ‏$*

תאי NCI-H1299-RFP

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות וניתוח מולקולרי