Publié : 2023 | Dernière révision : mai 2026

Comprendre le « nombre de passages »

La notion de « numéro de passage » est au cœur de la culture cellulaire et désigne le nombre de fois où une lignée cellulaire a été repiquée ou transférée dans un nouveau milieu de culture après sa réactivation initiale à la suite d’une cryoconservation ou de sa réception d’une banque de cellules de référence. Cet indicateur est essentiel pour retracer la lignée et l’historique d’une culture cellulaire.

Aperçu du processus

Dans la pratique courante de la culture cellulaire, lorsque les cellules atteignent une certaine densité, elles sont transférées dans un nouveau milieu afin de maintenir leur croissance et d’éviter la surconfluence. Chacun de ces transferts est consigné comme un passage.
Traditionnellement, lorsque nous recevions une lignée cellulaire, par exemple au 60e passage de la part du déposant, nous reprenions à partir de ce numéro de passage, en l’incrémentant à chaque sous-culture. Cette pratique, bien qu’elle permette de conserver un fil conducteur historique, entraînait souvent des nombres de passages élevés dès le départ. Compte tenu de l’utilisation prolongée, souvent pendant des décennies, de certaines lignées cellulaires, comme la lignée HeLa établie en 1951, il n’est pas possible de déterminer le nombre total de passages depuis la création de la lignée cellulaire.
Afin d’améliorer la clarté et la qualité de nos processus de culture cellulaire, nous avons revu cette approche au début de 2023. Désormais, lorsque nous démarrons une culture à partir d’un nouveau flacon, quel que soit le nombre de passages indiqué par le déposant, nous remettons le compteur à zéro et recommençons à compter à partir du passage un pour chaque lot fabriqué.

Justification

Le repiquage est une procédure essentielle pour garantir la santé et l’utilité des cultures cellulaires à des fins de recherche. Lorsque les cellules se multiplient de manière excessive, elles subissent une inhibition de contact, ce qui réduit leur taux de prolifération et peut nuire aux résultats expérimentaux. Pour atténuer ces problèmes, Cytion met en œuvre des contrôles rigoureux sur les densités cellulaires auxquelles la repiquage a lieu, maintenant ainsi un faible nombre de passages pendant la fabrication de ses lignées cellulaires. Cette précaution permet d’éviter les effets néfastes d’un nombre excessif de passages, tels que les anomalies morphologiques, les variations du taux de croissance et la dérive génétique, qui peuvent entraîner des différences marquées par rapport à l’état d’origine des cellules. Des périodes prolongées de repiquage peuvent également accroître le risque de contamination microbienne.

Notre engagement

Nous veillons à ce que les cellules fournies aux chercheurs soient aussi proches que possible de la composition génétique et des caractéristiques phénotypiques d’origine, ce qui renforce la fiabilité des données expérimentales. De plus, en documentant méticuleusement chaque passage, Cytion contribue à la traçabilité et à la reproductibilité de la recherche, un engagement qui reflète les normes élevées de pratique en matière de culture cellulaire. Nous encourageons les chercheurs à tenir des registres précis du nombre de passages, tant sur les récipients de culture que dans leurs cahiers de laboratoire, afin de disposer d’une référence sur l’état et l’historique de leurs cultures cellulaires.

Conseils et erreurs courantes

Il est essentiel de suivre le protocole correct, mais il est tout aussi important de comprendre les pièges courants. Les procédures de culture cellulaire sont sensibles aux moindres écarts au niveau de la technique, du timing et de la qualité des réactifs. Les conseils suivants reflètent les pratiques exemplaires recommandées par l’équipe scientifique de Cytion, fondées sur une vaste expérience en culture cellulaire.

Préchauffez toujours les réactifs à 37 °C avant utilisation afin de minimiser le choc thermique subi par les cellules.
Travaillez rapidement mais avec soin — réduisez au minimum le temps que les cellules passent à l’extérieur de l’incubateur.
Utilisez des réactifs certifiés et testés pour les mycoplasmes afin d’éviter toute contamination susceptible de compromettre les résultats expérimentaux.
Consignez chaque étape, y compris le numéro de passage, la date et les observations sur la morphologie cellulaire.
Validez votre protocole à l’aide d’une petite expérience pilote avant de passer à une plus grande échelle afin d’éviter de gaspiller des réactifs coûteux.

Réactifs Cytion recommandés

Cytion propose une gamme de réactifs de culture cellulaire validés, spécialement conçus pour ce protocole. Tous les réactifs ont été testés pour vérifier leur performance avec des lignées cellulaires couramment utilisées et sont accompagnés d’une documentation complète. Visitez le site cytion.com/Media-Reagents pour découvrir la gamme complète.